精索靜脈血清抑制素B水平對精索靜脈曲張術(shù)后睪丸生精功能的預(yù)測

劉晃，鄭厚斌，張欣宗，唐運革，劉興章，文任乾，余森泉，周雨，鐘安

(廣東省計劃生育科學(xué)技術(shù)研究所，國家衛(wèi)生計生委男性生殖與遺傳重點實驗室，廣州 510600)

精索靜脈曲張是指精索內(nèi)靜脈、蔓狀靜脈叢的異常擴張和迂曲，在青壯年人群中高發(fā)，一般人群的發(fā)病率為10%～15%，而在不育癥人群中約為21%～41%[1]，是導(dǎo)致男性不育的主要原因之一。目前手術(shù)治療被公認是對精索靜脈曲張的首選治療方案，但其術(shù)后睪丸生精功能的恢復(fù)卻不十分理想。抑制素B(INHB)是抑制促性腺激素分泌的糖蛋白激素，目前被眾多學(xué)者認為是正常精子形成最重要的診斷標(biāo)志物，可作為評價男性生精功能的可靠指標(biāo)[2]。本研究通過觀察精索靜脈曲張患者的精索靜脈血清INHB的濃度高低，探討其與精索靜脈曲張術(shù)后睪丸生精功能的關(guān)系，將結(jié)果報道如下。

資料與方法

一、研究對象

選擇2014年1月至2015年7月到我院男科門診就診的，有正常性生活未采取任何避孕措施1年以上女方未孕的108例男性患者為研究對象，門診完善相關(guān)檢查后診斷為精索靜脈曲張引起的少、弱、畸形精子癥，于我院住院行精索靜脈曲張手術(shù)治療。108例患者中左側(cè)精索靜脈曲張78例，雙側(cè)精索靜脈曲張30例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合WHO第4版關(guān)于男性不育癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；(2)精子參數(shù)符合WHO第5版《人類精液檢查與處理實驗室手冊》關(guān)于少、弱、畸形精子癥的判斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；(3)精索靜脈曲張符合人民衛(wèi)生出版社第8版《醫(yī)學(xué)影像學(xué)》[5]和人民衛(wèi)生出版社第1版《男科學(xué)》[6]關(guān)于精索靜脈曲張的診斷和分級標(biāo)準(zhǔn)；(4)依從性高，樂意接受隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)排除手術(shù)禁忌證；(2)排除睪丸外傷、隱睪等手術(shù)史；(3)排除生殖道感染、傳染性疾病史；(4)排除染色體核型異常及Y染色體微缺失等遺傳性疾病；(5)排除先天性疾病及全身系統(tǒng)性疾病史；(6)排除長期藥物、毒性物質(zhì)接觸史；(7)排除女方因素導(dǎo)致的不育等綜合因素。

根據(jù)術(shù)后3個月復(fù)查精子參數(shù)的改善程度，分成手術(shù)無效組54例、顯效組54例。所有患者手術(shù)前均充分知情同意并簽署知情同意書。

二、研究方法

1. 手術(shù)方法：所有患者完善相關(guān)檢查后，均于上午9～12時之間在硬膜外麻醉下進行顯微精索靜脈曲張高位結(jié)扎術(shù)，術(shù)中取內(nèi)環(huán)口處橫行小切口切開皮膚，鈍性分離皮下組織至腹外斜肌腱膜，剪開腹外斜肌腱膜，分開腹橫筋膜和腹內(nèi)斜肌肉暴露精索，打開精索包膜，剝離精索內(nèi)脂肪，游離精索血管，進行顯微鏡下精索靜脈結(jié)扎術(shù)，術(shù)中采用無菌測量尺進行靜脈直徑的測量和抽取曲張的精索靜脈血，離心獲得精索靜脈血清，4℃冰箱保存待統(tǒng)一檢測。

2. 精液檢測：所有患者于手術(shù)前1 d和術(shù)后3個月參照WHO標(biāo)準(zhǔn)在禁欲5 d后手淫法取得完整的精液標(biāo)本，置于37℃水浴箱內(nèi)，精液充分液化后按照《人類精液檢查與處理實驗室手冊》操作由專人進行精子參數(shù)的檢測。

