芍藥苷對抗炎反應(yīng)因子TNF-a和IL6的作用研究

劉俊彤，李軼聰，董麗強(qiáng)，劉 賀，張延旭

（1.佳木斯大學(xué)，黑龍江 佳木斯 154000；2.解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九六二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150000）

關(guān)節(jié)炎是一種慢性的全身炎癥反應(yīng)，其中最為常見的病因多為風(fēng)濕和類風(fēng)濕導(dǎo)致。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病變特點(diǎn)為慢性的、對稱性的多關(guān)節(jié)以及滑膜病變[1]。目前臨床治療主要以激素為主。但是大量的應(yīng)用激素會(huì)導(dǎo)致激素性股骨頭壞死、高血壓、全身水腫等激素相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生，副作用較大。而我國傳統(tǒng)中藥在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎方面具有獨(dú)特的見解和療效。其中芍藥苷為近年來報(bào)道的具備抗炎、抗氧化的作用，并且其不良反應(yīng)以及相關(guān)毒副作用較少[2]。本文針對芍藥苷在關(guān)節(jié)炎小鼠的動(dòng)物模型中的作用進(jìn)行研究，主要觀察炎癥相關(guān)因子的TNF-a和IL6在應(yīng)用芍藥苷后的變化，并對其中的作用機(jī)制做出初步的探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料

芍藥苷購自上海一基實(shí)業(yè)有限公司，生產(chǎn)包裝時(shí)的純度大于88%。小鼠關(guān)節(jié)炎誘導(dǎo)試劑為II型膠原（Sigma公司），RNA逆轉(zhuǎn)錄以及實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)試劑盒購自北京Bioteck公司。ELISA檢測試劑盒購自德國Bender公司。實(shí)驗(yàn)小鼠為DBA/1品種，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.2 方法

小鼠關(guān)節(jié)炎模型的構(gòu)建[3]。將200 ug的II膠原溶于濃度為0.05 mol/L的100 mL醋酸中，并與相同體積的弗氏完全佐劑充分混合，注射入小鼠皮下。在14天后再次以同樣的方式重復(fù)操作。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組

將小鼠分為5組，正常組、關(guān)節(jié)炎組、芍藥苷25 mg/kg組、芍藥苷50 mg/kg組、芍藥苷100 mg/kg組.給藥途徑為經(jīng)口注射。于2周后應(yīng)用摘眼球取血法獲得血液。提取血液中的有核細(xì)胞，裂解液裂解細(xì)胞后獲得血液中的RNA，其后按照RNA總量為1000 ng進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，將逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA行實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)。所用引物為 TNF順向CAGGCGGTGCCTATGTCTC，反向CGATCACCCCGAAGTTCAGTAG。IL6順向TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC，反向TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC，GAPDH：AGGTCGGTGTGAACGGATTTG，反向TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA。聚合酶鏈反應(yīng)和ELISA檢測過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

全部數(shù)據(jù)使用SPSS 18在計(jì)算機(jī)上完成操作，數(shù)據(jù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

2.1 芍藥苷對炎癥因子mRNA的檢測

經(jīng)實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測，發(fā)現(xiàn)芍藥苷組的炎癥因子TNF-a和IL6較正常組（TNF-a：7.47±1.12，IL6：6.13±2.12）均表達(dá)升高。但是隨著芍藥苷劑量的增加，兩種炎癥因子的差異表達(dá)倍數(shù)明顯下降，并且在藥苷25 mg/kg組（TNF-a：1.51±0.11，IL6：0.98±0.07）、芍藥苷50 mg/kg組（TNF-a：3.21±0.67，IL6：2.86±0.13）、芍藥苷100 mg/kg（TNF-a：5.51±0.12，IL6：3.78±0.28）組表達(dá)量依次下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說明芍藥苷能夠抑制機(jī)體內(nèi)關(guān)節(jié)炎產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)，并且抑制效果呈現(xiàn)劑量依從性。

2.2 芍藥苷對炎癥因子表達(dá)量的檢測

經(jīng)ELISA反應(yīng)檢測，發(fā)現(xiàn)芍藥苷組的炎癥因子TNF-a和IL6較正常組（TNF-a：2.9±0.2 pg/mL，IL6：3.3±0.2 pg/mL）均表達(dá)升高。但是隨著芍藥苷劑量的增加，兩種炎癥因子的表達(dá)量明顯下降，并且在藥苷25 mg/kg組（TNF-a：13.7±2.3 pg/mL，IL6：17.1±2.5 pg/mL）、芍藥苷50 mg/kg組（TNF-a：9.8±2.1 pg/mL，IL6：13.4±2.8 pg/mL）、芍藥苷100mg/kg組（TNF-a：5.3±1.9 pg/mL，IL6：7.9±2.1 pg/mL）表達(dá)量依次下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說明芍藥苷能夠抑制機(jī)體內(nèi)關(guān)節(jié)炎產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)，并且抑制效果呈現(xiàn)劑量依從性。

3 討 論

芍藥苷是一種新型的具有抗炎、抗氧化功能的中草藥制劑，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療方面，較傳統(tǒng)的激素治療有一定的優(yōu)勢。本研究通過實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)以及ELISA反應(yīng)證實(shí)，應(yīng)用芍藥苷對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型的炎癥因子的表達(dá)具有抑制作用。并且隨著芍藥苷給藥劑量的逐漸增大，抗炎效果逐漸增強(qiáng)，表現(xiàn)為TNF-a和IL6的降低。而在應(yīng)用芍藥苷以及加大劑量的過程中，動(dòng)物模型未出現(xiàn)因使用芍藥苷而致死的情況，說明芍藥苷在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的過程中具有明顯的療效。