親子鑒定實(shí)驗(yàn)用于評(píng)估產(chǎn)前診斷中母體細(xì)胞污染的研究分析

摘要：目的：分析親子鑒定實(shí)驗(yàn)用于評(píng)估產(chǎn)前診斷中母體細(xì)胞污染研究情況。方法：選擇2015年6月～2020年6月由于單基因遺傳病且經(jīng)產(chǎn)前診斷孕婦274例為研究樣本，所有樣本送往本檢測(cè)單位檢驗(yàn)。以超聲監(jiān)視為基礎(chǔ)，開(kāi)展羊膜穿刺術(shù)，提取羊水以及羊水細(xì)胞基因組DNA。針對(duì)于羊水細(xì)胞基因組DNA以和胎兒父母基因組DNA開(kāi)展親子鑒定實(shí)驗(yàn)。使用多重?zé)晒釶CR技術(shù)擴(kuò)增基因組DNA，共計(jì)15個(gè)，短串聯(lián)重復(fù)序列位點(diǎn)。在此之后依照分型結(jié)果判定是否存在MCC情況與MCC程度。結(jié)果：女胎兒122例、男胎兒152例，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)MCC。在此其中，證明先證者為新發(fā)型突變共計(jì)8例，其占據(jù)高風(fēng)險(xiǎn)家系的3.0%。測(cè)定胎兒性別特定遺傳病基因型異常共計(jì)70例，占據(jù)總數(shù)的25.6%?；卦L共計(jì)242例，引產(chǎn)或者出生之后相關(guān)檢查和產(chǎn)前診斷結(jié)果相同。結(jié)論：應(yīng)用多重?zé)晒釶CR技術(shù)開(kāi)展親子鑒定實(shí)驗(yàn)，能夠全面提示母體細(xì)胞針對(duì)于羊水細(xì)胞基因組DNA污染水平。進(jìn)而實(shí)現(xiàn)確定胎兒獨(dú)立個(gè)體身份與性別。這種方法對(duì)于提升產(chǎn)前診斷精準(zhǔn)性來(lái)講有著非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。

關(guān)鍵詞：母體細(xì)胞污染;親子鑒定;產(chǎn)前診斷;羊水

【中圖分類號(hào)】R714.52 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A?【文章編號(hào)】1673-9026（2020）12-217-01

現(xiàn)如今，臨床通常應(yīng)用絨毛穿刺取樣術(shù)以及羊膜腔穿刺術(shù)用以開(kāi)展產(chǎn)前診斷，獲取腹內(nèi)胎兒組織標(biāo)本。上述有創(chuàng)性取樣技術(shù)存在著母體細(xì)胞污染（MCC）的為影響母嬰產(chǎn)前診斷結(jié)果精準(zhǔn)性的重要因素。相關(guān)文獻(xiàn)表明：工作人員技術(shù)水平、取樣方案等等在一定程度上決定了單胎妊娠MCC發(fā)生概率。通常認(rèn)為：絨毛穿刺取樣術(shù)的MCC風(fēng)險(xiǎn)比羊膜腔穿刺羊水取樣術(shù)要高。另文獻(xiàn)證實(shí)：沒(méi)有經(jīng)過(guò)培養(yǎng)的孕中期羊水標(biāo)本MCC發(fā)生概率約為9.4%左右[2]，而經(jīng)過(guò)培養(yǎng)的羊水樣本MCC發(fā)生率則為2.8%。

1.資料及方法

1.1一般資料

選擇2015年6月～2020年6月由于單基因遺傳病且經(jīng)產(chǎn)前診斷孕婦274例為研究樣本，所有樣本送往本檢測(cè)單位檢驗(yàn)。所抽取樣本為中期羊水，不存在可見(jiàn)性母血污染。另外抽取家庭成員外周血，經(jīng)ED-TA處理，2ml/人。

1.2方法

外周血以及羊水細(xì)胞DNA提取應(yīng)用Chelex-100法。使用紫外線分光光度計(jì)測(cè)定濃度以及吸光度（A260/A280≈1.8）。

應(yīng)用Identifiler系統(tǒng)，針對(duì)于羊水和父母外周血基因組開(kāi)展DNA擴(kuò)增分析。內(nèi)含15個(gè)常染色體STR基因座和1個(gè)性別牙釉質(zhì)蛋白Amelogenin基因座實(shí)現(xiàn)分型。后完成PCR產(chǎn)物檢測(cè)以及結(jié)果分析。檢測(cè)敏感性實(shí)驗(yàn)為：針對(duì)于已知的等位基因分型4對(duì)親生母子8份血液樣本提純DNA在，開(kāi)展?jié)舛群虯260/A280測(cè)定，經(jīng)過(guò)應(yīng)用母親污染胎兒DNA樣本，生成混合基因組DNA，混合樣本模擬2.5%、5.0%、10.0%、20.0%、30.0%、40.0%MCC水平，稀釋至0.5ng/μL，完成體系擴(kuò)增，評(píng)價(jià)此法監(jiān)測(cè)MCC敏感度。

