延邊地區(qū)大米中黃曲霉毒素B1的采樣檢測(cè)分析

白龍律　武倫鵬　姚蘊(yùn)恒　陶曉杰,朱傳翔　樸文香

摘 要：目的：分析延邊大米黃曲霉毒素B1含量水平。方法：采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定204個(gè)樣本大米中黃曲霉毒素B1含量，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分別對(duì)2016-2018年和4類抽樣地點(diǎn)進(jìn)行單因素方差分析。結(jié)果：2016-2018年，黃曲霉毒素B1含量均值分別為1.325、1.203、1.139 μg·kg-1，遠(yuǎn)低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量

10 μg·kg-1，無(wú)超標(biāo)樣品;4類不同抽樣地點(diǎn)黃曲霉毒素B1含量均值分別為：市場(chǎng)和小散糧油店2.583 μg·kg-1、

中小超市1.305 μg·kg-1、大超市0.576 μg·kg-1、企業(yè)0.459 μg·kg-1。通過方差分析發(fā)現(xiàn)，黃曲霉毒素B1在年份之間差異不顯著，在抽檢地點(diǎn)之間差異顯著。結(jié)論：延邊大米總體情況良好。

關(guān)鍵詞：黃曲霉毒素B1;大米;酶聯(lián)免疫吸附法;統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

Abstract：Objective： Analyzed the content of aflatoxin B1 in Yanbian rice. Methods： A total of 204 rice samples by using ELISA determination of aflatoxin B1 content in rice samples， using the single factor ANOVA test in statistical method respectively to 2016—2018 and 4 sites of sampling sites. Results： The mean value of aflatoxin B1 was 1.325 μg·kg-1，

1.203 μg·kg-1， 1.139 μg·kg-1， which was well below the national standard limit of 10 μg·kg-1. 4 sites of aflatoxin B1 content mean different sampling sites： markets and small grain stores 2.583 μg·kg-1， small and medium-sized markets 1.305 μg·kg-1， supermarket 0.576 μg·kg-1， rice enterprises 0.459 μg·kg-1. According to variance analysis， aflatoxin B1 showed no significant difference between years， but significant difference between sampling sites. Conclusion： The rice in Yanbian is generally in good condition.

Key words：Aflatoxin B1; Rice; ELISA; Statistical analysis

中圖分類號(hào)：TS213.3

黃曲霉毒素是由真菌屬產(chǎn)生的次生代謝物，屬于霉菌毒素，其中黃曲霉和黑曲霉這兩種霉菌易在食物和飼料中被檢測(cè)到[1]。黃曲霉毒素被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）列為第一類致癌物[2]，其中黃曲霉毒素B1和赭曲霉毒素（OTA）在所有黃曲霉毒素中毒性最高[3]。由于黃曲霉毒素危害人類健康，所以規(guī)定了黃曲霉毒素含量在食品和飼料中的限定范圍。目前，世界不同國(guó)家的黃曲霉毒素B1的限定值都被設(shè)定在范圍1～20 μg·kg-1[4]。歐洲聯(lián)邦法規(guī)規(guī)定谷物及其衍生品的黃曲霉毒素B1最高限量分別為2 μg·kg-1和4 μg·kg-1，嬰兒食品為0.1 μg·kg[5]。

而我國(guó)GB 2761-2017《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》中規(guī)定，大米中黃曲霉毒素B1最高限量為10 μg·kg-1[6]。大米作為谷物中的一種，在加工后，由于運(yùn)輸或存儲(chǔ)不當(dāng)，易滋生霉菌產(chǎn)生霉菌毒素[7]。

延邊大米是中國(guó)優(yōu)質(zhì)大米之一，大米顆粒飽滿、晶瑩如玉，米飯柔軟適口、醇香綿長(zhǎng)、黏性適度，2006年，延邊大米被列入國(guó)家地理標(biāo)志產(chǎn)品保護(hù)名錄[8]。本研究對(duì)延邊朝鮮族自治州各地區(qū)生產(chǎn)的大米進(jìn)行檢測(cè)，通過對(duì)不同年度和不同抽樣來(lái)源的大米中黃曲霉毒素B1含量綜合分析，客觀地分析評(píng)價(jià)延邊大米黃曲霉毒素B1含量總體情況。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源

政府監(jiān)管部門抽樣送檢，抽樣情況見表1。

1.2 主要儀器和試劑

酶標(biāo)儀（BioTek-Epoch）;黃曲霉毒素B1酶聯(lián)免疫定量測(cè)試盒（ELISA kit）購(gòu)自江蘇省蘇微微生物研究有限公司;甲醛;純化水。

