超高效液相色譜快速檢測(cè)萬古霉素濃度方法的建立和性能評(píng)價(jià)

周 強(qiáng)， 潘清清， 沈 敏， 陳霜霜

（1.重慶市銅梁區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 402560；2.寧波美康生物參考實(shí)驗(yàn)室，浙江 寧波 315104）

萬古霉素是20世紀(jì)50年代從鏈霉菌中分離得到的糖肽類抗菌藥物，其作用機(jī)制主要是阻礙細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，改變細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性并影響RNA的合成[1]，對(duì)革蘭陽性菌有強(qiáng)大的抗菌作用，臨床上主要用于治療革蘭陽性菌引起的嚴(yán)重感染[2]，尤其對(duì)目前臨床治療較為棘手的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）、耐甲氧西林表皮葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis，MRSE）和腸球菌耐藥菌株感染有較好的療效[3]，且不易產(chǎn)生耐藥[4]。由于萬古霉素有較高的谷濃度，臨床療程長(zhǎng)，所以有一定的耳、腎、肝及神經(jīng)系統(tǒng)毒性，易出現(xiàn)靜脈滴注相關(guān)性不良反應(yīng)等[5]，這些不良反應(yīng)與血藥濃度（30～65 μg/mL），尤其是谷濃度過高有關(guān)[6-7]；但如果血藥濃度過低，易誘導(dǎo)產(chǎn)生耐藥菌，導(dǎo)致治療失敗。因此，臨床使用萬古霉素時(shí)必須嚴(yán)格控制劑量，這就需要進(jìn)行治療藥物監(jiān)測(cè)（therapeutic drug monitoring，TDM），以指導(dǎo)個(gè)體化用藥[8-9]，特別是對(duì)于老年患者和腎功能不全患者，需根據(jù)TDM結(jié)果及時(shí)調(diào)整用藥方案，使血藥濃度能維持在一個(gè)相對(duì)安全的范圍內(nèi)，避免耳、腎功能損傷。美國(guó)感染病學(xué)會(huì)（the Infectious Diseases Society of America，IDSA）、美國(guó)衛(wèi)生系統(tǒng)藥師學(xué)會(huì)（American Society of Health-System Pharmacists，ASHP）和感染病學(xué)藥師協(xié)會(huì)（the Society of Infectious Diseases Pharmacists，SIDP）于2011年發(fā)布的萬古霉素治療指南及2016年發(fā)布的醫(yī)院獲得性肺炎和呼吸機(jī)相關(guān)肺炎管理指南建議將萬古霉素的血清谷濃度控制在10～20 mg/L，至少需要保持在10 mg/L以上[10]，以獲得最優(yōu)的抗感染效果及最小的腎毒性。目前，萬古霉素的血藥濃度測(cè)定方法主要有微生物檢測(cè)法、酶放大免疫測(cè)定法（enzyme multiplied immunoassay technique，EMIT）、熒光偏振免疫分析法（fluorescence polarization immunoassay，F(xiàn)PIA）[11]、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）[12]和高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）[13]等。在這些方法中，F(xiàn)PIA具有全自動(dòng)化、快速的優(yōu)點(diǎn)，但其試劑昂貴、專屬性差，且檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性不佳，往往導(dǎo)致臨床作出錯(cuò)誤的判斷，給治療方案的調(diào)整帶來很大困難[14]。微生物檢測(cè)法無需特殊的儀器，成本低、操作簡(jiǎn)單，但用時(shí)過長(zhǎng)，結(jié)果受多種因素影響，且不適用于微量樣本的測(cè)定。HPLC雖然檢測(cè)限和精密度沒有FPIA高，但特異性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確，對(duì)微量濃度樣本更具優(yōu)勢(shì)，在國(guó)內(nèi)應(yīng)用較為普遍[15]。本研究在采用HPLC測(cè)定萬古霉素血藥濃度的方法[16]的基礎(chǔ)上，對(duì)色譜條件和樣本前處理進(jìn)行優(yōu)化，以期能建立一種基于超高效液相色譜（ultra performance liquid chromatography，UPLC）技術(shù)的快速、準(zhǔn)確、靈敏的更適合臨床常規(guī)TDM的方法，為降低藥物檢測(cè)及治療成本，指導(dǎo)臨床合理使用萬古霉素提供理論參考。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2019年4—5月使用萬古霉素進(jìn)行抗感染治療的患者50例，其中男36例、女14例，年齡50～90歲；所患疾病包括尿毒癥、顱內(nèi)感染、腦梗死后遺癥、肺炎、關(guān)節(jié)炎、膀胱腫瘤、慢性阻塞性肺疾病等。該50例患者的合格血清樣本分成 2份，-20 ℃保存待測(cè)。

