艾絨的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及其商品分級(jí)研究*

武 娟，萬(wàn)定榮 △，趙百孝 ，陳 熙 ，江遠(yuǎn)明 ，周 勝 ，徐滌新 ，徐 燃

（1.中南民族大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430074； 2.北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，北京 100029； 3.湖北省蘄春縣市場(chǎng)監(jiān)督管理局，湖北 蘄春 435300； 4.湖北輕工大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院，湖北 武漢 430048）

艾灸療法是中醫(yī)傳統(tǒng)治療方法，具有溫通經(jīng)脈、調(diào)和氣血、協(xié)調(diào)陰陽(yáng)、扶正祛邪［1］的功效，廣泛用于治療疾病和康養(yǎng)保健。艾絨是菊科植物艾Artemisia argyiLévl.et Vent.的干燥葉經(jīng)粉碎過(guò)篩制得的細(xì)軟絨狀物，常被加工制成艾條等灸用制品，用于艾灸治療與保健。艾絨的質(zhì)量對(duì)艾灸療法的臨床效果至關(guān)重要。目前普遍認(rèn)為，在一定范圍內(nèi)艾絨純度越高，艾灸制品質(zhì)量越好。商品艾絨的純度通常用多少kg艾葉可制成1 kg艾絨，即葉絨比來(lái)表示。但目前不同廠家的葉絨比標(biāo)示多有虛夸成分，廠家間的比例標(biāo)示也不統(tǒng)一；同時(shí)市場(chǎng)上時(shí)有用質(zhì)次（低葉絨比）艾絨虛充優(yōu)質(zhì)（高葉絨比）艾絨，更有用五月艾Artemisia indicaWilld的葉等混偽品及艾莖稈等低劣原料混淆加工制作艾絨的現(xiàn)象。本研究中對(duì)不同純度或質(zhì)量規(guī)格的正品艾絨進(jìn)行了性狀、顯微、薄層色譜鑒別及主要化學(xué)物質(zhì)（揮發(fā)油、黃酮類(lèi)［2-4］）的含量測(cè)定，并通過(guò)與偽劣品比較，建立了艾絨質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，確定了經(jīng)代表性艾絨生產(chǎn)廠家及艾灸師認(rèn)同的艾絨等級(jí)分類(lèi)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器、藥材與試藥

1.1 儀器

CX41型顯微鏡（日本Olympus公司）；UV-1800PC型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司）；揮發(fā)油提取器（武漢杰恒達(dá)工貿(mào)有限公司）；98-1-B型電子調(diào)溫電熱套，101-0AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 藥材

艾絨藥材共47批，從湖北、河南、寧夏、江蘇、山東、江西等省區(qū)收集或購(gòu)買(mǎi)，樣品來(lái)源見(jiàn)表1（括號(hào)內(nèi)比值為葉絨比，系各廠家或公司自行標(biāo)注）。五月艾Artemisia indicaWilld原料樣品2批，自采于湖北建始縣和武漢市郊，由中南民族大學(xué)藥學(xué)院萬(wàn)定榮教授鑒定。

1.3 試藥

硅膠G（青島海洋化工廠）；芹菜素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為 11901-201102，含量99.6%）；氧化石竹烯對(duì)照品（天津一方科技有限公司，Lot：AB671C）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀和顯微鑒別

2.1.1 方法

按2015年版《中國(guó)藥典（一部）》規(guī)定進(jìn)行鑒別。其中顯微計(jì)量或計(jì)數(shù)時(shí)，觀察取樣量為1.0 mg；觀察的目標(biāo)物面積0.14 mm2（即在4×10倍光學(xué)顯微鏡下，目標(biāo)物占目鏡測(cè)微尺的長(zhǎng)、寬各15小格）。

2.1.2 性狀

優(yōu)質(zhì)艾絨樣品呈絨團(tuán)狀，表面為灰黃色、土黃色、淺褐黃色或帶灰綠色。散有許多至極多的黑色至綠黑色的葉片碎末小點(diǎn)，無(wú)或偶見(jiàn)淺黃色或綠黃色的粗纖維。質(zhì)輕柔軟，手捻之不易散開(kāi)而呈狹長(zhǎng)橄欖形。氣微香，或具特異的濃香或清香氣，味微苦、微辛、微澀。點(diǎn)燃后不起火焰，散發(fā)芳香氣。

