3種丹參注射劑對大鼠急性心肌缺血的改善作用

張海嘯 于長安 史載祥 杜金行

(清華大學(xué)附屬垂楊柳醫(yī)院中醫(yī)科，北京 100022)

冠心病主要由冠狀動脈梗阻或狹窄導(dǎo)致，中醫(yī)學(xué)屬胸痹范疇，“血脈瘀滯、不通則痛”是其病機(jī)的一個重要方面，臨床采用活血化瘀法治療[1]。丹參是傳統(tǒng)活血化瘀中藥，自明代以來即有“一味丹參，功同四物”之說，臨床廣泛用于治療心血管病[2]?，F(xiàn)代藥理研究表明，丹參制劑具有一定的抗動脈粥樣硬化、抗心肌缺血、改善心肌重構(gòu)、抗心律失常的心血管保護(hù)作用[3-4]。前期臨床研究證明丹參制劑活血通脈，可緩解冠心病心絞痛患者胸部刺痛、絞痛或心悸等癥狀[5]。本實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)一步比較3種丹參注射劑對大鼠急性心肌缺血的改善作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 雄性SD大鼠115只，平均體質(zhì)量(247.3±10.5) g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，動物合格證號：SCXK(京)2006-0001。飼養(yǎng)環(huán)境：溫度20～25 ℃，濕度40%，自由飲食飲水，每日光照和黑暗各12 h。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑 注射用丹參(凍干)(哈藥集團(tuán)中藥二廠，國藥準(zhǔn)字Z10970093)；丹參注射液(正大青春寶藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字Z33020176)；注射用丹參多酚酸鹽(上海綠谷制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字Z20050247)；硝酸甘油注射液(北京益民藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H11020289)；垂體后葉素注射液(南京新百藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H32026637)；2%戊巴比妥鈉溶液(北京化學(xué)試劑公司)；肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司)。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 全自動生化分析儀(Sapphire 600型，愛爾蘭歐迪診斷公司)；低速冷凍離心機(jī)(DDL-5型，上海安亭科學(xué)儀器廠)；Medlab?生物信號采集處理系統(tǒng)(medlab-U/4c501H型，南京美易科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 動物選擇及分組 將115只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，腹腔注射2%戊巴比妥鈉溶液2 mL/kg麻醉，測標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖1 min，剔除異常心電圖大鼠，篩選90只大鼠繼續(xù)飼養(yǎng)1周。采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為6組，正常組、模型組、注射用丹參(凍干)組、丹參注射液、注射用丹參多酚酸鹽組、硝酸甘油注射液組，每組15只。

1.2.2 預(yù)給藥方法 注射用丹參(凍干)組大鼠予注射用丹參(凍干)4 mg/mL腹腔注射；丹參注射液組大鼠予丹參注射液4 mg/mL腹腔注射；注射用丹參多酚酸鹽組大鼠予注射用丹參多酚酸鹽1.6 mg/mL腹腔注射；硝酸甘油注射液組大鼠予硝酸甘油注射液0.5 mg/mL腹腔注射。實(shí)驗(yàn)藥物劑量為成人常用劑量按照人鼠體表面積換算公式換算成等效劑量,各藥物臨用前用0.9%氯化鈉注射液配制成所需濃度，給藥容積為10 mL/kg。正常組、模型組大鼠予等容積0.9%氯化鈉注射液腹腔注射。均每日1次，連續(xù)給藥3 d。

1.2.3 大鼠急性心肌缺血模型制備[6]第3 d給藥后1 h，各組大鼠均予腹腔注射2%戊巴比妥鈉2 mL/kg麻醉，測標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖作為急性心肌缺血前值。然后注射用丹參(凍干)組、丹參注射液組、注射用丹參多酚酸鹽組、硝酸甘油注射液組大鼠腹腔注射垂體后葉素注射液10 U/kg，造成大鼠急性心肌缺血，監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖15 min，采集急性心肌缺血后1、5、10、15 min的心電圖為急性心肌缺血后值。

1.3 觀察指標(biāo)及方法

1.3.1 心電圖監(jiān)測[7]測量給藥前及給藥后各時間段大鼠心電圖上J點(diǎn)(mV)及T波(mV)，計算給藥前后變化值(△mV)的絕對值。

1.3.2 心肌酶檢測 心電圖監(jiān)測后，腹主動脈采血測定血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠急性心肌缺血后1、5、10、15 min心電圖J點(diǎn)位移變化比較 見表1。

