電針對(duì)肝葉切除術(shù)后大鼠認(rèn)知功能及海馬膠質(zhì)細(xì)胞的影響

劉佩蓉,張瑜,劉春亮,彭生

·動(dòng)物實(shí)驗(yàn)·

電針對(duì)肝葉切除術(shù)后大鼠認(rèn)知功能及海馬膠質(zhì)細(xì)胞的影響

劉佩蓉,張瑜,劉春亮,彭生

(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬第七人民醫(yī)院,上海 200137)

觀察電針刺激對(duì)手術(shù)應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠認(rèn)知功能的影響,并通過(guò)觀察海馬神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激活對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探討。老年雄性SD大鼠72只,隨機(jī)分為3組,每組24只,對(duì)照組采用假手術(shù)(sham組,S組);模型組(model組,M組)通過(guò)肝左葉切除術(shù)誘導(dǎo)產(chǎn)生認(rèn)知功能障礙;電針組(Electroacupuncture組,EA組)接受肝左葉切除術(shù)和術(shù)后每日1次,每次30 min的電針刺激。Morris水迷宮評(píng)估認(rèn)知功能,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)海馬膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF),免疫熒光檢測(cè)海馬小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物CD68和星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP的表達(dá)。與M組相比較,EA組大鼠術(shù)后1 d、3 d、7 d的逃避潛伏期縮短(＜0.05),跨越平臺(tái)次數(shù)增加(＜0.05)。與術(shù)前比較,M組和EA組大鼠術(shù)后海馬GDNF水平均顯著降低(＜0.05)。與M組相比較,復(fù)合電針調(diào)節(jié)后的EA組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)海馬組織GDNF表達(dá)水平顯著上調(diào)(＜0.05)。M組術(shù)后海馬組織CD68、GFAP表達(dá)顯著上調(diào)(＜0.05),復(fù)合電針調(diào)節(jié)后的EA組大鼠海馬組織CD68和GFAP的上調(diào)得到了顯著抑制(＜0.05)。電針可顯著改善術(shù)后認(rèn)知功能障礙大鼠記憶功能,其機(jī)制可能與抑制小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活有關(guān)。

術(shù)后認(rèn)知功能障礙;電針;肝葉切除術(shù);小膠質(zhì)細(xì)胞;星形膠質(zhì)細(xì)胞;大鼠

術(shù)后認(rèn)知功能障礙(postoperative cognitive dysfunction, POCD)是老年患者常見的手術(shù)后并發(fā)癥,以記憶、注意力、語(yǔ)言等認(rèn)知功能的明顯下降為臨床特征[1]。術(shù)后,約14%老年患者在3個(gè)月內(nèi)發(fā)生認(rèn)知能力下降[2]。POCD的病理機(jī)制復(fù)雜,至今尚未闡明。其中各種原因?qū)е碌纳窠?jīng)細(xì)胞數(shù)量減少和過(guò)度凋亡在其中起到了重要作用。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)不單是神經(jīng)細(xì)胞,膠質(zhì)細(xì)胞的過(guò)度激活在其中也起著重要作用,尤其是小膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的激活對(duì)中樞炎癥的調(diào)節(jié)起著關(guān)鍵作用[3]。既往研究表明,特定穴位電針刺激可以抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)細(xì)胞活化。而電針刺激能否通過(guò)抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化改善POCD,尚少見報(bào)道,因此本研究進(jìn)行了觀察。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物選擇和分組

清潔級(jí)老齡雄性Sprague Dawley大鼠(18月齡, 500～600 g)72只(斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,上海),采用隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組(Sham組,S組),對(duì)照用;模型組(model組,M組),采用肝左葉切除手術(shù)誘導(dǎo)POCD;電針組(Electroacupuncture, EA組),肝左葉切除＋電針調(diào)節(jié)大鼠,每組24只。本研究得到上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬第七人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 POCD動(dòng)物模型的建立

參照Tian Y等[4]POCD模型制作方法。大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉(30 mg/kg)麻醉,仰臥位固定,消毒后,在上腹部中線做一個(gè)小切口,行肝左葉切除,徹底止血后,逐層關(guān)腹。手術(shù)時(shí)間控制在大約90 min。待手術(shù)結(jié)束正常清醒后,采用Morris水迷宮測(cè)試,定位巡航時(shí)間比正常組＞10 s,90 s內(nèi)空間探索次數(shù)比正常大鼠＜3次,即認(rèn)為造模成功[5]。Sham組,麻醉后行上腹部中線皮膚切開縫合,不切除肝左葉。

