關(guān)蒼術(shù)化學(xué)成分的研究

周媛媛 高蕙蕊 張然然 宋紅娟 劉 艷 付 蕾 王曉麗 楊炳友?

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院， 黑龍江 哈爾濱150040； 2.澳門科技大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院， 澳門999078）

關(guān)蒼術(shù)Atractylodes japonicaKoidz.ex Kitam.為菊科多年生草本植物，味辛、苦，性溫，無毒，歷代醫(yī)學(xué)著作（如《本草通玄》 《醫(yī)學(xué)啟源》 ）對其藥用價值均有很高的評價，其根莖具有健脾燥濕、發(fā)汗解表、明目祛風(fēng)等功效［1］，主要用于食欲不振、消化不良、內(nèi)外翳障、夜盲癥等［2］?！吨袊幍洹?僅記載蒼術(shù)為茅蒼術(shù)或北蒼術(shù)，未收錄關(guān)蒼術(shù)，但根據(jù)《中國植物志》 中描述，北蒼術(shù)實(shí)為一個混雜的商品總稱，它不僅包括蒼術(shù)本種，也包括關(guān)蒼術(shù)。中國、日本、韓國等國家將關(guān)蒼術(shù)作為蒼術(shù)藥材的來源［3］，并且相關(guān)漢方制劑在日本和韓國也很受歡迎［4］。隨著蒼術(shù)在市場上的廣泛使用、人們過度采挖、生存環(huán)境遭到嚴(yán)重破壞，導(dǎo)致其野生資源越來越少［5］，如今已被列為二級瀕危中藥材，故將關(guān)蒼術(shù)開發(fā)成其替代品具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)對關(guān)蒼術(shù)化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離得到12 個化合物，均為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)。

1 材料

NE?1101 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本東京理化株式會社）；AV?400 型超導(dǎo)核磁共振儀（德國Bruker 公司）；Q?TOF（ESI）高分辨質(zhì)譜儀、515?2414 半制備型高效液相色譜儀（美國Waters 公司）；Hoover capillary 熔點(diǎn)測定儀（美國Philadelphia 公司）；柱色譜硅膠（200～300 目）、薄層色譜硅膠（青島海洋化工廠）；Sephadex LH?20（瑞士Pharmacia 公司）。用于半制備液相的試劑為色譜純；其余均為分析純。

關(guān)蒼術(shù)購自哈爾濱市三棵樹藥材公司，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院王振月教授鑒定為菊科植物關(guān)蒼術(shù)Atractylodes japonicaKoidz.ex Kitam.的干燥根莖。