1.2 儀器與試劑

SHIMADZU LC-30A高效液相色譜儀（日本島津公司）、Phenomenex Kinetex C18色譜柱（2.6 μm，100 mm×2.1 mm）、XS 205DU型分析天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）、Multi Reax漩渦混合器（德國(guó)Heidolph公司）、Eppendorf 5427R高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司）、SevenMulti S40K型pH計(jì)（德國(guó)梅特勒-托利多有限公司）、Eppendorf移液器（德國(guó)Eppendorf AG公司）、PS-10型無油隔膜式真空泵（天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、T-50型溶劑過濾器（天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、容量瓶（日本ASone公司）、Milli-Q超純水系統(tǒng)（德國(guó)Millipore公司）。

鹽酸萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)品（純度為100.0%，批號(hào)為0477708）購自美國(guó)Cayman公司。去甲萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)品（純度為83.4%，批號(hào)為130338-200303）購自中國(guó)食品藥品檢定研究院。磷酸二氫鉀（色譜級(jí)）和正磷酸（色譜級(jí)）均購自美國(guó)Thermo Fisher公司。七水合硫酸鋅為生物試劑，購自美國(guó)Sigma公司。甲醇（質(zhì)譜級(jí)）和乙腈（質(zhì)譜級(jí)）均購自美國(guó)Thermo Fisher公司。實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q水。

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)品配制 精密稱取萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)品24.89 mg（經(jīng)鹽酸萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)品分子量換算后得出，實(shí)際稱取鹽酸萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)品25.52 mg）于小燒杯中，加水溶解并多次潤(rùn)洗轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中稀釋混勻，制備995.6 μg/mL萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-20 ℃避光密封保存。分別精密量取不同體積的萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，加水溶解并稀釋混勻，制備成19.9、49. 8、99.6、199.1、497.8、995.6 μg/mL共6個(gè)濃度梯度的萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液，4 ℃避光密封保存。精密稱取去甲萬古霉素13.73 mg于小燒杯中，加水溶解并多次潤(rùn)洗轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中稀釋混勻，加水溶解并稀釋混勻，制備458.0 μg/mL去甲萬古霉素內(nèi)標(biāo)工作液，4 ℃避光密封保存。

1.3.2 流動(dòng)相配制 精密稱取磷酸二氫鉀3.4 g，加入1 000 mL Milli-Q水中，置于電動(dòng)攪拌器上，用磷酸調(diào)節(jié)pH值為2.5，配制成25 mmol/L磷酸二氫鉀緩沖液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜抽濾。

1.3.3 沉淀劑的配制 精密稱取8.63 g七水合硫酸鋅，加水溶解并稀釋混勻，配制成0.3 mol/L硫酸鋅溶液，4 ℃避光密封保存，作為沉淀劑。

1.4 方法

1.4.1 樣本前處理 在室溫下，準(zhǔn)確吸取200 μL血清樣本于1.5 mL離心管中，加入458.03 μg/mL內(nèi)標(biāo)溶液20 μL，旋渦混合1 min后，加入50 μL蛋白沉淀劑（0.3 mol/L硫酸鋅溶液），1 986 r/min水平振蕩5 min，隨后23 000×g高速離心10 min，取上清液進(jìn)樣。