3. 血液檢測：所有患者于手術(shù)前1個月內(nèi)和術(shù)后3個月上午8時由專人抽取空腹外周靜脈血注入非抗凝離心管，以3 000g離心15 min，分離血清置4℃冰箱保存待統(tǒng)一檢測。其中外周血性激素的檢測采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測血清FSH、LH、睪酮(T)水平，使用德國Bayel公司試劑盒，按試劑盒要求規(guī)范操作；INHB檢測采用美國Beckman Coulter公司試劑盒進行Elisa檢測，嚴格按照試劑盒說明書操作。

4. 隨訪：所有患者均有專人進行術(shù)后隨訪，隨訪患者術(shù)后3個月的精子濃度、前向運動精子總數(shù)、正常形態(tài)精子百分率、外周血性激素、外周血INHB等指標(biāo)。

5. 療效標(biāo)準(zhǔn)：參照《精索靜脈曲張診斷與治療中國專家共識》[7]，術(shù)后3個月隨訪精液參數(shù)改善情況。根據(jù)改善程度分為兩個等級：(1)顯效：精子濃度、前向運動精子總數(shù)、正常形態(tài)精子百分率3項中有1項或多項有顯著提高；(2)無效：精子濃度、前向運動精子總數(shù)、正常形態(tài)精子百分率3項均無顯著提高。

四、統(tǒng)計學(xué)分析

結(jié) 果

一、兩組患者術(shù)前一般資料情況

本研究納入的108例患者年齡22～38歲，平均年齡(29.8±3.5)歲；原發(fā)不育者82例，繼發(fā)不育者26例；病程1～4年，平均病程(2.4±0.9)年。無效組與顯效組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)(表1)，兩組具有可比性。

二、兩組患者手術(shù)前后精液參數(shù)比較

顯效組術(shù)后的精子濃度、PR精子總數(shù)、正常形態(tài)精子百分率及外周血INHB均較術(shù)前有顯著提高(P<0.05)，但外周血性激素水平無顯著變化(P0.05)(表2)。無效組術(shù)后的外周血INHB水平[(139.33±7.13)pg/ml]較術(shù)前[(134.37±6.61)pg/ml]有顯著提高(P<0.05)，其他各項指標(biāo)之間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。

三、兩組患者術(shù)后相關(guān)參數(shù)比較

無效組與顯效組比較，術(shù)后外周血性激素、外周血INHB、精索靜脈曲張的程度和直徑均無顯著性差異(P0.05)；但顯效組的術(shù)后精子參數(shù)和精索靜脈血清INHB水平顯著高于無效組(P<0.05)(表3)。

表1 兩組患者一般資料比較(-±s)

表2 顯效組手術(shù)前后相關(guān)參數(shù)比較(-±s)

注：與術(shù)前比較，*P<0.05

表3 兩組患者術(shù)后相關(guān)參數(shù)比較(-±s)

注：與無效組比較，*P<0.05

討 論

在WHO男性不育癥的常見病因中，精索靜脈曲張列居首位[3]，雖然目前對引起精索靜脈曲張的發(fā)生機制尚未有統(tǒng)一的觀點，但其對于男性精子濃度、精子活力、精子正常形態(tài)等方面的負面影響被國內(nèi)外學(xué)者公認[8-10]。目前手術(shù)治療仍是精索靜脈曲張的首選治療方案。但手術(shù)后不育患者的精子質(zhì)量變化不一，引起了部分學(xué)者對于手術(shù)處理精索靜脈曲張療效的爭議。我們在前期的研究中發(fā)現(xiàn)：手術(shù)治療精索靜脈曲張不育癥后2年配偶妊娠率顯著高于自然受孕率，但也有部分患者手術(shù)后精子參數(shù)未出現(xiàn)理想的變化[11]，這對于精索靜脈曲張手術(shù)的療效提出了挑戰(zhàn)。本次研究中只有50%的患者精子質(zhì)量有改善，這可能與我們觀察的時間為術(shù)后3個月有一定關(guān)系，臨床中我們發(fā)現(xiàn)部分患者可以在術(shù)后6個月或1年左右才有精子質(zhì)量改善。

