脫氫乙酸鈉對(duì)水貂鮮配合飼料的防腐效果研究

李柯汝，趙偉臣，張?zhí)鹛穑煅嗉t，司志文，李文立*

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東青島 266109；2.山東菁華農(nóng)牧發(fā)展有限公司，山東諸城 262201）

水貂生產(chǎn)中通常采用鮮配合飼料，但鮮配合飼料的水分、蛋白質(zhì)和脂肪含量高，夏季高溫條件下短時(shí)間內(nèi)就容易腐敗變質(zhì)。飼料腐敗不僅會(huì)產(chǎn)生異味，影響適口性，而且還會(huì)破壞飼料品質(zhì)，降低營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，變質(zhì)飼料產(chǎn)生的毒素還可在水貂體內(nèi)蓄積，影響水貂健康和免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致水貂采食量降低，生長(zhǎng)發(fā)育受阻，繼發(fā)多種疾病，造成經(jīng)濟(jì)損失[1]。因此，夏季水貂鮮配合飼料的防腐是水貂生產(chǎn)中急需解決的重要問(wèn)題。脫氫乙酸鈉作為一種廣譜防腐劑，具有安全、高效、抗菌能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)易引起腐敗的酵母菌、霉菌、腐敗菌等具有良好的抑制效果，廣泛用于食品、化妝品、醫(yī)藥產(chǎn)品等防腐劑[2]。研究表明，脫氫乙酸鈉的抑菌作用不受酸堿度影響，在酸性或堿性條件下均有效，有效抑菌濃度為0.05%～0.10%，對(duì)畜禽配合飼料也有較好的防腐效果，已在豬、肉雞等配合飼料中廣泛應(yīng)用[3-5]。本試驗(yàn)在夏季水貂鮮配合飼料中添加不同水平的脫氫乙酸鈉，通過(guò)測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)鮮飼料的pH、揮發(fā)性鹽基氮和細(xì)菌菌落總數(shù)的變化，評(píng)價(jià)脫氫乙酸鈉對(duì)水貂鮮配合飼料的防腐保鮮效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)材料 脫氫乙酸鈉（DHA-S，C8H7NaO4）：純度99.0%，購(gòu)自廣州市安心生物制品有限公司。丙酸鈣的純度≥99%，購(gòu)自天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所。

1.1.2 試驗(yàn)飼糧 試驗(yàn)飼糧主要以海雜魚(yú)、魚(yú)排、雞腸、雞蛋、雞肝、雞頭、雞油、食用油、膨化玉米、水等原料組成?；A(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。

1.1.3 儀器設(shè)備 電子天平（ESJ200-4A，沈陽(yáng)龍騰電子有限公司）、振蕩器（KS-1，常州億通分析儀器制造有限公司）、恒溫培養(yǎng)箱（HWS 系列，上海丙林對(duì)自己有限公司）、高壓滅菌鍋（65L-1580L，德國(guó)systec）、電子酸度計(jì)（PHSJ-4F，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）、半自動(dòng)凱氏定氮儀（NKB3200，上海祎鴻分析儀器有限公司）、無(wú)菌操作臺(tái)、恒溫水浴鍋、多功能電爐、培養(yǎng)皿、滅菌玻璃珠、滅菌試管、滅菌移液管、三角瓶、試管架、酸式滴定管等。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)分為6 組，試驗(yàn)組分別在鮮配合飼料中添加脫氫乙酸鈉0、250、500、750、1 000 mg/kg，丙酸鈣組在鮮配合飼料中添加丙酸鈣2 000 mg/kg 作對(duì)照。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法 從水貂養(yǎng)殖場(chǎng)采集鮮配合飼料，冷藏保存快速送至實(shí)驗(yàn)室，按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)要求與脫氫乙酸鈉混合均勻，每組6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)鮮配合飼料質(zhì)量為1 kg。每個(gè)處理的每個(gè)重復(fù)的鮮飼料平均分裝放置在5 個(gè)培養(yǎng)皿中，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中，分別在0、4、8、12、16 h 測(cè)定不同處理鮮配合飼料的pH、揮發(fā)性鹽基氮（TVB-N）和細(xì)菌總數(shù)等指標(biāo)。