1.3 干預(yù)方法

參照尚華杰等[6]固定和電針處理方法。EA組大鼠選擇百會(huì)及雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴、合谷穴,不銹鋼針(0.35 mm ×13 mm)垂直角度刺入約2.5 mm。然后,百會(huì)穴與韓氏穴位神經(jīng)刺激儀(LH202H,北京)連接(與百會(huì)穴形成環(huán)路的另一電極,連接于百會(huì)穴后5 mm的非穴點(diǎn)),頻率2/10 Hz,強(qiáng)度4 mA,疏密波持續(xù)刺激。電針干預(yù)從術(shù)前30 min持續(xù)至手術(shù)結(jié)束。術(shù)后1～7 d,每天固定時(shí)間行電針刺激1次,每次30 min。對(duì)照組和模型組大鼠采取同樣的操作,抓取、固定相同的時(shí)間,但不予電針干預(yù)。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 學(xué)習(xí)記憶功能

參照經(jīng)典Morris水迷宮測(cè)試方法[7],定位巡航實(shí)驗(yàn)測(cè)試學(xué)習(xí)能力,空間探索實(shí)驗(yàn)測(cè)試記憶能力。術(shù)前所有大鼠均在Morris水迷宮中接受連續(xù)5 d,每天4次的訓(xùn)練。定位巡航實(shí)驗(yàn),將透明平臺(tái)放置在水池4個(gè)象限中的一個(gè)(靠近中心的1/2個(gè)半徑內(nèi)),平臺(tái)頂部低于水面1 cm。將大鼠置于離平臺(tái)最遠(yuǎn)的象限,讓它們找到并爬上平臺(tái),并將其記錄為逃避潛伏期。如果最終沒有找到平臺(tái),逃避潛伏期記為60 s。空間探索實(shí)驗(yàn),取出平臺(tái),將老鼠放在前一個(gè)測(cè)試的相反象限的水中。觀察每只老鼠的游泳路徑,記錄90 s內(nèi)老鼠越過(guò)原平臺(tái)位置的次數(shù)(跨平臺(tái)次數(shù))。

1.4.2 海馬膠質(zhì)細(xì)胞損傷水平

在術(shù)后1 d、3 d、7 d進(jìn)行測(cè)試,每次測(cè)試后每組8只大鼠斷頭取腦,分離海馬組織,冰浴下超聲波粉碎,制成勻漿,10000×離心10 min,取上清。ELISA法檢測(cè)GDNF蛋白表達(dá)水平(450 nm觀察,酶標(biāo)儀ricso rk201,深圳ricso科技有限公司,Ltd,深圳)。

1.4.3 小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞激活水平

采用CD68蛋白表達(dá)代表小膠質(zhì)細(xì)胞激活水平,GFAP代表星形膠質(zhì)細(xì)胞激活水平,免疫熒光法檢測(cè)。小鼠抗大鼠單克隆CD68抗體(AbD Serotec公司,英國(guó)),兔抗大鼠多克隆GFAP抗體(Abcam公司,英國(guó))。所有免疫熒光圖像釆用Leica Application Suit Version3.7(LAS V3.7)釆集,分別在海馬CA1、CA3、DG區(qū)采集各指標(biāo)免疫熒光圖像,每只大鼠隨機(jī)抽取5張切片,每張切片隨機(jī)抽取5個(gè)視野,釆用Image-Pro Plus圖像分析系統(tǒng),以平均光密度值反映目的蛋白的表達(dá)水平,結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。參照孫曉彩等[8]介紹的方法,對(duì)海馬CA1、CA3、DG區(qū)取材。大鼠斷頭取腦后置于冰盒上,快速取海馬,置于解剖顯微鏡下,去除周邊多余組織及血管,切除兩末端,將剩余海馬等份切為三段,垂直放置,找到海馬錐體線后,先切CA3區(qū),在大彎端,將剩余部分沿錐體線一分為二,上端透明部分為CA1,下端深色為DG區(qū)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,計(jì)數(shù)資料采用次和百分比表示。采用單因素重復(fù)測(cè)量方差分析()比較3組之間的差異及各組的兩兩之間的差異。以＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 電針顯著改善POCD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力

Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與假手術(shù)組(S組)相比較,肝葉切除術(shù)(M組)后大鼠1 d、3 d、7 d的逃避潛伏期均顯著延長(zhǎng)(＜0.05)(見圖1),跨平臺(tái)次數(shù)顯著減少(＜0.05)(見圖2),提示手術(shù)導(dǎo)致了大鼠術(shù)后記憶功能顯著下降。當(dāng)在特定穴位給予電針刺激后(EA組)大鼠1 d、3 d、7 d的逃避潛伏期雖然仍較假手術(shù)組延長(zhǎng),但較手術(shù)的模型組(M組)已經(jīng)顯著縮短,跨越平臺(tái)次數(shù)顯著增加(＜0.05)(見圖1、表1、圖2、表2)。提示,特定穴位電刺激可以顯著抑制記憶能力的顯著下降。

圖1 術(shù)后7 d逃避潛伏期(s)

圖2 術(shù)后7 d單位時(shí)間內(nèi)跨越平臺(tái)次數(shù)

表1 各組不同時(shí)間點(diǎn)逃避潛伏期比較 (±s,s)

注:與S組同時(shí)點(diǎn)比較1)＜0.05;與M組同時(shí)點(diǎn)比較2)＜0.05

表2 各組不同時(shí)間點(diǎn)跨越平臺(tái)次數(shù)比較 (±s,次)

注:與S組同時(shí)點(diǎn)比較1)＜0.05;與M組同時(shí)點(diǎn)比較2)＜0.05

2.2 電針顯著減輕POCD大鼠海馬膠質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷

膠質(zhì)源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)是一種多肽類的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,對(duì)損傷的神經(jīng)細(xì)胞有營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)作用。結(jié)果顯示,接受手術(shù)后(M組)大鼠GDNF含量顯著下降(＜0.05),而復(fù)合電針刺激的大鼠(EA組)GDNF表達(dá)較M組顯著回升(＜0.05)(見表3)。提示電針刺激能減輕手術(shù)誘導(dǎo)海馬膠質(zhì)細(xì)胞的損傷。

表3 不同時(shí)間點(diǎn)海馬GDNF表達(dá)水平比較 (±s,ng/mL)

注:與S組同時(shí)點(diǎn)比較1)＜0.05;與M組同時(shí)點(diǎn)比較2)＜0.05

2.3 電針對(duì)海馬各區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞CD68和星形細(xì)胞GFAP表達(dá)的影響

與S組比較,M組術(shù)后1 d、3 d、7 d小膠質(zhì)細(xì)胞CD68的表達(dá)顯著上調(diào);與M組比較,復(fù)合針刺的EA組顯著抑制了術(shù)后CD68的上調(diào)(＜0.05)。與S組比較,術(shù)后1 d、3 d、7 d左肝葉切除的M組星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP表達(dá)顯著上調(diào),復(fù)合針刺干預(yù)的EA組則顯著抑制了GFAP的上調(diào)(＜0.05)。詳見表4、表5。

術(shù)后1 d、3 d時(shí)小膠質(zhì)細(xì)胞以胞體相對(duì)較小,突起喙突,偽足伸出,阿米巴樣改變的活化狀態(tài)為主(紅色);星形膠質(zhì)細(xì)胞主要發(fā)生了胞體變大,側(cè)枝變多的改變(綠色)。在7 d時(shí)小膠質(zhì)細(xì)胞多回復(fù)至胞體相對(duì)較大、形狀不規(guī)則、有細(xì)長(zhǎng)分支狀突起的靜息狀態(tài);星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體變小,側(cè)枝減少。詳見圖3。

表4 各組術(shù)后小膠質(zhì)細(xì)胞CD68表達(dá)的比較 (±s)

注:與S組同時(shí)點(diǎn)比較1)＜0.05;與M組同時(shí)點(diǎn)比較2)＜0.05

表5 各組術(shù)后星型膠質(zhì)細(xì)胞GFAP表達(dá)的比較 (±s)

注:與S組同時(shí)點(diǎn)比較1)＜0.05;與M組同時(shí)點(diǎn)比較2)＜0.05

圖3 EA組術(shù)后1 d、3 d、7 d海馬組織CD68和GFAP表達(dá)的免疫熒光圖

3 討論

術(shù)后認(rèn)知功能障礙是手術(shù)后常見的并發(fā)癥,表現(xiàn)為術(shù)后的學(xué)習(xí)記憶能力下降及失眠、焦慮、人格障礙等,嚴(yán)重的可出現(xiàn)抑郁及自殺傾向。尤其是老年患者,術(shù)后發(fā)生率顯著增加。雖然近年來(lái)進(jìn)行了大量的研究,但由于其機(jī)制不清,臨床尚無(wú)明確有效的防治措施[9-10]。

