藤黃中藤黃酸和新藤黃酸的提取分離及藥理毒理研究

馬 靜，成志平，趙夢中，閆 婧

（包頭市食品藥品檢驗檢測中心，內(nèi)蒙古 包頭 014060）

改進從中藥藤黃中提取、分離新藤黃酸的工藝。將藤黃粉碎微波提取，濃縮的浸膏；加入石油醚淋洗，乙醇溶解過濾，經(jīng)模擬移動床色譜分離；回收溶劑干燥得純度95%以上的藤黃酸及純度10%～20%的藤黃酸與純度30%～50%的新藤黃酸混合物兩種規(guī)格的產(chǎn)品。加入6倍的濃度為95%的乙醇，提取2次，每次1.5個小時，并將實驗進行3批驗證試驗，加入驗證結(jié)果一致，說明此工藝穩(wěn)定可行。運用改進的工藝從藤黃中提取分離新藤黃酸是可行的,更利于工業(yè)化生產(chǎn)。

中藥藤黃為藤黃科植物藤黃樹干切傷后分泌的膠樹脂。清涼，酸味，澀味，有毒。具有消腫毒、止血殺蟲、除癬作用。化學成分研究表明，藤黃主要含有以藤黃酸為代表的黃酮類化合物。

1 儀 器

電子天平（AL204-IC）METTLER TOLEDO；數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司 KQ-500DE）；現(xiàn)場展示恒溫水浴鍋（金壇江南儀器廠HH）；有機試劑回收設備；高性能液相；沒有活塞玻璃柱；循（SHZIIID）環(huán)水真空泵上海正式開始實驗儀器科技有限公司有限公司。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀TSQ Quantum Ultra EMR（ThermoFisher）。

2 一般資料

2.1 藤黃酸與新藤黃酸的提取

2.1.1 制備藤黃酸對照

精確稱量藤黃酸6 mg標準品，將標準品置于量程為10 mL的容量瓶中，將分析純甲醇溶液加入定容溶液中，超聲溶解，制備含量為0.6 mg/mL的標準品。

2.1.2 樣品溶液的制備

精確稱量提取出的總藤黃酸酯提取物6 mg，置于容量瓶中，測量范圍為10 mL，加入純甲醇在恒體積和超聲波下溶解分析，過濾膜為0.45微米，所得濾液作為樣品溶液，備用。

2.1.3 因素水平的確立

取3個水平進行考察，研究乙醇濃度、乙醇量、提取時間以及提取次數(shù)4次，各因素對藤黃提取物收取率的影響。

2.1.4 提取與分離

（1）提取:按照實驗得出的優(yōu)化方法，準確稱取10 g藤黃粉，放入500 mL的圓底燒瓶中，然后加入6倍量的濃度為95%的乙醇，并浸泡30分鐘水浴回流提取1.5小時，重復一次，合并2次濾液，再在60℃減壓回收乙醇，放入低溫干燥的真空箱中得出干浸膏。

（2）分離：上提取得出的干燥提取物，用濃度為0.1%的Na2CO3將其溶解，加入預處理的AB-8型大孔樹脂，樹脂的質(zhì)量與提取物的比例Wie18：1，然后浸泡過夜。然后用蒸餾水洗至洗脫液基本變無色，洗脫液用薄層色譜點板跟蹤，直到黃斑點變得極淡時停止洗脫。最后用濃縮的洗脫液加稀釋的濃鹽酸沉淀，抽濾的出黃色的結(jié)晶，低溫減壓干燥即可。

3 討 論

單因素和正交試驗優(yōu)化從藤黃中提取總藤黃酸的工藝條件，并確定最優(yōu)提取工藝：乙酸乙酯回流提取用于橙黃色,液體材料的比例1:9，提取溫度為75℃，提取時間為2.5 h。本文采用大孔樹脂和硅膠柱層析法進一步分離純化總藤黃酸，經(jīng)H譜和C譜檢測，確定這兩種化合物分別為藤黃酸和新藤黃酸。

4 藤黃酸和新藤黃酸藥理毒理分析

在中醫(yī)學中藤黃的用藥歷史十分悠久，據(jù)中醫(yī)學記載，藤黃具有祛除癬、破血散結(jié)、攻毒消蝕潰瘍、驅(qū)蟲、攻毒消腫、治療跌打傷的作用?，F(xiàn)代藥理研究也表明，藤具有相同的抗腫瘤、抗炎和抗病毒活性。

根據(jù)相關文獻了解藤黃酸及新藤黃酸的抗腫瘤作用，根據(jù)不同的細胞系，其功效會表現(xiàn)出不同的特點，因此甘草酸等化學成分存在一定的差異。以藤黃酸與新藤黃酸對結(jié)腸癌及胃癌為例選擇不同濃度、不同時間對細胞株進行觀察24小時，兩者半抑制濃度（IC50）分別是5.55和10.34 μg/mL，0.19和2.16 μg/mL；藤黃酸與新藤黃酸對結(jié)腸癌和胃癌48小時的抑制濃度依次為5.38和3.40 μg/mL，0.95和0.81 μg/mL，由此可見藤黃酸與新藤黃酸既有良好的藥理作用。

雖然藤黃的藥理作用十分廣泛，但其毒性較大，臨床應用有限。藤黃具有一定的毒性，其化學成分和含量一直是醫(yī)學研究的重要課題。根據(jù)以往大量的實驗研究，藤黃酸和新藤黃酸的最大耐受量一般為400 mg/kg及600 mg/kg。由于藤黃酸和新藤黃酸溶解度的影響，對高濃度藤黃酸的研究受到限制。藤黃酸的毒性相對較快。

研究表明藤黃酸與新藤黃酸在抗癌方面具有比較突出優(yōu)勢，但是想要將藤黃酸全面的應用到臨床治療中仍然需要對于其新衍生物進行開發(fā)、藥動學的研究還需要繼續(xù)深入和開展。上述的研究成果表明藤黃酸在藥學領域內(nèi)的研究目前處在高速發(fā)展時期，而且具有極大的研究價值。目前，在藥效學研究的基礎上，開發(fā)出有效的劑型來解決藤黃酸水低溶性問題，使之產(chǎn)生理想的藥效，同時減輕不良反應是當下藤黃酸進研究必須突破的關鍵問題。如何打破藤黃酸的毒性的限制，將其特有的抗癌作用充分發(fā)揮出來，是今后藤黃研究項目的重要工作。