1.3.1 pH 準(zhǔn)確稱取試樣0.1 g 于離心管中，加入10 mL蒸餾水，混勻，3 000 r/min 離心10 min，取上清液用電子酸度計(jì)測(cè)定。

1.3.2 TVB-N TVB-N 按照《食品中揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定》（GB 5009.228-2016）[6]中的半微量定氮法測(cè)定。

1.3.3 細(xì)菌總數(shù) 測(cè)定方法參考《飼料中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定》（GB/T 13093-2006）[7]。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2003 進(jìn)行處理，用SPSS 17.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用One-Way ANOVA 和Duncan′s 進(jìn)行單因素方差分析和組間多重比較。結(jié)果以平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05 表示差異顯著，P＞0.05表示差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同時(shí)間點(diǎn)飼料中pH 的變化 由表2 可見(jiàn)，水貂飼料pH 隨著試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低，尤其是無(wú)脫氫乙酸鈉的0 mg/kg 脫氫乙酸鈉組組下降趨勢(shì)最為明顯，丙酸鈣組次之，然后是脫氫乙酸鈉試驗(yàn)組。0、4、8、12 h 時(shí)各處理pH 差異不顯著；0 mg/kg 脫氫乙酸鈉組組和丙酸鈣組16 h 的pH 低于250、500、750、1 000 mg/kg脫氫乙酸鈉組（P＜0.05）。

2.2 不同時(shí)間點(diǎn)飼料中TVB-N 的變化 由表3 可以看出，隨試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)，各組飼料TVB-N 含量均呈先降低后升高趨勢(shì)；脫氫乙酸鈉含量添加水平高的組TVB-N 含量上升趨勢(shì)緩慢。4 h 時(shí)0 mg/kg 脫氫乙酸鈉組組TVB-N 含量均高于其他處理組（P＜0.05），說(shuō)明此時(shí)脫氫乙酸鈉和丙酸鈣的防腐效果均較好；此后的各時(shí)間點(diǎn)盡管各處理間差異顯著，但TVB-N 值上升較快，尤其是0 mg/kg 脫氫乙酸鈉組組和丙酸鈣組。因此，脫氫乙酸鈉和丙酸鈣防腐效果最好的時(shí)間是4 h 以內(nèi)，但不同水平脫氫乙酸鈉之間差異不顯著。

2.3 不同時(shí)間點(diǎn)飼料中細(xì)菌總數(shù)的變化 由表4 可知，隨著試驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)，不同水平脫氫乙酸鈉的細(xì)菌總數(shù)大多呈先增后減再增加的趨勢(shì)，12 h 時(shí)最低。250 mg/kg脫氫乙酸鈉組從0～12 h 細(xì)菌總數(shù)始終下降，但16 h 顯著上升；而丙酸鈣組0 h 的細(xì)菌總數(shù)均低于其他各時(shí)間點(diǎn)。試驗(yàn)4、8、12 h 各處理的細(xì)菌總數(shù)差異不顯著；0、250 mg/kg 脫氫乙酸鈉組和丙酸鈣組16 h 的細(xì)菌總數(shù)高于其他各組（P＜0.05），脫氫乙酸鈉水平越高，細(xì)菌總數(shù)越少。