本研究中選擇了18月齡大鼠模擬老年機(jī)體進(jìn)行研究,根據(jù)文獻(xiàn)[6]選擇了肝左葉切除術(shù)建立POCD模型。行為學(xué)研究采用了經(jīng)典的Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)[11],手術(shù)前連續(xù)5 d對(duì)其進(jìn)行了訓(xùn)練,保證每只大鼠都能在90 s內(nèi)找到水下平臺(tái)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),手術(shù)后大鼠記憶能力出現(xiàn)了顯著下降,實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)為找到水下平臺(tái)時(shí)間顯著增加,同時(shí)在定位巡航實(shí)驗(yàn)中單位時(shí)間內(nèi)游過(guò)原水下平臺(tái)的次數(shù)顯著減少。而給予電針刺激的手術(shù)后大鼠,其記憶能力雖然仍較假手術(shù)組差,但是比沒有給予電針刺激的大鼠已經(jīng)顯著得到改善,提示電針特定穴位刺激可以改善手術(shù)刺激導(dǎo)致的記憶障礙。

針灸治療癡呆歷史源遠(yuǎn)流長(zhǎng),早在晉代皇甫謐的《針灸甲乙經(jīng)》中就有相關(guān)記載。針刺可通過(guò)刺激人體特定腧穴,起到疏通經(jīng)絡(luò)、調(diào)節(jié)神志、益智健腦等作用,在改善腦組織代謝、保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞以增強(qiáng)認(rèn)知功能等方面有確切療效。電針療法將大部分刺激進(jìn)行量化,可通過(guò)改變波形、頻率和刺激強(qiáng)度以達(dá)到更好的治療效應(yīng)[12]。近年來(lái)涌現(xiàn)出大量將電針用于防治認(rèn)知功能障礙的臨床和基礎(chǔ)研究,如錢立鋒等[13]發(fā)現(xiàn)電針刺激百會(huì)穴顯著改善患者卒中后認(rèn)知功能障礙。薛洋等[14]發(fā)現(xiàn)電針百會(huì)穴聯(lián)合神庭穴對(duì)卒中后認(rèn)知障礙治療效果更好。這些結(jié)果均提示電針刺激是有潛在應(yīng)用價(jià)值的治療方法,因此選擇了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步的研究,并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行了初步探究。前期研究發(fā)現(xiàn)改善大鼠POCD與調(diào)節(jié)海馬a7-煙堿型乙酰膽堿受體(a7- nAChR)的表達(dá)抑制海馬炎癥反應(yīng)[15],減少海馬神經(jīng)元細(xì)胞過(guò)度凋亡[16]及抑制腦源性神經(jīng)細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)有關(guān)[17]。

前期研究多集中在對(duì)神經(jīng)細(xì)胞,近年來(lái)發(fā)現(xiàn)其支持細(xì)胞——膠質(zhì)細(xì)胞同樣起著重要作用[18-19],因此本研究對(duì)其進(jìn)行了觀察。神經(jīng)細(xì)胞分泌腦源性神經(jīng)細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF),同樣神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞也分泌膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF),其對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的存活起著重要作用[20-22]。記憶功能與海馬聯(lián)系緊密,尤其是CA1區(qū)神經(jīng)元比較致密,起著重要作用,因此選擇了CA1區(qū)進(jìn)行了觀察。結(jié)果顯示,手術(shù)后1～7 d均出現(xiàn)GDNF含量顯著下降,而復(fù)合了電針的EA組大鼠,CA1區(qū)GDNF含量的下降則得到了部分的抑制。提示海馬區(qū)GDNF的表達(dá)參與了電針誘導(dǎo)的POCD改善。GDNF表達(dá)的增加是否導(dǎo)致確實(shí)減輕了膠質(zhì)細(xì)胞的損傷?因此,又進(jìn)行了進(jìn)一步對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化狀態(tài)進(jìn)行了研究。CD68和GFAP分別是兩者活化的標(biāo)志性蛋白,膠質(zhì)細(xì)胞活化后可以產(chǎn)生大量炎性細(xì)胞因子,而過(guò)度的炎癥反應(yīng)也是導(dǎo)致POCD因素之一,因此選擇了對(duì)其進(jìn)行檢測(cè),可以反映兩種膠質(zhì)細(xì)胞的存活量。通過(guò)免疫熒光觀察,所有大鼠術(shù)后1 d、3 d時(shí)海馬小膠質(zhì)細(xì)胞以胞體相對(duì)較小,偽足伸出,阿米巴樣改變的活化狀態(tài)為主(紅色);星形膠質(zhì)細(xì)胞主要發(fā)生了胞體變大,側(cè)枝變多的改變(綠色)。在7 d時(shí)小膠質(zhì)細(xì)胞多回復(fù)至胞體相對(duì)較大、形狀不規(guī)則、有細(xì)長(zhǎng)分支狀突起的靜息狀態(tài);星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體變小,側(cè)枝減少。接受手術(shù)的M組大鼠CD68和GFAP的表達(dá)顯著增加,提示手術(shù)應(yīng)激激活了海馬膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)。不只是手術(shù),楊美華[22]發(fā)現(xiàn)麻醉應(yīng)激同樣可以導(dǎo)致膠質(zhì)細(xì)胞的激活,導(dǎo)致POCD的發(fā)生。而復(fù)合電針刺激后的EA組大鼠,其CD68和GFAP的增加得到了顯著抑制,提示電針刺激可以抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活,進(jìn)而可以通過(guò)減輕中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng),改善POCD。