1.4.2 色譜條件 色譜柱為Phenomenex Kinetex C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，2.6 μm），流動(dòng)相A為25 mmol/L磷酸二氫鉀緩沖液（pH值為2.5），流動(dòng)相B為乙腈，流速為0.5 mL/min，柱溫為40 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm；進(jìn)樣量為10 μL，梯度洗脫（0.01→3.00 min，3%B→9%B；3.00→6.50 min，9%B；6.50→6.75 min，9%B→80%B；6.75→10.25 min，80%B；10.25→10.50 min，80%B→3%B；10.50→15 min，3%B）。

1.5 檢測(cè)方法性能評(píng)估

1.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性評(píng)價(jià) 取健康人空白血清180 μL，加入不同濃度的萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液各20 μL，混勻，分別配制成濃度為2.0、5.0、10.0、19.9、49.8、99.6 μg/mL的萬古霉素血清樣本。按上述樣本前處理?xiàng)l件進(jìn)行處理上樣檢測(cè)，每個(gè)濃度平分成3份，每份重復(fù)檢測(cè)3次，取均值。各個(gè)濃度的檢測(cè)偏移＜15%，且r＞0.99可判斷為呈線性。

1.5.2 檢測(cè)限與定量限 采用空白血清加標(biāo)方式，取適量萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)液，制備包括定量限預(yù)期濃度在內(nèi)的3個(gè)濃度梯度的稀釋樣本，混勻，分別計(jì)算出每個(gè)濃度梯度樣本的理論值（C1），然后將定量限樣本各一式五份進(jìn)行處理后檢測(cè)，得到實(shí)測(cè)值（C2），將同時(shí)滿足偏移＜20%、變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）＜20%、信噪比（signal-to-noise ratio，RSN）≥10的濃度值定義為定量限，將RSN=3的計(jì)算濃度值定義為檢測(cè)限。

1.5.3 攜帶污染率 取180 μL血清，分別加入低、中、高3個(gè)濃度的萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)品工作液20 μL，混勻，配制成3個(gè)濃度 [低（L）=2.0 μg/mL，中（M）=19.9 μg/mL，高（H）=79.6 μg/mL）的加標(biāo)樣本，按照上述樣本前處理?xiàng)l件進(jìn)行處理，每份樣本一式三份。按L1（低）、L2（低）、M（中）、L3（低）和L1（低）、L2（低）、H（高）、L3（低）的進(jìn)樣順序來觀察攜帶污染。攜帶污染率（%）=（L3-L2）/（H-L2）×100%，若攜帶污染率低于預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)（1%），則認(rèn)為在測(cè)定該高值及以下時(shí)不存在明顯的攜帶污染。

1.5.4 回收率測(cè)定 取3個(gè)不同濃度的萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)品，分別添加到空白血清中，混勻，配制成2.0、19.9、79.6 μg/mL的加標(biāo)樣本，分別計(jì)算出理論值，然后將各個(gè)濃度的加標(biāo)樣本（各5份）進(jìn)行處理后進(jìn)樣檢測(cè)，得到實(shí)測(cè)值，計(jì)算加標(biāo)回收率?；厥章试?0%～110%為可接受。

1.5.5 精密度測(cè)定 取3個(gè)不同濃度的萬古霉素標(biāo)準(zhǔn)品，分別添加到空白血清中，混勻，配制成2.0、19.9、79.6 μg/mL的混合血清樣本，將混合血清樣本分裝后-70 ℃保存，每個(gè)濃度樣本每批次各5份，進(jìn)行樣本前處理，連續(xù)測(cè)定3個(gè)批次，每天需要得到3條獨(dú)立的標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別計(jì)算批內(nèi)CV和批間CV。