2.結(jié)果

經(jīng)過(guò)親子鑒定，結(jié)果表明：女胎兒122例、男胎兒152例，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)MCC。在此其中，證明先證者為新發(fā)型突變共計(jì)8例，其占據(jù)高風(fēng)險(xiǎn)家系的3.0%。測(cè)定胎兒性別特定遺傳病基因型異常共計(jì)70例，占據(jù)總數(shù)的25.6%?；卦L共計(jì)242例，引產(chǎn)或者出生之后相關(guān)檢查和產(chǎn)前診斷結(jié)果相同。

3.討論

親子鑒定技術(shù)為熒光標(biāo)記技術(shù)以及多重PCR技術(shù)的有效結(jié)合。這種技術(shù)可實(shí)現(xiàn)于一個(gè)單管內(nèi)同時(shí)擴(kuò)張多個(gè)人類短串鏈重復(fù)序列基因座，其也被稱之為微衛(wèi)星DNA。該項(xiàng)技術(shù)的主要特點(diǎn)為多態(tài)性高、片段短、基因座多。其在法醫(yī)學(xué)親子鑒定以及人類起源與進(jìn)化、個(gè)體識(shí)別、遺傳疾病診斷中有著非常廣泛的應(yīng)用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用法醫(yī)親子鑒定Identifiler系統(tǒng)針對(duì)于產(chǎn)前診斷過(guò)程中MCC程度實(shí)現(xiàn)篩查。相關(guān)研究表明：產(chǎn)前羊水樣本內(nèi)普遍存在MCC。在此其中又有0.3%-1.3%的羊水樣本污染比例達(dá)到了20%左右[2]。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的Identifiler系統(tǒng)擇取共計(jì)16個(gè)STR基因座鑒定體系，其主要將檢測(cè)靈敏度>5%以上污染比例為基準(zhǔn)，應(yīng)用此法顯著高于使用M LP A以及Sanger測(cè)序法所得出的敏感性。其能夠取得有效排除MCC干擾的目的。本實(shí)驗(yàn)將單基因遺傳病家系為研究樣本，針對(duì)于274例無(wú)肉眼可見(jiàn)性母血污染羊水樣本開(kāi)展了MCC篩查工作，結(jié)果表明：未出現(xiàn)MCC污染情況。本次實(shí)驗(yàn)所得出的結(jié)果和同類報(bào)導(dǎo)有所不同。由此發(fā)現(xiàn)：本實(shí)驗(yàn)所用的方法能夠在一定程度上減少M(fèi)CC風(fēng)險(xiǎn)，但出現(xiàn)這種結(jié)果的原因也可能和本實(shí)驗(yàn)內(nèi)所納入的樣本數(shù)量過(guò)少有關(guān)。

本試驗(yàn)共計(jì)測(cè)定274例產(chǎn)前診斷人員。在此其中，常染色體隱性遺傳病共計(jì)168例;其次是x連鎖遺傳，共計(jì)74例;再次為顯性遺傳病例，共計(jì)32例。經(jīng)過(guò)使用親子鑒定技術(shù)測(cè)定產(chǎn)前診斷樣本MCC污染所測(cè)定到的非正常胎兒基因型共計(jì)70例，受檢夫婦均選擇終止妊娠。在此其中有62例接受了引產(chǎn)后保留臍帶血進(jìn)行復(fù)查，結(jié)果和產(chǎn)前所出具的結(jié)果相同;204例為隱性攜帶者或者正常者，隨訪后出生未發(fā)現(xiàn)新生兒存在相關(guān)疾病。其中180例進(jìn)行了臍帶血復(fù)查工作，相關(guān)結(jié)果和產(chǎn)前一致。

另外，針對(duì)于先證者和父母開(kāi)展加強(qiáng)篩查時(shí)發(fā)現(xiàn)共計(jì)8例先證者基因型不符合孟德?tīng)栠z傳定律。通過(guò)開(kāi)展親子鑒定實(shí)驗(yàn)表明：其存在新生性血緣關(guān)系。出現(xiàn)這種結(jié)果的原因很可能和先證者屬于新發(fā)突變有關(guān)。相同的新發(fā)變異也可能在孕婦下一次妊娠中復(fù)發(fā)，同時(shí)導(dǎo)致下一個(gè)子女也受到這種情況影響。以上兩者有著非常高的相關(guān)性。所以，有必要對(duì)于此類復(fù)發(fā)性風(fēng)險(xiǎn)開(kāi)展合理評(píng)估，同時(shí)針對(duì)于孕婦和家屬做好告知工作。

參考文獻(xiàn)

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作者簡(jiǎn)介：沈祥，1988年12月，男，漢江蘇鹽城，本科，職稱：研究員研究方向：親子鑒定，基因檢測(cè)。

南京東南司法鑒定中心?210018