認(rèn)知功能涉及范圍較廣,本研究只觀察了學(xué)習(xí)和記憶,下一步有待對(duì)更多的指標(biāo)進(jìn)行觀察。膠質(zhì)細(xì)胞中樞神經(jīng)系統(tǒng)中包括星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞,本文只檢測(cè)了星形膠質(zhì)細(xì)胞與小膠質(zhì)細(xì)胞,還有少突膠質(zhì)細(xì)胞沒有研究。認(rèn)知功能還與大腦的皮質(zhì)有關(guān),海馬主要是與學(xué)習(xí)記憶關(guān)系緊密,對(duì)其他腦區(qū)的功能的影響也有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述,在本實(shí)驗(yàn)條件下發(fā)現(xiàn),電針刺激可顯著改善手術(shù)誘導(dǎo)POCD大鼠的認(rèn)知功能,其機(jī)制與抑制海馬膠質(zhì)細(xì)胞的激活有關(guān)。但詳細(xì)機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

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Effect of Electroacupuncture on Cognitive Function and Hippocampal Glial Cells in Partially Hepatectomized Rats

-,,-,.

’,200137,

To investigate the effect of electroacupuncture on surgical stress-induced cognitive dysfunction in rats and preliminarily explore its mechanism of action by observing the activation of hippocampal glial cells.Seventy-two aged male rats were randomized to three groups: control, model and electroacupuncture, 24 rats each. The control (sham) group (S group)received a sham operation. The model group (M group) received left hepatic lobectomy, which induced cognitive dysfunction. The electroacupuncture group (EA group) received left hepatic lobectomy and postoperatively electroacupuncture 30 min once daily. Cognitive function was assessed using the Morris water maze. Hippocampal glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The expressions of hippocampal microglia marker CD68 and astrocyte GFAP were determined by immunofluorescence.Compared with the M group, the escape latency shortened and the number of crossing platform increased in the EA group at one, three and seven day after the surgery (＜0.05). Hippocampal GDNF levels increased significantly in the M and EA groups of rats after the surgery compared with before (＜0.05). Compared with the M group, the expression of hippocampal GDNF was significantly up-regulated in the EA group after composite electroacupuncture regulation at various time points after the surgery (＜0.05). Hippocampal CD68 and GFAP expressions were significantly up-regulated in the M group postoperatively (＜0.05). The up-regulation of hippocampal CD68 and GFAP was significantly inhibited in the EA group after composite electroacupuncture regulation (＜0.05).Electroacupuncture can markedly improve memory function in rats with postoperative cognitive dysfunction. Its mechanism of action may be related to the inhibition of microglia and astrocyte activation.

Postoperative cognitive dysfunction; Electroacupuncture; Hepatic lobectomy; Microglia; Astrocyte; Rats

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2020.02.0226

1005-0957(2020)02-0226-06

2019-05-20

上海市浦東新區(qū)衛(wèi)生系統(tǒng)重要薄弱學(xué)科項(xiàng)目(PWZbr2017-19);上海市浦東新區(qū)衛(wèi)生系統(tǒng)學(xué)科帶頭人培養(yǎng)計(jì)劃(PWRd2016-17,PWRd2016-19)

劉佩蓉(1976—),女,副主任醫(yī)師,碩士,Email:lpeir@126com

彭生(1977—),男,副主任醫(yī)師,博士,Email:ps7707@163.com