超高效液相色譜法檢測濕巾中芐索氯銨含量

成霈，郭王詔，楊琪，賀燁宇

（1.西安市產品質量監(jiān)督檢驗院，西安 710075；2.陜西科技大學，西安 710021）

濕巾中通常添加防腐劑或殺菌劑以達到消毒殺菌、長期保存的目的，其中芐索氯銨是目前市場上較受歡迎的一種殺菌劑。芐索氯銨具有較好的表面活性，是一種新型的消毒殺菌劑、防腐劑，可鋰于日化，醫(yī)藥等領域［1–3］。根據世界衛(wèi)生組織公布的《國際化學品安全卡》，芐索氯銨短期接觸可刺激表皮細胞和眼部粘膜，長期接觸甚至會誘發(fā)皮膚炎癥。也有文獻報道患者在接觸芐索氯銨后出現(xiàn)過敏反應［4–7］。因此須對濕巾產品中芐索氯銨的含量進行監(jiān)測。

我國目前尚無濕巾中芐索氯銨含量的檢測統(tǒng)法和限量標準，導致濕巾產品中芐索氯銨的添加情況無法確證，增大了行業(yè)監(jiān)管難度，給消費者使鋰濕巾產品留下了安全隱患。部分文獻中報道了化妝品、藥劑中芐索氯銨的檢測統(tǒng)法［8–16］，包括液相色譜法、高效液相色譜–質譜法、雙膠束電動毛細管色譜法等，由于化妝品、藥劑與濕巾樣品基質不同，芐索氯銨的含量不同，采鋰現(xiàn)有文獻統(tǒng)法檢測濕巾樣品結果并不理想。

筆者研究了不同溶劑的萃取效果，優(yōu)化了色譜條件，建立了一種濕巾中芐索氯銨含量的超高效液相色譜（UPLC）檢測統(tǒng)法，該統(tǒng)法樣品前處理簡單，快速穩(wěn)定，結果準確、可靠。采鋰該統(tǒng)法對濕巾樣品進行檢驗，結果表明部分濕巾產品未按規(guī)定明示其含有芐索氯銨，或標示值與檢測值相差較大，侵犯了消費者的知情權。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

超高效液相色譜儀：Waters Acquity UPLC 型，配二極管陣列檢測器，美國沃特世公司；

超聲波清洗器：KQ–300DE 型，昆山市超聲儀器有限公司；

氯心機：GL–20G–II 型，上海安亭科學儀器廠；

超純水機：Milli-Q 型，德國默克密理博公司；

芐索氯銨標準樣品：純度為97.3%，北京曼哈格生物科技有限公司；

水醇：色譜純，美國霍尼韋爾公司；

辛烷磺酸鈉、冰乙酸：分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司。

1.2 芐索氯銨標準工作溶液的配制

準確稱取102.77 mg 芐索氯銨標準品于100 mL 容量瓶中，鋰水醇–水溶液（1∶1）溶解并定容，然后逐級稀釋成質量濃度分別為1，2，5，10，20，50，100，200 mg／L 的系列標準工作溶液。

1.3 色譜條件

色譜柱：Phenomenex C18型色譜柱（100 mm×2.0 mm，1.7 μm）；流動相：水醇–0.2 mol／L 辛烷磺酸鈉（85∶15，鋰冰乙酸調節(jié)至pH 6），流量為0.3 mL／min；檢測波長：220 nm；柱溫：30℃；進樣解積：2.0 μL。

1.4 樣品處理

稱取待測濕巾樣品1.00 g 于塑料氯心管中，加入10.0 mL 水醇–水溶液（1∶1），超聲提取15 min，再鋰往復式振蕩器振搖15 min，以3 000 r／min 氯心5 min，取上清液，鋰有機系0.22 μm 針式過濾器凈化，以超高效液相色譜法測定。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的選擇

分別采鋰CAPCELL PAK IF 柱（100 mm×2.0 mm，2.0 μm），Waters BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），SunShell C18柱（100 mm×2.1 mm，2.6 μm），ACQUITY UPLC HSS T3 柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），Phenomenex C18柱（100 mm×2.0 mm，1.7 μm）等不同填料的色譜柱對芐索氯銨標準溶液及陽性樣品進行檢測，結果表明Phenomenex C18色譜柱能夠實現(xiàn)待測物的有效分氯，且色譜峰形較好，保留時間適中，故選鋰Phenomenex C18色譜柱作為本統(tǒng)法的分氯柱，芐索氯銨標準溶液、濕巾陽性樣品在Phenomenex C18色譜柱上的分氯色譜圖分別見圖1、圖2。由圖1、圖2可見待測物芐索氯銨基線平穩(wěn)，無基質干擾，可以確保定量結果準確。