1.5.6 穩(wěn)定性 以精密度驗(yàn)證樣本中的低濃度血清樣本為穩(wěn)定性研究樣本，從以下2個(gè)方面評(píng)估目標(biāo)分析物的穩(wěn)定性：（1）在生物基質(zhì)中的穩(wěn)定性，包括室溫放置4和8 h的短期穩(wěn)定性、-20 ℃下反復(fù)凍融3次的穩(wěn)定性；（2）處理后樣本的穩(wěn)定性，包括處理后室溫放置的穩(wěn)定性、處理后自動(dòng)進(jìn)樣器放置的穩(wěn)定性。

1.6 患者樣本測(cè)定

取50例患者的血清樣本，分別采用本法和文獻(xiàn)報(bào)道的經(jīng)過驗(yàn)證的HPLC[16]進(jìn)行檢測(cè)，用相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中萬古霉素的濃度。每個(gè)分析批均測(cè)定配制的低濃度（2.0 μg/mL）、中濃度（19.9 μg/mL）、高濃度（79.6 μg/mL）質(zhì)控樣本。每個(gè)濃度樣本各5份，分別計(jì)算CV和偏移。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Excel 2013軟件和Origin 8.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以經(jīng)驗(yàn)證的HPLC[16]作為比對(duì)方法，評(píng)價(jià)本法測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。并采用Bland-Altman圖形分析法評(píng)價(jià)2種方法之間的偏移。

2 結(jié)果

2.1 方法專屬性

在本研究建立的前樣本處理方法和色譜分離條件下，測(cè)定純標(biāo)對(duì)照品、空白血清、含藥血清加內(nèi)標(biāo)的色譜圖見圖1。萬古霉素與去甲萬古霉素達(dá)到基線分離，且空白血清在萬古霉素和去甲萬古霉素出峰處無明顯雜質(zhì)峰干擾，峰形良好，內(nèi)標(biāo)去甲萬古霉素和萬古霉素的保留時(shí)間分別為4.677 min和5.008 min，檢測(cè)時(shí)間為15 min。同時(shí)對(duì)比4份不同來源個(gè)體的空白血清和其加標(biāo)血清，4份空白血清在萬古霉素和去甲萬古霉素出峰處無明顯雜質(zhì)峰干擾，表明不同個(gè)體之間的基質(zhì)對(duì)本法的檢測(cè)結(jié)果無干擾，見圖2。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性評(píng)價(jià)

UPLC檢測(cè)血清萬古霉素的線性范圍為2.0～99.6 μg/mL，線性方程為Y=11.389 3X+0.010 110 7（r=0.999 9）。見圖3。

圖1 萬古霉素專屬性色譜圖

圖2 不同血清基質(zhì)下的色譜圖

圖3 UPLC檢測(cè)血清萬古霉素的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 檢測(cè)限與定量限

UPLC檢測(cè)血清萬古霉素的定量限為1.0 μg/mL，檢測(cè)限為0.1 μg/mL。見表1。

2.4 攜帶污染率

根據(jù)公式計(jì)算得中濃度樣本（19.9 μg/mL）的平均攜帶污染率為0.57%，高濃度樣本（79.6 μg/mL）的平均攜帶污染率為0.19%，可認(rèn)為本法不存在明顯的攜帶污染。見表2。

2.5 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

以標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算樣本濃度，依據(jù)實(shí)測(cè)值與理論值的具體比值計(jì)算回收率。加標(biāo)后3種濃度的血清樣本平均回收率分別為104.06%、99.80%、100.19%，見表3。

表1 萬古霉素的定量限評(píng)估結(jié)果

表2 UPLC檢測(cè)萬古霉素的攜帶污染率 %

表3 UPLC檢測(cè)萬古霉素的加標(biāo)回收率結(jié)果

2.6 精密度評(píng)價(jià)

采用UPLC定量檢測(cè)混合血清的萬古霉素濃度，低、中、高濃度樣本的平均批內(nèi)CV分別為3.28%、2.21%、2.59%，批間CV分別為5.73%、2.75%、0.82%，見表4。

