慢性乙型肝炎患者血清α1微球蛋白水平與HBV-DNA載量的相關(guān)性研究*

耿 輝，魏雁虹，楊廣民

吉林省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗中心，吉林長春 130021

慢性乙型肝炎(CHB)是由乙型肝炎病毒(HBV)感染導(dǎo)致的一種傳染性肝臟疾病，若不及時治療，較易發(fā)展為肝硬化與肝癌。據(jù)統(tǒng)計，全球約有4億人為HBV攜帶者，近30%的世界人口感染或曾經(jīng)感染過HBV[1]。2006年全國乙型肝炎流行病學(xué)調(diào)查表明，我國1～59歲人群HBV攜帶率為7.18%，5歲以下兒童為0.96%，現(xiàn)有HBV感染者約9 300萬人，其中CHB患者約2 000萬人[2]。因此早期發(fā)現(xiàn)病毒性肝炎患者的肝臟損傷程度十分重要，目前臨床中用于檢測肝臟功能的指標(biāo)較多，但準(zhǔn)確客觀地反映肝臟的實(shí)際功能情況的指標(biāo)較少。CHB患者的血清乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)水平隨分期不同而存在一定變化，在臨床中可作為判斷患者病毒感染程度的重要指標(biāo)[3]。同時，HBsAg水平和病毒載量密切相關(guān)，可用于評價CHB的治療效果。乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBV-DNA)載量升高被認(rèn)為是反映HBV復(fù)制最靈敏的檢測指標(biāo)。研究顯示，血清HBV-DNA載量不僅與肝臟損傷相關(guān)，同時也是選擇臨床治療藥物的重要依據(jù)[4]。有研究表明，血清α1微球蛋白(α1-MG)可作為評價肝臟損傷有效指標(biāo)，臨床價值較高[5-6]。本研究旨在探討CHB患者血清α1-MG水平與HBV-DNA載量的相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2016年5月至2018年9月收治的300例CHB患者為研究對象?；颊呔衔墨I(xiàn)[5]的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除合并甲型、丙型、戊型肝炎，長期嗜酒，特殊用藥者27例，以及腎功能異?；颊?0例，最終納入研究的CHB患者共233例?；颊咧蠬BsAg陽性患者190例(HBsAg陽性組)，乙型肝炎e抗原(HBeAg)陽性患者43例(HBeAg陽性組)。同時，根據(jù)HBV-DNA復(fù)制情況將233例CHB患者分為HBV-DNA低載量患者(HBV-DNA載量<103copy/mL)及HBV-DNA高載量患者(HBV-DNA載量>103copy/mL)。

1.2儀器與試劑 ABI-7500型PCR檢測儀(檢測下限為5×102copy/mL)，貝克曼AU2700型全自動生化分析儀，Heraeus Biofuge stratos低溫臺式離心機(jī)，DYY-Ⅲ垂直電泳槽，GILSON加樣器。肝功能、腎功能檢測試劑盒(上?？迫A生物工程股份有限公司)，血清α1-MG、β2微球蛋白(β2-MG)檢測試劑盒[英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司]，Trizol，氯仿，異丙醇，無水乙醇、DEPC處理水(美國伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司)。

1.3方法 所有患者于入院后6 h內(nèi)采用帶分離膠采血管采集靜脈血5 mL，離心后吸取上層血清，分裝備檢。所有患者均未進(jìn)行過抗病毒治療。取出備檢血清室溫融化，采用免疫比濁法檢測血清α1-MG。采用紫外-乳酸脫氫酶法檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，采用紫外-蘋果酸脫氫酶法檢測天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，采用散射比濁法檢測前清蛋白(PA)，采用AMP緩沖液法檢測堿性磷酸酶(ALP)，采用肌氨酸氧化酶法檢測肌酐(CRE)，采用紫外-谷氨酸脫氫酶法檢測血尿素氮(BUN)。采用免疫比濁法檢測血清β2-MG、α1-MG水平。檢測的儀器均為全自動生化分析儀。各指標(biāo)參考范圍如下：ALT>60 IU/L；BUN≤7.2 mmol/L；CRE水平，男性≤106 μmol/L，女性≤97 μmol/L。采用熒光定量PCR法檢測HBV-DNA載量。取混勻的血清20 μL加入20 μL裂解液，混勻后100 ℃沸水浴10 min，最后以15 000 r/min離心3 min，取4 μL上清液待檢。檢測時，加入4 μL待檢上清液于底層反應(yīng)液中，混勻后高速離心片刻，然后放入PCR儀進(jìn)行檢測，設(shè)置程序94 ℃預(yù)變性2 min，再按94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s擴(kuò)增35個循環(huán)。以上所有操作均嚴(yán)格按照操作說明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1HBsAg陽性患者中不同HBV-DNA載量水平患者血清α1-MG水平的比較 190例HBsAg陽性患者HBV-DNA載量分析結(jié)果顯示，HBV-DNA高載量患者88例(高載量A組)，HBV-DNA低載量患者102例(低載量A組)。高載量A組α1-MG水平為(26.5±8.5)mg/L，低載量A組α1-MG水平為(20.5±5.5)mg/L，兩組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.105 7，P>0.05)。