質(zhì)量較次的艾絨中，其葉片碎末所占比例較大，且往往摻有艾的莖稈為原料制成。其絨團(tuán)表面帶明顯的灰綠色或呈暗綠黃色，可見(jiàn)類(lèi)白色的粗顆粒（莖髓小碎塊）及淺黃色粗纖維，手指揉捏有粗糙感甚至扎手。

2.1.3 顯微特征

優(yōu)質(zhì)艾絨樣品T形毛眾多，大多相互纏結(jié)成亂團(tuán)狀。其頂細(xì)胞細(xì)長(zhǎng)，彎曲、扭曲或相互纏結(jié)，直徑5～18 μm，長(zhǎng) 210～960 μm，極少可達(dá) 1 000 μm 以上，末端漸尖，中部可見(jiàn)類(lèi)圓形、卵圓形或橢圓形的柄細(xì)胞脫落痕；柄細(xì)胞大多碎落，殘留者具1～3（最多6）個(gè)類(lèi)方形或長(zhǎng)方形細(xì)胞，有的中部略膨大。長(zhǎng)方形、類(lèi)方形或不規(guī)則葉肉碎塊（柵狀細(xì)胞、海綿組織）少見(jiàn)、常見(jiàn)或眾多，呈棕黃色、黃棕色、暗棕色或類(lèi)黃色。碎塊中有的可見(jiàn)細(xì)長(zhǎng)的螺紋導(dǎo)管，稀見(jiàn)具緣紋孔導(dǎo)管及網(wǎng)紋導(dǎo)管，導(dǎo)管多相聚或與纖維相伴，直徑 5～30 μm；有的碎塊密布直徑為 3～12 μm的細(xì)小草酸鈣簇晶，并少見(jiàn)細(xì)胞成對(duì)排列的鞋底形腺毛（頂面觀）；碎塊中纖維少見(jiàn)或偶見(jiàn)，直徑 7 ～20 μm，末端漸尖。表皮碎片（表面觀）偶見(jiàn)或可見(jiàn)，具不定式氣孔。艾絨顯微特征模式圖見(jiàn)圖1 A，高純度的純絨顯微特征見(jiàn)圖1 B。不同純度或質(zhì)量規(guī)格的艾絨中葉肉碎塊量存在明顯不同。艾絨純度越低，其葉肉碎塊所占比重越大。

表1 不同艾絨樣品（葉絨比系廠家標(biāo)示）揮發(fā)油、總黃酮含量測(cè)定結(jié)果

圖1 艾絨顯微模式圖

五月艾絨與正品艾絨的性狀無(wú)明顯差異，但兩者顯微特征有顯著差異：五月艾絨T形毛頂細(xì)胞極細(xì)長(zhǎng)，明顯扭曲或相互纏結(jié)，直徑 5～10 μm，長(zhǎng)達(dá) 1 000 μm 以上者常見(jiàn)，最長(zhǎng)可超2000μm；草酸鈣簇晶更為細(xì)小，直徑僅3～6 μm；并可見(jiàn)副衛(wèi)細(xì)胞脫離后的氣孔散在，有的氣孔的保衛(wèi)細(xì)胞呈電話筒形及啞鈴形。詳見(jiàn)圖2。