表1 各組大鼠急性心肌缺血后1、5、10、15 min心電圖J點(diǎn)位移變化比較

由表1可見，模型組大鼠急性心肌缺血后1、5、10、15 min心電圖J點(diǎn)位移變化均高于正常組(P<0.05)，說明急性心肌缺血模型成功；注射用丹參(凍干)組、丹參注射液組、注射用丹參多酚酸鹽組、硝酸甘油注射液組大鼠急性心肌缺血后5、10、15 min心電圖J點(diǎn)位移變化均低于模型組(P<0.05)；注射用丹參(凍干)組大鼠急性心肌缺血后10、15 min心電圖J點(diǎn)位移變化低于丹參注射液組、注射用丹參多酚酸鹽組、硝酸甘油注射液組(P<0.05)，丹參注射液組、注射用丹參多酚酸鹽組、硝酸甘油注射液組大鼠急性心肌缺血后10、15 min心電圖J點(diǎn)位移變化兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；注射用丹參(凍干)組、丹參注射液組、注射用丹參多酚酸鹽組、硝酸甘油注射液組大鼠急性心肌缺血后1、5 min心電圖J點(diǎn)位移變化兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 各組大鼠急性心肌缺血后1、5、10、15 min心電圖T波高度變化比較 見表2。

表2 各組大鼠急性心肌缺血后1、5、10、15 min心電圖T波高度變化比較

由表2可見，模型組大鼠急性心肌缺血后1、5、10、15 min心電圖T波高度變化均高于正常組(P<0.05)，說明急性心肌缺血模型成功；注射用丹參(凍干)組、丹參注射液組、注射用丹參多酚酸鹽組、硝酸甘油注射液組大鼠急性心肌缺血后5、10、15 min心電圖T波高度變化均低于模型組(P<0.05)；注射用丹參(凍干)組大鼠急性心肌缺血后10、15 min心電圖T波高度變化低于丹參注射液組、注射用丹參多酚酸鹽組、硝酸甘油注射液組(P<0.05)；丹參注射液組、注射用丹參多酚酸鹽組、硝酸甘油注射液組大鼠急性心肌缺血后10、15 min心電圖T波高度變化兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；注射用丹參(凍干)組、丹參注射液組、注射用丹參多酚酸鹽組、硝酸甘油注射液組大鼠急性心肌缺血后1、5 min心電圖T波高度變化兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 各組大鼠血清CK、CK-MB、LDH比較 見表3。

表3 各組大鼠血清CK、CK-MB、LDH比較

由表3可見，模型組大鼠血清CK、CK-MB、LDH均高于正常組(P<0.05)，說明急性心肌缺血模型成功；注射用丹參(凍干)組大鼠血清CK、CK-MB、LDH均低于模型組(P<0.05)；丹參注射液組、注射用丹參多酚酸鹽組、硝酸甘油注射液組大鼠血清CK-MB、LDH均低于模型組(P<0.05)；注射用丹參(凍干)組大鼠血清CK、CK-MB均低于丹參注射液組、注射用丹參多酚酸鹽組、硝酸甘油注射液組(P<0.05)；丹參注射液組、注射用丹參多酚酸鹽組、硝酸甘油注射液組大鼠血清CK、CK-MB兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；注射用丹參(凍干)組、丹參注射液組、注射用丹參多酚酸鹽組、硝酸甘油注射液組大鼠LDH兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

3 討 論

丹參味苦，性微寒，入心、肝經(jīng)，功效活血祛瘀，通經(jīng)止痛，清心除煩，涼血消癰[8]。丹參最早載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，“味苦，微寒，無毒。主心腹邪氣……寒熱積聚，破癥除瘕……”?！秼D人明理論》曰“丹參能破宿血，補(bǔ)新血……功類當(dāng)歸、地黃、芎穹、芍藥故也”，故有“一味丹參，功同四物”之說?，F(xiàn)代藥理研究表明，丹參活性成分具有擴(kuò)張血管、增強(qiáng)心肌耐缺氧能力、清除氧自由基、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、改善微循環(huán)及減少高凝、高脂、高黏狀態(tài)等作用[9-11]，廣泛用于治療心血管疾病。