1.3 檢測(cè)方法

采用酶聯(lián)免疫吸附法。

（1）樣品制備。稱取已粉碎的樣品于100 mL具塞三角瓶中，準(zhǔn)確加入適量體積的甲醇-水（1+1）溶液，振搖15 min，過濾，棄去1/4初濾液，收集試樣濾液，此液位樣品提取液。根據(jù)樣品的國(guó)家允許量標(biāo)準(zhǔn)（大米中AFB1含量≤10 μg·kg-1），取0.1 mL樣品提取液和0.1 mL A試劑（樣品稀釋液），此液為待測(cè)樣液。

（2）樣品測(cè)定。將試劑盒平衡至室溫，依次加入不同濃度的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液及待測(cè)樣液，輕輕振搖，使各孔中的反應(yīng)物混勻。將反應(yīng)板放入37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育30 min后，取出反應(yīng)板，甩掉反應(yīng)液，拍干，洗板4次。加入顯色劑37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中顯色15 min，加入終止液，搖勻后用酶標(biāo)測(cè)定儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

運(yùn)用IBM Statistics SPSS 20.0對(duì)檢驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，分別對(duì)2016-2018年3年4類抽樣地點(diǎn)采用單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同年度大米樣品中黃曲霉毒素B1含量比較

由表2知，2016年、2017年、2018年這3年的黃曲霉毒素B1含量均值分別為1.325 μg·kg-1、1.203 μg·kg-1、

1.139 μg·kg-1，數(shù)據(jù)間相差不大，經(jīng)SPSS軟件方差分析得到顯著性水平P=0.45>0.05，見表3。說明黃曲霉毒素B1含量在不同年份間無(wú)顯著性差異。

2.2 4類抽樣地點(diǎn)大米樣品中黃曲霉毒素B1含量比較

由表4知，4類地點(diǎn)抽取的樣品的均值相差較大，其中，市場(chǎng)和散糧油店2.583 μg·kg-1、中小超市1.305 μg·kg-1、

大超市0.576 μg·kg-1、大米企業(yè)0.459 μg·kg-1。經(jīng)ANOVA分析得到顯著性水平P<0.05，說明4組樣品間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。如表5所示直觀看出4者之間的差異。

3 結(jié)論

2016-2018連續(xù)3年204個(gè)大米樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黃曲霉毒素B1含量均值分別為1.325 μg·kg-1、

1.203 μg·kg-1、1.139 μg·kg-1，遠(yuǎn)低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2761-

2017《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量》中規(guī)定的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量10 μg·kg-1，黃曲霉毒素B1含量均值在年份之間差異不顯著，且沒有發(fā)現(xiàn)超標(biāo)樣品。對(duì)4類不同地點(diǎn)抽樣檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，黃曲霉毒素B1含量均值由高到低分別為：市場(chǎng)和散糧油店2.583 μg·kg-1、中小超市

1.305 μg·kg-1、大超市0.576 μg·kg-1、企業(yè)0.459 μg·kg-1。

抽檢地點(diǎn)之間差異顯著，其中市場(chǎng)和散糧油店黃曲霉毒素B1含量均值明顯高于其他3類抽樣地點(diǎn)，可能是由于儲(chǔ)存不當(dāng)，使大米處于陰濕環(huán)境易受黃曲霉污染[9]。綜上所述，延邊地區(qū)大米黃曲霉毒素B1污染程度較低，總體情況良好。

參考文獻(xiàn)：

[1]Desjardins A. Mycotoxins：Risks in Plant，Animal，and Human Systems[J]. AAHE-ERIC/Higher Education Research Report，2003，9（7）：48-50.

[2]International Agency for Research on Cancer （IARC）.Some Traditional Herbal Medicines Some Mycotoxins， Naphthalene and Styrene[J].Iarc Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans，2002，82：1-556.

[3]Rodríguez A，Rodríguez M，Martín A，et al.Evaluation of hazard of the aflatoxin B1， ochratoxin A and patulin production in dry-cured ham and early detection of producing moulds by qPCR[J].Food Control，2012，27（1）：118–126.

[4]FAO.Worldwide Regulations for Mycotoxins in Food and Feed in 2003[Z].2004.

[5]The European Commission Regulation for maximum levels of aflatoxins in foodstuffs[Z].2010.

[6]國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.GB 2761-2017食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.

[7]唐 笑，任文潔，陳 波，等.江西省大米中黃曲霉毒素B1分析及膳食暴露評(píng)估[J].食品科技，2015，40（3）：315-319.

[8]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.關(guān)于批準(zhǔn)對(duì)延邊大米實(shí)施地理標(biāo)志產(chǎn)品保護(hù)的公告[Z].2006-12-31.

[9]孫有娥，吳培慧，郝媛媛，等.不同的儲(chǔ)存條件對(duì)大米中黃曲霉毒素B1的影響[J].池州學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，28（3）：37-38.