2 提取與分離

將陰干藥材（10.0 kg）適當(dāng)粉碎，以95%乙醇冷浸3 次，每次7 d，減壓濃縮得到浸膏（586.7 g），加適量蒸餾水分散后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯及水飽和正丁醇進(jìn)行萃取，得石油醚萃取部位（58.2 g）、乙酸乙酯萃取部位（26.8 g）。石油醚萃取部位經(jīng)硅膠色譜柱，石油醚?乙酸乙酯（1 ∶0～0 ∶1）梯度洗脫，TLC 檢測合并得6 個流分（Fr.A1～Fr.A6），F(xiàn)r.A1 經(jīng)硅膠柱，石油醚?乙酸乙酯（1 ∶0～5 ∶1）梯度洗脫后重結(jié)晶，得化合物9（5.1 mg）、12（12.3 mg）；Fr.A3經(jīng)硅膠柱，石油醚?乙酸乙酯（30 ∶1～1 ∶1）梯度洗脫后重結(jié)晶，得化合物10（5.6 mg）；Fr.A5 經(jīng)硅膠柱，石油醚?乙酸乙酯（20 ∶1～1 ∶1）梯度洗脫后重結(jié)晶，得化合物7（10.4 mg）；Fr.A6 經(jīng)硅膠柱，石油醚?乙酸乙酯（15 ∶1～0 ∶1）梯度洗脫，再結(jié)合Sephadex LH?20 進(jìn)行分離純化，得化合物4（11.5 mg）、5（13.3 mg）、11（10.4 mg）。乙酸乙酯萃取部位經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷?甲醇（1 ∶0～0 ∶1）梯度洗脫，TLC 檢測合并得8 個流分（Fr.B1～Fr.B8），F(xiàn)r.B1 經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷?甲醇（50 ∶1～10 ∶1）梯度洗脫，結(jié)合半制備HPLC進(jìn)行分離純化，得化合物8（3.5 mg）；Fr.B3 經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷?甲醇（35 ∶1～5 ∶1）梯度洗脫，再結(jié)合Sephadex LH?20 進(jìn)行分離純化，得化合物6（9.4 mg）；Fr.B6 經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷?甲醇（20 ∶1～0 ∶1）梯度洗脫，結(jié)合半制備HPLC進(jìn)行分離純化，得化合物1（3.2 mg）、2（3.5 mg）、3（6.1 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色粉末。HR?ESI?MSm／z：203.044 2 ［M ＋Na］＋，分子式C9H8O4。1H?NMR（400 MHz，DMSO?d6）δ：6.18（1H，d，J＝16.0 Hz，H?8），6.76（1H，d，J＝8.2 Hz，H?5），6.97（1H，dd，J＝8.2，1.6 Hz，H?6），7.02（1H，d，J＝1.6 Hz，H?2），7.41（1H，d，J＝16.0 Hz，H?7），9.18（1H，brs，3?OH），9.61（1H，brs，4?OH），12.1（1H，brs，?COOH）；13C?NMR（100 Hz，DMSO?d6）δ：115.0（C?6），115.8（C?5），116.0（C?2），122.0（C?8），126.3（C?1），145.1（C?7），146.3（C?3），148.7（C?4），168.5（C?9）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］一致，故鑒定為咖啡酸。

化合物2：白色針晶（CH3OH），mp 168～172 ℃。HR?ESI?MSm／z：193.056 9 ［M?H］-，分子式C10H10O4。1H?NMR（400 MHz，DMSO?d6）δ：3.81（3H，s，3?OCH3），6.33（1H，d，J＝16.0 Hz，H?8），6.74（1H，d，J＝8.0 Hz，H?5），7.06（1H，dd，J＝8.0，2.0 Hz，H?6），7.27（1H，d，J＝2.0 Hz，H?2），7.33（1H，d，J＝16.0 Hz，H?7）；13C?NMR（100 Hz，DMSO?d6）δ：55.7（?OCH3），113.3（C?8），114.9（C?5），115.5（C?2），123.4（C?6），124.7（C?1），143.6（C?7），146.9（C?4），149.4（C?3），167.8（C?9）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］一致，故鑒定為阿魏酸。

化合物3：無色針晶（CHCl3），mp 170～174 ℃。HR?ESI?MSm／z：179.062 1 ［M＋H］＋，分子式C10H10O3。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：3.82（3H，s，4?OCH3），6.31（1H，d，J＝16.0 Hz，H?8），6.89（2H，d，J＝8.4 Hz，H?3，H?5），7.45（2H，d，J＝8.4 Hz，H?2，H?6），7.66（1H，d，J＝16.0 Hz，H?7）；13C?NMR（100 Hz，CDCl3）δ：55.8（4?OCH3），114.9（C?3，C?5），117.3（C?8），127.6（C?1），131.1（C?2，C?6），144.0（C?7），161.5（C?4），169.7（C?9）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］一致，故鑒定為對甲氧基肉桂酸。

化合物 4：白色粉 末。HR?ESI?MSm／z：271.254 7 ［M ＋H］＋，分子式C17H34O2。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：0.91（3H，t，J＝7.0 Hz，17?CH3），1.27（26H，brs，H?4～16），1.66（2H，m，H?3），2.36（2H，t，J＝7.5 Hz，H?2）；13C?NMR（100 Hz，CDCl3）δ：14.1（17?CH3），22.5～29.7（13×CH2），31.8（C?3），34.0（C?2），180.2（C?1）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］一致，故鑒定為十七烷酸。