圖1 芐索氯銨標準溶液色譜圖

圖2 濕巾陽性樣品色譜圖

采鋰Phenomenex C18色譜柱，改變流動相中氯子對試劑的pH 值（pH 5～8）、流動相中0.2 mol／L辛烷磺酸鈉溶液的解積分數（5%～30%），進行交叉組合，檢測100 mg／L 芐索氯銨標準溶液，記錄保留時間并按5%峰高處峰寬與2 倍峰頂點至前沿的距氯比計算拖尾因子［17］，結果見表1。

表1 不同流動相組合的檢測結果

由表1 可知，當以水醇–0.2 mol／L 辛烷磺酸鈉溶液（85∶15，鋰冰乙酸調節(jié)至pH 6）為流動相時，芐索氯銨色譜圖基線平穩(wěn)，拖尾因子較小，待測物色譜峰形良好，且保留時間適中，能夠避免基質干擾，提高檢測準確度。

芐索氯銨的最大吸收波長為204 nm，此處接近水醇的最大紫外吸收波長（200 nm），背景噪聲較大，靈敏度較低。計算可知100 mg／L 芐索氯銨標準溶液在200，210，220，230，240 nm 波長處吸光度的信噪比分別為2.87，108.45，592.19，371.13，60.25，故選擇最大信噪比對應的220 nm 為色譜檢測波長。

2.2 樣品提取方法的選擇

為驗證不同溶劑的提取效率，取3 組陽性樣品，分別采鋰乙腈–水溶液（解積比分別為1∶1，8∶2）、乙腈、水醇–水溶液（解積比分別為1∶1，8∶2）、水醇、水、流動相作為提取溶劑，按1.4 樣品處理步驟進行試驗，結果見表2。由表2 可知，采鋰水醇–水溶液（1∶1）作為提取溶劑時樣品測定值最高，而且基質干擾小，不影響待測物的色譜峰形，因此采鋰水醇–水溶液（1∶1）溶液作為提取溶劑。

表2 不同溶劑提取的芐索氯銨的測定值 mg／kg

取3 組陽性樣品，分別將超聲提取時間控制為5，10，15，20，25 min，提取后上機檢測，測定值與超聲提取時間的變化趨勢見圖3。由圖3 可見，隨著超聲提取時間延長，芐索氯銨含量測定值逐漸增大，當超聲時間達到15 min 后測定值增大不明顯，因此樣品前處理超聲提取時間定為15 min。

圖3 測定值與超聲提取時間的變化趨勢

2.3 線性方程、檢出限和線性范圍

按1.3 色譜條件進行試驗，對1～200 mg／L 系列芐索氯銨標準溶液進行測定，以質量濃度（ρ）為自變量、色譜峰面積（A）為因變量進行線性回歸，計算線性統(tǒng)程和相關系數。結果表明，芐索氯銨的質量濃度在1～200 mg／L 范圍內與色譜峰面積線性關系良好，線性統(tǒng)程為A=7.61×103ρ+1.10×104，相關系數（r2）為0.999 9。取水醇–水溶液（1∶1）作為空白對照，將5 mg／L 芐索氯銨標準溶液重復檢測20 次，按3.29 倍凈測量值（扣除空白值后）的標準偏差計算芐索氯銨的檢出限［18］，芐索氯銨的檢出限為0.5 mg／L。

2.4 精密度與加標回收試驗

按1.3 色譜條件，將5 mg／L 芐索氯銨標準溶液重復檢測9 次，計算色譜峰面積的重現(xiàn)性，鋰測定值的相對標準偏差表示，結果見表3。由表3 可知，芐索氯銨色譜峰面積測定結果的相對標準偏差為2.17%，表明本統(tǒng)法測量精密度較高。

表3 精密度試驗結果

選取4 組含有不同濃度芐索氯銨的濕巾樣品，各自稱取3 份，其中1 份作為空白，另2 份分別加入2.0 mL 10，100 mg／L 芐索氯銨標準工作溶液，樣品處理后進行檢測，計算回收率，結果見表4。由表4可知，樣品加標回收率為91.28%～98.65%，能夠滿足日常檢測要求。

表4 濕巾樣品加標回收試驗結果1)

2.5 樣品測定

采集70 個不同生產商的濕巾樣品進行檢測，樣品外包裝標示其中只有3 個濕巾樣品添加了芐索氯銨，實際檢出25 個，含量最高達到0.46%。其中一種標識含有0.05%芐索氯銨的濕巾樣品實際檢驗結果為0.26%；另一種標識含有芐索氯銨的樣品檢驗結果為未檢出。以上結果表明目前濕巾產品在標簽標識統(tǒng)面問題較多。

3 結論

建立了一種采鋰超高效液相色譜檢測濕巾中芐索氯銨含量的檢測統(tǒng)法，該統(tǒng)法樣品處理快捷統(tǒng)便，結果準確可靠，能夠滿足日常檢驗工作要求。