INHB是一種抑制促性腺激素分泌的糖蛋白激素，在育齡期男性它由支持細胞和各個不同時期的生精細胞共同作用而分泌產(chǎn)生。Dadfar等[12]發(fā)現(xiàn)INHB水平可以直接評估睪丸生精功能的高低。Canning等[13]對患有隱睪的男嬰進行研究發(fā)現(xiàn)，INHB水平與年齡有相關(guān)性，其可直接評估睪丸的生精功能和生精小管的發(fā)育狀態(tài)。辛玲等[14]對INHB亞基在1、4、8及28周齡小鼠睪丸和腦組織中的表達及分布進行研究，發(fā)現(xiàn)INHB可在不同周齡小鼠的腦組織和睪丸組織中表達，表達程度隨小鼠的周齡和體重增長而增長，在成年小鼠的表達最高。Kim等[15]認為INHB與FSH水平呈負相關(guān)，其參與FSH的負反饋調(diào)節(jié)。Fujisawa等[16]發(fā)現(xiàn)精索靜脈曲張的發(fā)生影響了睪丸INHB的分泌，也導(dǎo)致了生精功能的降低。國內(nèi)姜應(yīng)傳等[17]也發(fā)現(xiàn)改進型實驗性左側(cè)精索靜脈曲張可以導(dǎo)致大鼠FSH的升高以及INHB的下降，這些變化可能是影響生育能力的機制之一。綜合國內(nèi)外的研究可見，INHB在精索靜脈曲張患者中對于生精功能的影響，其主要機制可能是精索靜脈曲張引起的血液返流造成了睪丸局部生精環(huán)境的損害，如睪丸溫度、缺氧、氧化應(yīng)激、血管毒性物質(zhì)、細胞凋亡、分子遺傳學(xué)等[18]方面的改變，尤其是當(dāng)損害影響了睪丸生精細胞、支持細胞和間質(zhì)細胞等的功能時，常常就表現(xiàn)為精子發(fā)生的異常。本研究結(jié)果顯示108例患者行顯微精索靜脈曲張高位結(jié)扎術(shù)后其外周血的性激素水平較術(shù)前無顯著變化，但外周血的INHB卻均較術(shù)前有顯著提高(P<0.05)，尤其是顯效組，在術(shù)后3個月隨訪時發(fā)現(xiàn)精子濃度、前向運動精子總數(shù)、正常形態(tài)精子百分率均有顯著提高，這與國內(nèi)其他學(xué)者的觀察[19-20]相一致。

與其他學(xué)者研究結(jié)論有所不同的是，本研究中無效組術(shù)后外周血的INHB水平也較術(shù)前有顯著提高(P<0.05)，但術(shù)后3個月的精子濃度、前向運動精子總數(shù)、正常形態(tài)精子百分率等參數(shù)卻未見顯著性變化，分析這可能與患者精索靜脈血清中的INHB水平變化有一定關(guān)系。為此，我們對手術(shù)中測量的無效、顯效兩組患者的精索靜脈曲張程度和直徑進行了比較，將兩組手術(shù)中所收集的精索靜脈血清，做了精索靜脈INHB的檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)雖然無效、顯效兩組間精索靜脈曲張的程度和直徑無顯著差異，但顯效組患者精索靜脈血清的INHB水平顯著高于無效組(P<0.05)，提示在手術(shù)前雖然無效、顯效兩組的精索靜脈曲張程度相同，但是顯效組患者睪丸內(nèi)的生精環(huán)境損害程度沒有無效組嚴重，因此，術(shù)后顯效組患者的生精功能恢復(fù)比無效組更為理想。結(jié)合前期研究，我們考慮精索靜脈血清中的INHB水平可能對評估精索靜脈曲張術(shù)后睪丸的生精功能更敏感，更能夠預(yù)測精索靜脈曲張手術(shù)的療效。

但由于樣本量比較小，分析的層次尚未深入，后續(xù)將在臨床中開展多中心的大樣本量研究加以探討驗證。

【參 考 文 獻】

[1] 王益鑫 主編.男性不育癥診斷與治療[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)文獻出版社，1998：254-283.