表4 精密度評(píng)價(jià)結(jié)果

2.7 穩(wěn)定性

2.7.1 在生物基質(zhì)中的穩(wěn)定性 低濃度血清樣本在室溫[（23±2）℃]放置4和8 h、-20 ℃反復(fù)凍融3次的情況下穩(wěn)定。見表5。

2.7.2 處理后樣本的穩(wěn)定性 樣本處理后在室溫[（23±2）℃]放置24 h和在自動(dòng)進(jìn)樣器（溫度為8 ℃）放置24 h均非常穩(wěn)定。見表6。

表5 生物基質(zhì)樣本不同條件放置的穩(wěn)定性結(jié)果

表6 樣本處理后不同條件放置的穩(wěn)定性結(jié)果

2.8 方法比對(duì)及患者血清樣本測(cè)定結(jié)果的比較

2.8.1 方法比對(duì) 2種方法測(cè)定質(zhì)控樣本無明顯差異，一致性較好。本法測(cè)定3個(gè)濃度質(zhì)控樣本的CV分別為6.07%、3.14%和2.53%，偏移分別為1.67%、-0.57%和-0.44%；UPLC法測(cè)定的3個(gè)濃度質(zhì)控樣本的CV分別為6.92%、5.38%和2.92%，偏移分別為1.00%、-0.85%和-0.90%。見表7。2種方法的比較結(jié)果見表8。

表7 UPLC和HPLC測(cè)定質(zhì)控樣本的結(jié)果比較

表8 UPLC和HPLC的比較

2.8.2 患者血清樣本測(cè)定結(jié)果的比較 分別采用UPLC和HPLC測(cè)定50例患者的血清萬古霉素濃度。以HPLC測(cè)定結(jié)果為X，UPLC測(cè)定結(jié)果為Y，2種方法的線性擬合方程為Y=0.970 8X+0.471 3（r=0.991 9），見圖4。采用Bland-Altman圖形分析法進(jìn)行分析，2種方法的測(cè)定結(jié)果相關(guān)性良好，平均偏移為0.07%，見圖5。

圖4 HPLC與UPLC萬古霉素測(cè)定結(jié)果的比較

圖5 HPLC與UPLC萬古霉素測(cè)定結(jié)果的Bland-Altman偏移圖

3 討論

近年來，隨著不同種類、不同機(jī)制抗菌藥物的不斷面世和臨床濫用抗菌藥物現(xiàn)象的不斷加劇，在過去的10年內(nèi)，關(guān)于萬古霉素治療失敗的案例全世界不同地區(qū)頻頻被報(bào)道。因此，開發(fā)出快速、精準(zhǔn)的萬古霉素濃度檢測(cè)方顯得尤為重要。本研究在文獻(xiàn)報(bào)道的HPLC法測(cè)定萬古霉素血藥濃度的基礎(chǔ)上，基于UPLC技術(shù)建立了一種快速、準(zhǔn)確、靈敏的，更適用于臨床常規(guī)血藥濃度監(jiān)測(cè)的方法。

