不同產地黃秋葵粗多糖體外抗氧化活性研究

何寶佳，魏 蔚，張艷華，彭王海，都帥帥，王偉前

黃秋葵（Abelmoschus moschatus）源產地非洲，于20世紀90年代傳入中國［1].目前，我國很多地區(qū)均已種植.研究表明，黃秋葵的水提液可以提高寒冷條件下小鼠存活率，消除運動后的乳酸堆積，降低血清尿素氮含量.黃秋葵的新鮮嫩果可供食用，含有豐富的蛋白質、不飽和脂肪酸、游離氨基酸、礦物質、維生素、生物堿等多種活性成分，此外，其果實中還含有豐富的黏液質，具有促進胃腸蠕動、抗胃炎、通便等功效，其葉、芽、花也可食用，花、種子、根均可入藥.黃秋葵含有豐富的營養(yǎng)物質，黃秋葵嫩果中由果膠和粗多糖等組成的粘性物質對人體具有促進消化［2-3]、調節(jié)血糖血脂、延緩衰老等功效，大量研究［4-6]證實，從天然產物中分離出的多糖具有重要的生物學功能［7]，特別是抗氧化作用.抗氧化能力的強弱與多糖的含量具有一定的聯系，不同產地、不同采收期，甚至是不同部位的黃秋葵，其膠質多糖的含量會有差異［8-9]，故本實驗采用吉林、安徽兩產地6月份、8月份、10月份采收期的黃秋葵嫩果，從中提取多糖活性成分進行初步的體外抗氧化活性強弱的研究.黃秋葵可以被選來作為一種保健蔬菜食用，日后可增加對不同產地、不同藥用部位的黃秋葵粗多糖抗氧化作用的功能研究.

1 試驗材料與方法

1.1 材料

（1）儀器.超聲波清洗器（寧波海曙科生超聲設備有限公司），電熱鼓風干燥箱（上海三發(fā)科學儀器有限公司），紫外分光光度計（上海元析儀器有限公司），電子天平（上海良平儀器儀表有限公司），恒溫水浴鍋（上海浦東電理儀器廠），旋轉蒸發(fā)儀（鞏義市予華儀器有限公司），索氏提取器等實驗室常用儀器.

（2）原料.黃秋葵嫩果（購自吉林、安徽的農貿市場）.

（3）試劑.DPPH（1，1-二苯基苦味酰基苯肼）；維生素C、石油醚、無水乙醇（均為分析純）；蒸餾水.

1.2 方法與步驟

（1）黃秋葵嫩果粗多糖的制備.

①石油醚脫脂［10]：將所采購的吉林、安徽兩產地的黃秋葵果實置于電熱鼓風干燥箱中烘干（60 ℃）后粉碎，過80 目篩制成黃秋葵粗粉.將黃秋葵粗粉置于索氏提取器中，用石油醚（沸點30～60 ℃）重復回流3次進行脫脂操作，每次脫脂時間2 h，以除去黃秋葵粗粉中的脂溶性物質［11-12].

②超聲輔助浸提［10]：脫脂后的黃秋葵粗粉置于水浴鍋鍋蓋上，設置加蓋水浴鍋的溫度恒定為50 ℃，促進粗粉中的石油醚揮發(fā)完全，之后將黃秋葵粗粉置于烘箱中（50 ℃）烘干1 h 后取出.往烘干后的粗粉中加入蒸餾水（1∶30料液比）［3]，超聲提?。?0 ℃，每次15 min，重復2次）合并2次的提取液進行抽濾，再過濾得濾液.使用旋轉蒸發(fā)儀將濾液減壓濃縮至1/5原體積得濃縮液.

③乙醇沉淀［9]：往濃縮液中加5 倍量濃縮液體積的無水乙醇進行醇析，靜置過夜留取沉淀物，經減壓干燥得黃秋葵粗多糖.

（2）測定黃秋葵粗多糖對DPPH 自由基（DPPH·）的清除率.

①配制DPPH工作液：精密稱取4 mg DPPH，用無水乙醇定容至100 mL 得100 μmol/L DPPH的工作液，低溫存放［6].

②精密稱取樣品1.000 0 g，用蒸餾水溶解并定容至100 mL，分別吸取2～7 mL 樣品液于6 個25 mL容量瓶中用蒸餾水定容［13]，配置樣品液的濃度為0.8～2.8 mg·mL-1.

③向6只已編號的10 mL的具塞管中分別滴加3 mL的DPPH溶液，再順次加入不同質量濃度的樣品溶液1 mL，充分混勻，測避光［5，6]放置30 min后的各管在波長517 nm［6-7，9-10]下的吸光度（A）值.每個質量濃度均設置3 個平行管同時測量，吸光度結果取3個測量值的算術平均值［6].