2.2HBeAg陽性患者中不同HBV-DNA載量水平患者血清α1-MG水平的比較 43例HBeAg陽性患者HBV-DNA載量分析結(jié)果顯示，HBV-DNA高載量患者15例(高載量B組)，HBV-DNA低載量患者28例(低載量B組)。高載量B組α1-MG水平為(19.2±7.2)mg/L，低載量B組α1-MG水平為(18.5±6.3)mg/L，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t= 1.325 1，P>0.05)。

3 討 論

目前，血清α1-MG已用于評價腎功能，且應(yīng)用于臨床相關(guān)疾病的診斷、治療、判定預(yù)后。梁旭霞等[7]研究發(fā)現(xiàn)，α1-MG預(yù)測子癇前期的靈敏度、特異度均較高，并對疾病的發(fā)展及預(yù)后評估有一定價值。謝慶平等[8]發(fā)現(xiàn)α1-MG及血清胱抑素C聯(lián)合檢測可以作為診斷早期糖尿腎病的重要依據(jù)。耿輝[9]研究顯示，α1-MG在肝功能異?；颊咧信c肝功能指標(biāo)ALT及AST呈顯著負(fù)相關(guān)，且其水平隨著肝損傷程度的加重而降低。莫明發(fā)[10]研究表明，肝炎、肝硬化等肝病及艾滋病患者中α1-MG水平降低。徐美等[11]研究發(fā)現(xiàn)，在HBV慢性感染的不同階段，患者血清中HBsAg水平存在明顯差異，從免疫耐受期到HBeAg陰性期，患者血清中HBsAg水平呈不斷升高的趨勢，而HBV-DNA載量則呈下降趨勢。以上結(jié)果說明HBsAg陽性患者HBV-DNA載量與HBsAg水平呈負(fù)相關(guān)。此外，周銳峰等[12]研究發(fā)現(xiàn)，在病程早期，HBV-DNA載量和HBeAg水平與原發(fā)性肝癌(PHC)分期及進(jìn)程有一定相關(guān)性。王志劍等[13]發(fā)現(xiàn)，HBeAg轉(zhuǎn)陰前，CHB患者總HBV-DNA水平和cccDNA水平呈正相關(guān)，HBV與丙型肝炎病毒感染和PHC的發(fā)病進(jìn)程存在相關(guān)性[14]。本研究共檢測了233例CHB患者血清中α1-MG水平，根據(jù)HBsAg、HBeAg陽性情況對患者進(jìn)行分組，結(jié)果表明，HBsAg陽性患者中，HBV-DNA高載量A組α1-MG水平為(26.5±8.5)mg/L，低載量A組α1-MG水平為(20.5±5.5)mg/L，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.105 7，P>0.05)；HBeAg陽性患者中HBV-DNA高載量B組α1-MG水平為(19.2±7.2)mg/L，低載量B組α1-MG水平為(18.5±6.3)mg/L，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.325 1，P>0.05)。說明患者在不同HBV-DNA復(fù)制水平情況下CHB患者血清α1-MG 的水平差異較小，α1-MG水平變化并非病毒導(dǎo)致，患者血清α1-MG水平與HBV感染無關(guān)。

綜上所述，血清α1-MG與HBV-DNA載量無明顯相關(guān)性，不能用于判斷CHB患者病毒復(fù)制情況，對病變的嚴(yán)重程度、觀察療效及評估預(yù)后無指導(dǎo)作用。