本研究在建立方法時(shí)主要考慮檢測(cè)波長(zhǎng)、流動(dòng)相、蛋白沉淀劑的種類及體積的選擇。在波長(zhǎng)的選擇上，本研究對(duì)比了280 nm（《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定的檢測(cè)波長(zhǎng)）和236 nm（國(guó)內(nèi)大多數(shù)文獻(xiàn)選擇的波長(zhǎng)）。除了這2種技術(shù)外，還有在210 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定的方法學(xué)報(bào)道[17]。本研究嘗試了不同的波長(zhǎng)，綜合考慮，在樣本中雜質(zhì)不干擾檢測(cè)的情況下選擇了靈敏度較高的波長(zhǎng)（220 nm）作為檢測(cè)波長(zhǎng)。在流動(dòng)相的選擇上，本研究進(jìn)行了適當(dāng)改進(jìn)，采用乙腈為有機(jī)相，25 mmol/L磷酸二氫鉀緩沖液（pH值為2.5）為水相，使萬古霉素和去甲萬古霉素與血清雜質(zhì)分離完全，且峰形良好，采用梯度洗脫，在萬古霉素和內(nèi)標(biāo)出峰后提高有機(jī)相的比例，盡快將樣本中的雜質(zhì)洗脫出來，保留時(shí)間合理，提高了檢測(cè)效率。在樣本前處理方面，本研究以0.3 mol/L硫酸鋅（50 μL）為蛋白沉淀劑，對(duì)文獻(xiàn)報(bào)道的濃度和加入量[18]進(jìn)行微調(diào)。在預(yù)試驗(yàn)中，我們對(duì)7種蛋白沉淀劑及體積進(jìn)行了對(duì)比，分別為甲醇∶乙腈∶6%高氯酸（1∶1∶6）50 μL、100 μL和200 μL，乙腈∶甲醇（1∶1）500 μL，0.3 mol/L硫酸鋅50 μL、100 μL和200 μL，0.3 mol/L硫酸鋅∶乙腈（1∶1）50 μL、100 μL和200 μL，6%高氯酸200 μL，乙腈∶異丙醇（1∶1）200 μL、10%硫酸鋅50 μL和100 μL。從沉淀效果看，除乙腈∶甲醇（1∶1）500 μL、乙腈∶異丙醇（1∶1）200 μL、甲醇∶乙腈∶6%高氯酸（1∶1∶6）50 μL未能得到透明、無色的上清液外，其他相對(duì)應(yīng)體積的蛋白沉淀劑經(jīng)高速離心后均可得到透明、無色的上清液，其中0.3 mol/L硫酸鋅50 μL的沉淀效果最好，操作簡(jiǎn)單，響應(yīng)值最高，峰形最佳。

本研究結(jié)果顯示，UPLC檢測(cè)血清萬古霉素濃度的線性范圍為2.0～99.6 μg/mL，定量限和檢測(cè)限分別為1.0和0.1 μg/mL，靈敏度和線性范圍完全能夠滿足常規(guī)檢測(cè)的要求。精密度評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，UPLC檢測(cè)低、中、高濃度樣本的平均批內(nèi)CV分別為3.28%、2.21%、2.59%，批間CV分別為5.73%、2.75%、0.82%；3種濃度（2.0、19.9、79.6 μg/mL）的加標(biāo)樣本平均加標(biāo)回收率分別為104.06%、99.80%、100.19%，中濃度樣本的攜帶污染率為0.57%，高濃度樣本的攜帶污染率為0.19%。UPLC與HPLC（比對(duì)方法）測(cè)定質(zhì)控樣本的結(jié)果差異不大，一致性較好；測(cè)定患者樣本的結(jié)果相關(guān)性良好，平均偏移為0.07%。HPLC采用的是高比例的水相進(jìn)行等度洗脫，進(jìn)行樣本分析時(shí)未用高比例有機(jī)相沖洗色譜柱，長(zhǎng)時(shí)間使用時(shí)樣本中的脂溶性物質(zhì)易污染色譜柱。的色譜分析時(shí)間（15 min）比文獻(xiàn)報(bào)道的HPLC（8 min）長(zhǎng)，但有利于保護(hù)色譜柱，且2個(gè)目標(biāo)峰在6 min內(nèi)全部出峰，適用于批量檢測(cè)，文獻(xiàn)報(bào)道的HPLC[16]2個(gè)目標(biāo)峰在7.5 min內(nèi)才完全出峰。uPLC前處理采用的是蛋白沉淀，方法快速、簡(jiǎn)便，而文獻(xiàn)報(bào)道的HPLC[16]采用的是液液萃取，需要在60 ℃條件下蒸干40 min，操作較為繁雜、耗時(shí)。

綜上所述，本研究建立的基于UPLC技術(shù)測(cè)定血清萬古霉素的方法具有重現(xiàn)性好、快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高和準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)，可用于藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究和TDM，為臨床合理、安全用藥提供保障。