清除率計算公式如下：

DPPH·清除率%=［A0-（A1-A2）]/A0*100%［6]，A0為用等量的蒸餾水代替樣品溶液進行空白對照時測得的A 值；A1為加入樣品液（濃度為0.8 mg·mL-1、1.2 mg·mL-1、1.6 mg·mL-1、2 mg·mL-1、2.4 mg·mL-1、2.8 mg·mL-1）時測得的A 值；A2為用等量蒸餾水代替DPPH工作液時測得的A值.

④臨做實驗前用維生素C作對照，步驟與①相同，得與樣品溶液相同的質量濃度維生素C溶液，步驟與③相同，獲得維生素C對照組吸光度測量值.

2 結果與討論

2.1 不同產地、不同采收期黃秋葵粗多糖含量測定結果

以葡萄糖為標準品，用蒽酮-硫酸法［2]進行糖含量測定，各數據間采用SPSS 23.0 統計軟件中ANOVA方差分析，P＜0.05，結果見表1，吉林8月份黃秋葵粗多糖含量明顯高于別組，整體上來看，吉林黃秋葵粗多糖含量明顯高于安徽.

表1 不同產地不同采收期黃秋葵粗多糖含量 %

2.2 不同產地、不同采收期黃秋葵粗多糖對DPPH·的清除能力

在濃度0.8～2.8 mg·mL-1范圍內，各數據間采用SPSS 23.0統計軟件中ANOVA方差分析，P＜0.05；隨著黃秋葵粗多糖濃度的增加，其對DPPH·的清除率也增加，并且在0.8～2.8 mg·mL-1范圍內6月份的清除率隨著濃度的增加而明顯升高，并趨于穩(wěn)定.本次實驗結果發(fā)現，安徽產地6月份、8月份、10月份的黃秋葵嫩果均有較強的抗氧化能力，6月份的抗氧化能力最強，抗氧化活性整體上要優(yōu)于吉林產地的黃秋葵，盡管吉林省8月份黃秋葵抗氧化能力因其粗多糖含量高而相對較高，但與安徽相比較還是略低.結果詳見表2.

表2 不同產地黃秋葵粗多糖對DPPH·的清除率 %

圖1 不同產地不同采收期黃秋葵粗多糖對DPPH·的清除率

2.3 討論

李曉等［13]研究發(fā)現，黃秋葵粗多糖具有良好的體外抗氧化活性，于梅等［14]對黃秋葵超微粉多糖的提取工藝進行優(yōu)化并對其體外抗氧化活性也進行了研究，發(fā)現黃秋葵粗多糖對DPPH·等確實具有較強的清除能力，但是以往的研究均以單一產地為研究對象，且沒有闡明具體的采收時間等問題，而本實驗選擇了不同產地、不同采收期黃秋葵，并對其粗多糖含量進行了比較分析，發(fā)現吉林產黃秋葵果實中的粗多糖含量遠高于安徽產地，但從其DPPH·的體外抗氧化活性結果來看，安徽產6月份的黃秋葵對DPPH·的清除能力最強，分析其原因：可能是由于6月份是黃秋葵的盛果期，這個時候采收的黃秋葵其粗多糖中某些具有較強的抗氧化活性的單一成分含量較高，以至于其清除能力增強，本實驗結果為今后確定黃秋葵的采收時間提供了一定的理論依據.本實驗數據經SPSS 23.0 統計軟件中ANOVA方差分析，P＜0.05，說明各地區(qū)黃秋葵粗多糖對DPPH·的清除率結果具有統計學意義.

3 結論

近年來，隨著對植物抗氧化活性成分研究的不斷深入，植物性抗氧化物質在食品、化妝品和藥品等領域的使用日益增多，其既可作為天然營養(yǎng)因子加入乳制品、焙烤食品和飲料產品中，也可開發(fā)成為功能性食品，作為健康飲品或保健飲品供給特定人群食用［15].因此，黃秋葵具有廣闊的應用開發(fā)前景.本研究中，吉林產黃秋葵的粗多糖含量較高，但對DPPH·的清除能力略低于安徽6月份盛果期的清除能力，后期我們可對這兩個樣品中的粗多糖進行分離提純，通過進一步的體外抗氧化活性實驗及細胞模型和動物模型的體內抗氧化性做深入研究，以探究其構效關系，為其開發(fā)利用奠定一定的基礎.黃秋葵體內存在的自由基種類很多，本實驗僅初步研究了黃秋葵粗多糖對DPPH·的體外清除能力，過于單一，后期可以增加黃秋葵粗多糖對其他含氧自由基體外的清除能力研究.