饒 瑤
(江西科技學院,江西 南昌 330098)
雞腿菇(Coprinus comatus),學名“毛頭鬼傘”,通體較白,菌桿細長,形如雞腿,而且菌肉也與雞絲形態(tài)相似,因此而得名,但其本身卻并無雞肉味。雞腿菇味道鮮美、肉質(zhì)細膩,烹飪時久煮不爛,口感滑嫩,是倍受青睞的美食;同時,雞腿菇也是一種藥用菌,具有降糖、通便消渴的功效,對糖尿病、痔瘡等有良好的治療效果,還具有安神助眠、提高人體免疫力的作用,對運動人群還具有抗氧化、抗疲勞的功效[1]。這些功效主要得益于雞腿菇中含有的多糖,雞腿菇多糖具有抗菌、抗氧化的作用,可以提高人體耐缺氧能力,降低血液的粘稠度,增加心肌收縮力[2]。因此,常被用于運動員訓練后的恢復和保健,對運動員的身體健康,保持運動機能具有重要的作用。雞腿菇多糖雖然在運動恢復和提升免疫力方面有一定功效,但其作用機理和臨床研究還不成熟,而且對于大分子的雞腿菇多糖,其組成成份比較復雜,多糖的穩(wěn)定性和抗氧化活性還需要進一步研究。對雞腿菇多糖的穩(wěn)定性和對運動員身體的抗氧化性活性開展研究,通過試驗討論雞腿菇多糖對減輕疲勞的影響。
鄰二氮菲,成都化學試劑廠;硫酸亞鐵、過氧化氫,西安化學試劑廠;95%乙醇,天津市百世化工有限公司;DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼),日本東京化成工業(yè)株式會;以上試劑均為分析純。蒸餾水,濟南青玉元商貿(mào)有限公司;磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉,西安化學試劑廠;以上試劑均為化學純。
雞腿菇多糖樣品溶液自行配制,使用南京植佰萃生物科技有限公司產(chǎn)的雞腿菇多糖粉末(多糖含量為50%)。
紫外可見分光光度計,上海元析儀器有限公司;電熱恒溫水浴鍋,北京化玻聯(lián)醫(yī)療器械有限公司;JA5003分析天平,上海精科天平有限公司;PHS-3C型pH計,上海精密科學儀器有限公司;FA2004電子天平,上海精密科學儀器有限公司;RHP-225恒溫(干燥)箱,東莞市環(huán)瑞環(huán)境測試設備有限公司。
自由基又稱游離基,是一種含有非偶電子的原子團[3],其化學反應的活性極高,由于自由基缺少電子,因此總是在人體中到處搶奪人體細胞的電子,使正常細胞發(fā)生畸變,形成各種腫瘤細胞。人體中的自由基多來自于氧,所以這種自由基“掠奪電子”的現(xiàn)象在化學中稱之為“氧化”現(xiàn)象,這種氧自由基對人體的危害極大,會導致各種疾病產(chǎn)生,危害人體健康。即使在非疾病時期,對運動員來說的疲勞、腦缺血、耐力和體能下降等運動生理現(xiàn)象也有極大的影響[4]。因此,尋找外部清除自由基的物質(zhì)具有重要的意義。近年來的研究發(fā)現(xiàn),多糖類物質(zhì)具有很好的生物活性,具有清除自由基的功效,因此本文就對雞腿菇多糖的生物抗氧化活性進行研究。
·OH通過Fenton反應產(chǎn)生,利用過氧化氫(H2O2)與二價鐵離子(Fe2+)的混合反應,F(xiàn)e2+被羥自由基氧化為Fe3+,產(chǎn)生的·OH氧化效果十分顯著,可以將有機化合物氧化為無機狀態(tài)。
因此,通過Fenton反應來得到羥自由基[5],通過比色法測定·OH的清除率。具體試驗過程為,取0.75 mol·L-1鄰二氮菲溶液1 mL,在試管中加入0.2 moL·L-1的磷酸鹽緩沖溶液(pH 7.4) 1 mL;分別取濃度10%、20%、30%、40%、50%的雞腿菇多糖樣品溶液1 mL,加入試管混合搖勻,空白組加入1 mL蒸餾水;依次分別加入0.75 moL·L-1FeSO4溶液1 mL和0.01%H2O2溶液1 mL混合搖勻,對照組用蒸餾水替代H2O2,放入電熱恒溫水浴鍋于(40±2)℃保持30 min,然后使用分光光度計在540 nm處測量吸光度?!H清除率(OE,%) 的計算公式為:
式中:X為樣品吸光度;X0為空白吸光度;XC為對照吸光度。
DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基醇溶液呈紫色,根據(jù)DPPH·有單電子,在520 nm處有一強吸收,其醇溶液呈紫色。當有自由自清除劑存在時,單對電子被配對,吸收消失或減弱,抗氧化劑(或稱自由基清除劑)能使單電子配對,從而使吸光度值消失或減弱,肉眼觀察也會有紫色溶液褪色的現(xiàn)象。因此通過測定吸光度值的減弱程度來可評估DPPH·清除劑的活性。將雞腿菇多糖樣品液2 mL加入到含0.1 moL·L-1的DPPH·的95%乙醇2 mL中,混合均勻后在室溫下避光靜置30 min,在520 nm處測量吸光度,空白組用2 mL蒸餾水替代樣品液。DPPH·清除率(DE,%)的計算公式為:
式中:X、X0分別為雞腿菇多糖樣品組和空白組的吸光值。
濃度為10%、20%、30%、40%、50%的雞腿菇多糖樣品溶液對·OH的清除作用見圖1。
由圖1可知,雞腿菇多糖對·OH都具有一定的清除活性,且隨著濃度的增加清除作用增強。
濃度為10%、20%、30%、40%、50%的雞腿菇多糖對DPPH·的清除作用見圖2。
由圖2可知,雞腿菇多糖對DPPH·都具有一定的清除活性,且隨著濃度的增加對DPPH·的清除作用增強。
通過不同濃度的雞腿菇多糖溶液對·OH和DPPH·的清除作用試驗表明,雞腿菇多糖對·OH和DPPH·都具有一定的清除活性,且清除率與多糖的濃度成正比關系,這說明雞腿菇多糖對運動員身體內(nèi)的自由基有很好的清除作用,而自由基是人體運動后出現(xiàn)疲勞的主要原因,雞腿菇多糖可以有效提高人體清除自由基的能力,防止人體細胞膜的過氧化損傷,減輕運動員的疲勞。