BoBs技術：快速產前檢測非整倍體和微缺失綜合征的有效方法

代文成，張 勇，余 珍，何美香，郭曉利，馬曉蓉，王麗霞，馬光娟△

(1.新疆維吾爾自治區(qū)婦幼保健院產前診斷中心，新疆烏魯木齊 830000；2.新疆普瑞賽新醫(yī)學檢驗所，新疆烏魯木齊 830000)

細胞遺傳學方法的金標準為體外細胞培養(yǎng)及染色體核型分析，可以準確檢測出染色體非整倍體及染色體倒位、易位、大于10 Mb的重復和缺失等結構異常[1]。目前應用較多的常見染色體非整倍體快速產前診斷技術包括熒光原位雜交技術和多重定量熒光聚合酶鏈式反應技術等[1-3]。染色體微陣列分析技術可檢測染色體微缺失和微重復，但檢測結果可能出現(xiàn)臨床意義不明的拷貝數變異[4-7]。細菌人工染色體微珠(BoBs)檢測技術除了能對21號、18號、13號及性染色體數目異常進行快速診斷外，還能對常見的9種染色體微缺失綜合征進行檢測[8-9]。本研究聯(lián)合應用BoBs技術與傳統(tǒng)的染色體核型分析技術對1 868例羊水標本進行產前診斷，即達到快速檢測染色體非整倍體又擴展了9種染色體微缺失綜合征檢測?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年11月至2018年6月在新疆維吾爾自治區(qū)婦幼保健院就診的1 868例，具有以下至少1項產前診斷指征的孕婦：(1)孕婦年齡≥35歲；(2)孕婦血清學產前篩查高風險；(3)胎兒超聲篩查異常；(4)孕婦無創(chuàng)產前篩查高風險；(5)有染色體異常、染色體微缺失綜合征生育史或妊娠史。孕婦年齡18～48歲，孕周18～24周，所有孕婦均簽署知情同意書后行羊水穿刺術并獲得倫理委員會得批準。

1.2方法

1.2.1BoBs檢測 儀器與試劑耗材均購自美國Perkin Elmer公司，將10 mL羊水用德國Qiagen公司的試劑盒提取基因組DNA，測量DNA水平后進行DNA標記，PCR擴增、純化，用微球進行雜交，顯色標記。用Luminex 200分析儀進行高通量檢測，用BoBsoft軟件進行分析，并在24～48 h內得出結果。主要針對染色體13、18、21、X、Y非整倍體及9個目標區(qū)域(4p16.3、5p15.3-5p15.2、7q11.2、8q23.2-8q24.1、15q11-15q12、17p13.3、17p11.2、10p14、22q11.2)的微缺失進行檢測。

1.2.2羊水細胞培養(yǎng)及染色體核型分析 對培養(yǎng)成功的羊水細胞進行收獲、常規(guī)制片、G顯帶和染色體核型分析。染色體核型分析診斷標準參考2013年人類細胞遺傳學國際命名體系(ISCN)。

2 結 果

2.1BoBs技術 檢出130例染色體非整倍體，其中標準型21-三體綜合征91例，標準型18-三體綜合征23例，性染色體非整倍體6例，嵌合型21-三體綜合征1例，嵌合型性染色體5例，微缺失和微重復4例，漏診嵌合5例，檢出率6.95%。金標準染色體核型分析檢出非整倍體131例，漏檢4例微缺失，見表1、2。

表1 BoBs檢測異常統(tǒng)計結果

表2 BoBs方法與確診方法統(tǒng)計結果(n)

2.2羊水細胞染色體核型分析 胎兒羊水細胞培養(yǎng)成功率為100%。統(tǒng)計13、18、21、X和Y染色體非整倍體131例，其中檢出染色體數目嵌合11例，漏診微缺失4例，檢出率為7.01%。對于BoBs不能檢測而核型分析能檢測的染色體結構改變，如倒位、易位等，將這些標本均歸入正常標本。核型無法檢出微缺失的不納入，符合納入標準的標本染色體非整倍體，評價總一致性異常(+)和正常(-)標本的頻數以表格形式報告，總符合率為99.73%，陽性符合率為96.18%，陰性符合率為100.00%。見表3。

表3 BoBs方法與核型分析之間符合率統(tǒng)計結果(n)

3 討 論

0.2%～1.9%的產前診斷標本存在嵌合體現(xiàn)象[10]。因為限制性胎盤嵌合體較為普遍，故相對于羊水標本，絨毛標本嵌合體發(fā)生率更高[11]。BoBs技術檢測到不同染色體嵌合的閾值為20%～40%[12]，即BoBs技術檢測人工混合的模擬標本和臨床標本嵌合體的閾值存在輕微差異。分析其原因，可能是由于臨床標本通過核型分析技術評估嵌合水平，而人工混合標本是由正常和異常的細胞系根據數學計算混合而成。因為BoBs技術可額外檢測9個常見微缺失綜合征關鍵區(qū)域的拷貝數變異，故BoBs 技術具有對13、18、21號和 X、Y 染色體非整倍體以及微缺失綜合征的快速產前診斷能力。

BoBs檢測與核型分析檢測在常見染色體非整倍體數目異常檢測方面的作用是一致的。染色體微缺失綜合征患者常伴有智力低下、發(fā)育遲緩、多器官畸形及不良孕產史等癥狀[13]，但卻是細胞染色體核型分析的盲點和難點。BoBs檢測可對常見的9種染色體微缺失綜合征進行診斷，這9種微缺失綜合征在活產嬰兒中的綜合發(fā)生率約為1/1 600[14]，本研究中BoBs檢測出的4例染色體微缺失/微重復綜合征，染色體核型分析結果顯示未見異常。

BoBs 技術較為簡單，儀器成本低，通量高，每個反應可檢測92份標本。BoBs技術與核型分析比較，BoBs 技術比核型分析能更快速獲得結果，是較為理想的產前診斷補充工具。對于新發(fā)展的產前診斷實驗室，開展 BoBs技術的成本效益較高。

4 結 論

BoBs技術能夠高效檢出常見染色體非整倍體和微缺失綜合征，因其快速、精確、操作簡便、通量高等優(yōu)勢，滿足臨床的需求，值得推廣。