圖2 五月艾絨中的氣孔顯微圖

2.2 薄層色譜鑒別

取艾絨樣品1.0 g，置燒瓶中，加石油醚（60～90℃）15 mL，置水浴上加熱回流30 min，冷卻，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)诱和?.5 mL使溶解，取上清液作為供試品溶液。取氧化石竹烯對(duì)照品2.5 mg，溶解于5 mL正己烷中，作為對(duì)照品溶液。吸取上述2種溶液各5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-甲苯-丙酮（10 ∶8 ∶0.5，V/V/V）為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，噴顯色劑（取20%硫酸溶液10 mL，緩緩加至10 mL冰冷的冰醋酸中，加4-甲氧基苯甲醛1 mL，再加20%硫酸溶液20 mL，混勻）后，在105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。在自然光下，將供試品溶液色譜斑點(diǎn)的數(shù)目、位置比移（Rf）值和顏色與對(duì)照品色譜比較，進(jìn)行鑒定分析。結(jié)果所有不同純度或質(zhì)量規(guī)格的供試品溶液色譜均有6個(gè)紫紅色的主斑點(diǎn)。Rf值均分別為0.09，0.16，0.38，0.54，0.68，0.95。在與氧化石竹烯對(duì)照品色譜斑點(diǎn)相同的Rf值處，顯示出1個(gè)對(duì)應(yīng)的紫紅色斑點(diǎn)。詳見(jiàn)圖 3。

圖3 艾絨樣品薄層色譜圖

2.3 含量測(cè)定

2.3.1 揮發(fā)油

參照2015年版《中國(guó)藥典（四部）》通則“2204揮發(fā)油測(cè)定法”進(jìn)行測(cè)定，其中艾絨供試品的取樣量為40.00 g，加水量為600 mL。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3.2 總黃酮

溶液制備：取芹菜素對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加70%甲醇制成每1 mL含0.05 mg的對(duì)照品溶液。取剪碎的樣品約1 g（精確至0.000 1 g），置100 mL圓底燒瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，85℃水浴回流1 h，放冷，再次稱(chēng)定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL容量瓶中，加70%甲醇定容，搖勻，即得供試品貯備液。精密量取1 mL，置25 mL容量瓶中，加70%甲醇定容，搖勻，即得供試品溶液。

方法學(xué)考察：精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均小于2%，表明儀器精密度良好，供試品溶液在室溫下12 h內(nèi)穩(wěn)定，且方法重復(fù)性良好。

測(cè)定與計(jì)算：以70%甲醇為空白，在338 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度并計(jì)算，按干燥品計(jì)算總黃酮（以芹菜素計(jì)）含量。結(jié)果見(jiàn)表1?？梢?jiàn)，不同產(chǎn)地艾葉原料所含揮發(fā)油、總黃酮含量存在差異性［5］，導(dǎo)致艾絨揮發(fā)油和總黃酮含量也存在差異，其中葉絨比越高，揮發(fā)油和總黃酮的含量越低。說(shuō)明艾絨的毛絨部分中這兩類(lèi)成分的含量低于同批艾絨制作時(shí)產(chǎn)生的葉肉碎末中兩類(lèi)成分的含量。

2.4 艾絨分級(jí)

2.4.1 分級(jí)思路

由于不同葉絨比的艾絨具有不同程度的性狀、顯微特征差異性，結(jié)合其主要化學(xué)物質(zhì)含量的差異，可將常規(guī)艾絨商品質(zhì)量等級(jí)分為一、二、三級(jí)。為避免艾絨商品中混入過(guò)多的葉片碎末，有必要建立不同等級(jí)艾絨中揮發(fā)油和總黃酮成分的最高含量限度。但作為臨床公認(rèn)為質(zhì)量較好的陳艾絨，這兩類(lèi)化學(xué)物質(zhì)的含量較低，故不對(duì)各艾絨等級(jí)或規(guī)格作揮發(fā)油和總黃酮含量的下限要求。

2.4.2 等級(jí)特征

一級(jí)品：絨團(tuán)表面呈灰黃色、淺褐黃色、土黃色，有許多黑色至綠黑色的葉片碎末。質(zhì)輕柔綿軟，手指揉捏無(wú)粗糙感且不扎手。氣微香，味苦或微苦，并具極微弱或微弱的辛澀味。在顯微鏡下主要為相互纏繞的T形毛，其柄部幾乎全部脫落，偶見(jiàn)柄細(xì)胞殘段。葉肉碎塊較少，體較小，長(zhǎng)1000 μm以上者僅偶見(jiàn)或極少見(jiàn)，面積在0.14 mm2以上者較少，不超過(guò)20個(gè)（見(jiàn)圖4）。其揮發(fā)油含量不應(yīng)高于每100 g含0.40 mL，總黃酮含量不應(yīng)高于2.50%。