雖然各種丹參注射液改善心肌缺血的作用和療效明確，但臨床上丹參注射液種類繁多，如何選擇應(yīng)用丹參注射液也是困擾臨床醫(yī)生的難題之一。本實(shí)驗(yàn)通過觀察3種丹參注射液對大鼠心肌急性缺血的改善作用，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。丹參類注射劑中主要成分含量分析[12]表明，注射用丹參(凍干)、丹參注射液、注射用丹參多酚酸鹽成分主要為水溶性成分，包含丹參素、丹酚酸A、丹酚酸B、原兒茶醛、迷迭香酸、咖啡酸等。但注射用丹參(凍干)中丹酚酸A、丹參素、原兒茶醛等成分含量較高，不含丹酚酸B；注射用丹參多酚酸鹽只有丹酚酸B和迷迭香酸2種主要成分，且含量較高；而丹參注射液中含有丹酚酸A、丹參素、原兒茶醛、丹酚酸B、迷迭香酸和咖啡酸6種成分，但各成分含量都不是很高。因此，本研究結(jié)果顯示注射用丹參(凍干)組大鼠表現(xiàn)出較好的心電圖和心肌酶改善作用，可能與丹酚酸A、丹參素、原兒茶醛等成分含量較高有關(guān)。

丹參水溶性成分主要通過舒張冠脈保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞，抗血小板聚集，調(diào)節(jié)能量代謝和活性氧代謝，以及抑制炎性反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、鈣超載和調(diào)控自噬抗心肌缺血及再灌注損傷[13]，可預(yù)防衰竭心臟的心肌纖維化、心肌肥大、血流動力學(xué)惡化及收縮和舒張功能障礙[14]。本研究涉及到的3種丹參注射劑成分含量最高的為丹參素、丹酚酸A和丹酚酸B，均有一定的擴(kuò)張冠狀動脈血管的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，丹酚酸A可通過調(diào)節(jié)高脂血癥大鼠血脂總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平，保護(hù)內(nèi)皮屏障功能而減輕游離脂肪酸導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)胞損傷[15]，并可通過硫氧化還原蛋白/c-jun N-末端激酶(Trx/JNK)信號傳導(dǎo)途徑抑制心肌細(xì)胞凋亡和炎性反應(yīng)[16]。丹酚酸B主要通過改善內(nèi)皮細(xì)胞分泌功能對抗缺血再灌注損傷，減少大鼠心肌缺血再灌注損傷心肌組織內(nèi)皮素的含量，提高一氧化氮合酶(NOS)活性，增加一氧化氮(NO)釋放，調(diào)節(jié)內(nèi)皮素(ET)/NO系統(tǒng)平衡，維持冠脈血管張力[17]；還可通過調(diào)節(jié)心肌Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性，改善心肌能量代謝，減輕心肌損傷[18]。而丹參素可激活冠脈平滑肌細(xì)胞鈣激活鉀通道，導(dǎo)致鉀離子外流，誘發(fā)血管內(nèi)皮細(xì)胞超極化因子(EDHF)釋放，引起平滑肌細(xì)胞膜電位超極化，從而舒張血管平滑肌[19]；還可通過調(diào)節(jié)自噬，調(diào)節(jié)ATP合酶功能，促進(jìn)ATP生成，保護(hù)心肌細(xì)胞[20]。本研究結(jié)果顯示，注射用丹參(凍干)在改善心電圖的J點(diǎn)位移及T波高度變化方面優(yōu)于注射用丹參多酚酸鹽，可能與丹酚酸A及丹酚酸B的含量不同有一定關(guān)系。然而，王國振等[21]研究表明，與單純應(yīng)用丹酚酸A、丹酚酸B比較，丹酚酸A、丹酚酸B不同配比對大鼠心肌缺血再灌注性損傷具有更好的保護(hù)作用，說明丹酚酸A及丹酚酸B聯(lián)合應(yīng)用效果可能更好。3種丹參注射劑對急性心肌缺血大鼠心肌相關(guān)生化指標(biāo)CK-MB、LDH均有一定的改善作用。尤其注射用丹參(凍干)組心肌酶相關(guān)指標(biāo)CK、CK-MB的改善作用優(yōu)于其他2種丹參注射劑及硝酸甘油注射液。

綜上所述，3種丹參注射劑對大鼠急性心肌缺血均有一定的改善作用，注射用丹參(凍干)的改善作用略優(yōu)于丹參注射液、注射用丹參多酚酸鹽，其作用差異可能主要與丹參素、丹酚酸A及丹酚酸B含量不同有關(guān)。