[2] Ozden C，Ozdal OL，Bulut S，et al. Effect of varicocelectomy Onserum inhibin B levels in infertile patients with varicocele[J].Scand J Urol Nephrol，2008，42：441-443.

[3] WHO. WHO manual for the standardized investigation，diagnosis and management of the infertile male[M]. 4th ed. Cambrige：Cambrige University Press，2006：11-46.

[4] 曹興午，林凱，李翠英，等. 評《WHO人類精液檢查與處理實驗室手冊》(第5版)[J].中華男科學(xué)雜志，2011，17：1059-1063.

[5] 白人駒，徐克 主編.醫(yī)學(xué)影像學(xué)[M]. 第8版.人民衛(wèi)生出版社，2013：521-525.

[6] 郭應(yīng)祿，胡禮泉 主編.男科學(xué)[M].第1版. 人民衛(wèi)生出版社，2004：469-483.

[7] 中華醫(yī)學(xué)會男科學(xué)分會.精索靜脈曲張診斷與治療中國專家共識[J].中華男科學(xué)雜志，2015，21：1035-1042.

[8] Baazeem A，Belzile E，Ciampi A，et al. Varicocele and male factor infertility treatment：A new meta-analysis and review of the role of varicocele repair[J].Eur Urol，2011，60：796-808.

[9] Schauer I，Madersbacher S，Jost R，et al. The impcat of varicocelectomyon：sperm parameters：A meta-analysis[J].J Urol，2012，187：1540-1547.

[10] Elzanaty S. Varicocele repair in non-obstructive azoospermic men：Diagnostic value of testicular biopsy-a meta-analysis[J].Scand J Urol，2014，48：494-498.

[11] 劉晃，唐立新，姚曉濤，等.手術(shù)治療精索靜脈曲張不育癥的效果觀察[J].中國綜合臨床，2011，27：183-185.

[12] Dadfar M，AbangmpourA，Habiby A，et al. Pre-operative serum level of inlibin B as a predictor of spermatogenesis improvement after varicolectomy[J].Urol J，2010，7：110-114.

[13] Canning DA. Re：pre-and postoperative status of gonadotropins(FSH and LH)and inhibin-B in relation to testicular histopathology at orchiopexy in infant boys with unilateral undescended testes[J].J Uro1，2016，196：1257-1258.

[14] 辛玲，趙海豹，侯麗，等.抑制素B亞基在小鼠睪丸和腦組織中的表達和分布[J].生殖醫(yī)學(xué)雜志，2017，26：605-609.

[15] Kim HT，Song PH，Moon KH. Microsurgical ligation for painfulvaricocele：Effectiveness and predictors of pain resolution[J].Yonsei Med J，2012，53：145-150.

[16] Fujisawa M，Dobashi M，Yamasaki T，et al. Significance of serum inhibin B concentration for evaluating inprovement in spermatogenesis dfter varicocelectomy[J].Hum Reprod，2001，16：1945-1949.

[17] 姜應(yīng)傳，俞建軍，閏濤，等.改進型實驗性左側(cè)精索靜脈曲張的建立及其對大鼠卵泡刺激素及抑制素B的影響[J].中華男科學(xué)雜志，2010，16：495-497.

[18] 宋景艷，孫振高.精索靜脈曲張致睪丸生精功能障礙的機制研究進展[J].生殖醫(yī)學(xué)雜志，2016，25：186-189.

[19] 劉美菊，王恩華.精索靜脈曲張對精液質(zhì)量和血清、精漿中抑制素B水平的影響[J].中華男科學(xué)雜志，2014，20：44-47.

[20] 蘇新軍，吳科榮，方立，等.血清抑制素B在精索靜脈曲張術(shù)后精液質(zhì)量改善的預(yù)判價值[J].中華男科學(xué)雜志，2014，20：566-568.