化合物 5：白色粉 末。HR?ESI?MSm／z：425.428 2 ［M ＋H］＋，分子式C28H56O2。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：0.91（3H，t，J＝7.0 Hz，28?CH3），1.27（48H，brs，H?4～H?27），1.65（2H，m，H?3），2.36（2H，t，J＝7.5 Hz，H?2）；13C?NMR（100 Hz，CDCl3）δ：14.1（28?CH3），21.5～29.7（24×CH2），31.9（C?3），33.9（C?2），179.9（C?1）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］一致，故鑒定為二十八烷酸。

化合物6：無色針晶（EtOAc），mp 225～228 ℃。HR?ESI?MSm／z：162.030 5 ［M］＋，分子式C9H6O3。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：6.27（1H，d，J＝9.6 Hz，H?3），6.77（1H，dd，J＝8.0，2.2 Hz，H?6），6.84（1H，d，J＝2.2 Hz，H?8），7.38（1H，d，J＝8.0 Hz，H?5），7.63（1H，d，J＝9.6 Hz，H?4）；13C?NMR（100 Hz，CDCl3）δ：103.3（C?8），112.1（C?6），113.0（C?10），113.7（C?3），129.6（C?5），143.5（C?4），159.7（C?9），161.6（C?2），162.3（C?7）。以上數(shù) 據(jù)與文 獻(xiàn)［11］一致，故鑒定為7?羥基香豆素。

化合物7：黃白色針晶（CH3OH），mp 206～208 ℃。HR?ESI?MSm／z：215.045 7 ［M ＋Na］＋，分子式C10H8O4。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：3.89（3H，s，6?OCH3），6.11（1H，s，7?OH），6.26（1H，d，J＝9.2 Hz，H?3），6.85（1H，s，H?8），6.93（1H，s，H?5），7.59（1H，d，J＝9.2 Hz，H?4）；13C?NMR（100 Hz，CDCl3）δ：56.8（6?OCH3），103.5（C?8），107.3（C?5），113.6（C?3），111.5（C?10），143.5（C?4），144.1（C?9），149.7（C?7），152.2（C?6），161.7（C?2）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］一致，故鑒定為東莨菪內(nèi)酯。

化合物8：淡黃色油狀物。HR?ESI?MSm／z：283.142 3 ［M ＋Na］＋，分子式C16H20O3。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：1.71（2H，m，H?4），1.83（3H，d，J＝7.6 Hz，14?CH3），1.94（2H，m，H?2），2.14（3H，s，2′?CH3），2.28（2H，m，H?5），3.65（2H，t，J＝6.8 Hz，H?1），5.20（1H，m，H?3），5.67（2H，m，H?7，12），6.28（1H，dt，J＝16.4，7.2 Hz，H?6），6.38（1H，dq，J＝16.2，7.6 Hz，H?13）；13C?NMR（100 Hz，CDCl3）δ：19.3（C?14），20.9（2′?CH3），29.9（C?5），33.6（C?4），37.7（C?2），60.8（C?1），70.9（C?3），73.0（C?9），73.4（C?10），80.3（C?8），80.6（C?11），109.0（C?12），109.2（C?7），144.3（C?13），145.6（C?6），172.0（C?1′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］一致，故鑒定為3?乙酰氧基?6E，12E?二烯?8，10?二炔?1?醇。