圖4 艾絨一級(jí)品特征圖

二級(jí)品：絨團(tuán)表面呈灰黃色、暗黃色或略帶暗綠色，偶見(jiàn)或極少見(jiàn)淺黃色的粗纖維及類(lèi)白色的粗顆粒，有較多至大量的黑色至綠黑色的葉片碎末。質(zhì)輕柔軟，手指揉捏有粗糙感但不扎手。氣香，味苦、辛或微辛、微澀。在顯微鏡下多為相互纏繞的T形毛，T形毛的柄部絕大多數(shù)脫落，極少數(shù)保留柄細(xì)胞殘段。葉肉碎塊多或眾多，體較大，長(zhǎng)度1000μm以上者常可見(jiàn)，面積在0.14mm2以上者較多，但不超過(guò)50個(gè)（見(jiàn)圖5）。其揮發(fā)油含量不應(yīng)高于每100 g含0.60 mL，總黃酮含量不應(yīng)高于3.20%。

圖5 艾絨二級(jí)品特征圖

三級(jí)品：絨團(tuán)表面呈暗綠黃色或帶灰綠色，少見(jiàn)淺黃色或綠黃色的粗纖維及類(lèi)白色的粗顆粒，有極多黑色至綠黑色的葉片碎末。質(zhì)輕較柔軟，手指揉捏有明顯糙手感并可有扎手感。氣濃香或清香特異，味苦或極苦、辛、微澀。在顯微鏡下主要為葉肉碎塊及T形毛。葉肉碎塊極多，體較大，長(zhǎng)1 000 μm以上者多見(jiàn)，最長(zhǎng)者可達(dá)2 000 μm以上，面積在0.14 mm2以上者更多。T形毛的柄部大多數(shù)脫落，少數(shù)保留柄細(xì)胞殘段（見(jiàn)圖6）。其揮發(fā)油含量不應(yīng)高于每100 g含0.80 mL，總黃酮含量不應(yīng)高于3.90%。

圖6 艾絨三級(jí)品特征圖

3 討論

商品艾絨中，除了有用儲(chǔ)存不足1年的新艾葉所加工成的新艾絨和儲(chǔ)存1年以上的陳艾葉所加工成的陳艾絨外，還有用傳統(tǒng)手工藝制成的手工絨，以及經(jīng)反復(fù)粉碎過(guò)篩而得到的純度極高且呈土黃色的“黃金絨”。研究發(fā)現(xiàn)，新艾絨有時(shí)帶灰綠色，揮發(fā)油與總黃酮含量較高；陳艾絨的揮發(fā)油與總黃酮含量水平較低；黃金絨顏色較純正，多呈土黃色，因純度極高，顯微鏡下極少見(jiàn)葉肉碎塊；傳統(tǒng)手工絨有分等級(jí)與不分等級(jí)之別，其中不分等級(jí)者在顯微鏡下主要為葉肉或葉片碎塊，T形毛相對(duì)較少，且揮發(fā)油含量和總黃酮含量可分別高于每100 g含0.80 mL和3.90%。

艾絨是艾灸療法的直接原材料，其真?zhèn)渭百|(zhì)量?jī)?yōu)劣對(duì)艾灸療法的醫(yī)療應(yīng)用至關(guān)重要。本研究結(jié)果證明，對(duì)艾絨進(jìn)行性狀、顯微及薄層色譜鑒定及主要化學(xué)物質(zhì)的含量測(cè)定是目前對(duì)其真?zhèn)舞b別和質(zhì)量分級(jí)的可靠手段。在對(duì)艾絨商品進(jìn)行質(zhì)量分級(jí)，建立等級(jí)鑒定方法的基礎(chǔ)上，形成了艾絨的質(zhì)量評(píng)價(jià)與等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。這對(duì)于規(guī)范以艾絨為原料的艾灸產(chǎn)品的質(zhì)量，維護(hù)消費(fèi)者權(quán)益，保障艾絨制品應(yīng)用的安全性與有效性，進(jìn)而促進(jìn)艾產(chǎn)業(yè)的規(guī)范發(fā)展，具有積極作用。