表2 不同時(shí)間點(diǎn)水貂飼料中pH 的變化

表3 不同時(shí)間點(diǎn)水貂飼料中TVB-N 含量的變化 mg/100g

表4 不同時(shí)間點(diǎn)水貂飼料中細(xì)菌總數(shù)變化 106CFU/g

3 討 論

3.1 不同時(shí)間點(diǎn)飼料中pH 的變化 夏季飼喂水貂的鮮配合飼料易腐敗變質(zhì)，味道變酸并伴有腐臭味。引起水貂鮮飼料pH 變化的原因，主要是其中的蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物在保存過(guò)程中經(jīng)細(xì)菌、霉菌和酵母菌等腐敗菌綜合作用的結(jié)果。蛋白質(zhì)經(jīng)腐敗菌分解產(chǎn)生胺類及氨基酸，脂肪氧化酸敗后產(chǎn)生小分子酸和異味，碳水化合物發(fā)酵產(chǎn)生有機(jī)酸和氣體，均可影響飼料pH，導(dǎo)致飼料變酸變臭[8]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，pH 隨著試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低，尤其是0 mg/kg 脫氫乙酸鈉組組下降趨勢(shì)最為明顯，飼料腐敗速度快，其次是丙酸鈣組。不同水平脫氫乙酸鈉組pH 也呈下降趨勢(shì)，但下降趨勢(shì)緩慢，說(shuō)明脫氫乙酸鈉具有良好的防霉效果，與張偉敏等[9]研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)同一時(shí)間段內(nèi)，脫氫乙酸鈉添加水平越高，pH 越大，12、16 h 尤為明顯，0、4、8 h 時(shí)變化不明顯，可能由于在0～8 h 飼料腐敗不明顯。

3.2 不同時(shí)間點(diǎn)飼料中TVB-N 的變化 TVB-N 指動(dòng)物性飼料及食品中蛋白質(zhì)在腐敗變質(zhì)過(guò)程中因?yàn)楦鞣N酶和細(xì)菌的作用分解產(chǎn)生的氨、胺類等堿性含氮物質(zhì)。TVB-N 含量越高，說(shuō)明蛋白質(zhì)和氨基酸分解越多，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值更低。TVB-N 的大小常用來(lái)反映肉類、魚(yú)類的新鮮度，飼料工業(yè)中常用于評(píng)價(jià)新鮮動(dòng)物性飼料的新鮮度[8]。參照食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《鮮、凍動(dòng)物性水產(chǎn)品》（GB 2733-2015）[11]的要求，新鮮和冷凍魚(yú)類的TVB-N 不超過(guò)30 mg/100g。本試驗(yàn)中，水貂鮮配合飼料中40%左右的為冷凍鮮魚(yú)，再加上新鮮雞產(chǎn)品總量超過(guò)80%，不加防腐劑時(shí)TVB-N 一般超過(guò)30 mg/100g，且隨著貯存時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高，16 h 時(shí)達(dá)到45 mg/100g，添加不同水平脫氫乙酸鈉和丙酸鈣后，TVB-N 下降明顯，尤其是貯存4 h 時(shí)顯著降低，說(shuō)明添加2 種防腐劑均可防止飼料蛋白質(zhì)分解，保鮮效果較好。但不同水平脫氫乙酸鈉組間差異不顯著，250 mg/kg 脫氫乙酸鈉具有較好效果且成本較低。

3.3 不同時(shí)間點(diǎn)飼料中細(xì)菌總數(shù)的變化 脫氫乙酸鈉的防腐保鮮機(jī)理是抑制細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)多種酶的氧化作用，對(duì)腐敗菌、霉菌和酵母菌均有一定抑制作用[12]。研究表明，脫氫乙酸鈉含量越高，其抗菌、殺菌能力就越好[13]。段會(huì)軻等[14]研究表明，脫氫乙酸鈉在低溫肉制品中有較好的防腐保鮮效果，可使肉品中細(xì)菌菌落增長(zhǎng)緩慢，達(dá)到防腐保鮮目的。本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)菌總數(shù)呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，脫氫乙酸鈉添加水平越高，細(xì)菌總數(shù)增長(zhǎng)越緩慢。在試驗(yàn)12 h 前的不同時(shí)間點(diǎn)，添加不同水平的脫氫乙酸鈉對(duì)細(xì)菌的抑制效果均較好，且優(yōu)于丙酸鈣。

4 結(jié) 論

脫氫乙酸鈉在水貂日糧中具有防腐保鮮作用。綜合pH、TVB-N 和細(xì)菌總數(shù)指標(biāo)，夏季可使水貂鮮配合飼料保鮮時(shí)間延長(zhǎng)4～ 8 h，適宜的添加水平為250 mg/kg。