化合物 9：白色粉 末。HR?ESI?MSm／z：639.505 8 ［M ＋Na］＋，分子式C39H68O5。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：0.89（6H，t，J＝5.4 Hz，H?18′，18″），1.27～1.32（28H，m，H?4′～7′，15′～17′，4″～7″，15″～17″），1.64（6H，m，H?3′，3″），2.03～2.09（8H，m，H?8′，14′，8″，14″），2.37（4H，t，J＝3.7 Hz，H?2′，2″），2.77～2.82（4H，m，H?11′，11″），4.10（1H，m，H?2），4.15～4.22（4H，m，H?1，3），5.34～5.41（8H，m，H?9′，10′，12′，13′，9″，10″，12″，13″）；13C?NMR（100 MHz，CDCl3）δ：14.3（C?18′，18″），22.9（C?17′，17″），24.9（C?16′，16″），25.8（C?11′，11″），27.4（C?8′，8″，14′，14″），29.3～29.9（C?4～7′，15′，4″～7″，15″），32.1（C?3′，3″），34.3（C?2′，2″），65.1（C?1，3），68.5（C?2），128.1（C?9′，9″），128.2（C?13′，13″），130.1（C?12′，12″），130.3（C?10′，10″），174.0（C?1′，1″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］一致，故鑒定為1，3?二亞油酸甘油酯。

化合物10：黃白色針晶（CH3OH），mp 142～145 ℃。HR?ESI?MSm／z：229.054 2 ［M ＋Na］＋，分子式C11H10O4。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：3.86（3H，s，6?OCH3），3.97（3H，s，7?OCH3），6.28（1H，d，J＝9.2 Hz，H?3），6.88（1H，s，H?8），6.92（1H，s，H?5），7.62（1H，d，J＝9.2 Hz，H?4）；13C?NMR（100 Hz，CDCl3）δ：56.7（6?OCH3），57.1（7?OCH3），100.5（C?8），108.7（C?5），111.6（C?10），112.9（C?3），142.9（C?4），144.8（C?9），152.4（C?7），161.8（C?2）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］一致，故鑒定為濱蒿素。

化合物11：淡黃色針晶（CHCl3），mp 113.5～115.5 ℃。HR?ESI?MSm／z：235.053 1 ［M＋H］＋，分子式C12H10O5。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：4.66（4H，s，H?6，6′），6.54（2H，d，J＝2.5 Hz，H?3，3′），7.25（2H，d，J＝2.5 Hz，H?4，4′），9.68（2H，s，?CHO）；13C?NMR（100 Hz，CDCl3）δ：64.8（C?6，6′），111.5（C?3，3′），121.6（C?4，4′），152.5（C?5，5′），157.0（C?2，2′），177.9（C?1，1′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］一致，故鑒定為雙［5?甲?；坊菝?。

化合物 12：棕色粉 末。HR?ESI?MSm／z：199.067 7 ［M ＋H］＋，分子式C13H10O2。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：4.28（3H，s，1?OCH3），5.91（1H，d，J＝16.0 Hz，H?7），6.08（1H，d，J＝16.4 Hz，H?2），6.35（1H，d，J＝16.0 Hz，H?8），6.43（1H，d，J＝2.5 Hz，H?3′），6.49（1H，t，J＝2.5 Hz，H?4′），6.83（1H，d，J＝16.4 Hz，H?1），7.46（1H，d，J＝2.5 Hz，H?5′）；13C?NMR（100 Hz，CDCl3）δ：62.8（1?OCH3），74.9（C?6），76.7（C?5），80.8（C?4），81.0（C?3），104.6（C?2），109.1（C?7），111.7（C?4′），112.3（C?3′），131.3（C?1），143.6（C?5′），145.0（C?8），151.4（C?2′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］一致，故鑒定為1?呋喃?9?甲氧基?1E，7E?3，5?辛二炔。

4 討論

關(guān)蒼術(shù)作為東北地區(qū)的道地藥材，具有悠久的藥用歷史，既具有藥用價值，又有食用價值，且富含多種生物活性［18］。本實(shí)驗(yàn)從中分離得到12 個化合物，均為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)，其結(jié)構(gòu)類型多樣，有香豆素類、烯炔類、酚酸類等。關(guān)蒼術(shù)雖是蒼術(shù)一種，但在化學(xué)成分、藥理作用方面與后者有很大差異，而且相關(guān)研究報道不多。雖然目前關(guān)蒼術(shù)未被收入《中國藥典》，但隨著野生蒼術(shù)資源的減少，作為替代品其需求量日益增大，關(guān)于其化學(xué)成分及作用機(jī)理的考察仍是今后一段時間的主要研究方向。