塞來(lái)昔布對(duì)骨關(guān)節(jié)炎大鼠軟骨組織AQP1和AQP3表達(dá)影響的研究

鄭世雄 劉合亮 楊巍 魏艷珍 林亮明

【摘 要】目的：研究塞來(lái)昔布對(duì)骨關(guān)節(jié)炎模型大鼠軟骨組織水通道蛋白1（AQP1）和水通道蛋白3（AQP3）分布與表達(dá)的影響。方法：將45只SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、塞來(lái)昔布組，每組15只。模型對(duì)照組和塞來(lái)昔布組采用關(guān)節(jié)腔注射木瓜蛋白酶建立模型。塞來(lái)昔布組采用

17.85 mg·kg-1·d-1塞來(lái)昔布灌胃，另外2組采用等量生理鹽水灌胃。取左側(cè)膝關(guān)節(jié)HE染色、甲苯胺藍(lán)染色觀察軟骨組織形態(tài)，免疫組化觀察AQP1、AQP3表達(dá)，ELISA檢測(cè)血清白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）含量;取右側(cè)膝關(guān)節(jié)Real-time PCR、Western Blot檢測(cè)軟骨組織AQP1、AQP3表達(dá)。結(jié)果：與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組軟骨面缺損，細(xì)胞排列紊亂，甲苯胺藍(lán)染色重度減弱，Mankin評(píng)分顯著升高（P < 0.01），

移行層AQP1、AQP3表達(dá)顯著升高（P < 0.05或P < 0.01），血清IL-1β表達(dá)升高（P < 0.01），AQP1、AQP3 mRNA和蛋白表達(dá)均升高（P < 0.05）。與模型對(duì)照組比較，塞來(lái)昔布組軟骨面缺損較小，細(xì)胞排列較規(guī)則，甲苯胺藍(lán)染色較深，Mankin評(píng)分降低（P < 0.05），移行層AQP3表達(dá)降低（P < 0.05），血清IL-1β表達(dá)降低（P < 0.01），AQP3 mRNA和蛋白表達(dá)降低（P < 0.01）。結(jié)論：塞來(lái)昔布可降低AQP3的分布范圍和表達(dá)量，降低軟骨組織滲透性，可能是其治療骨關(guān)節(jié)炎的潛在作用機(jī)制之一。

【關(guān)鍵詞】 骨關(guān)節(jié)炎;塞來(lái)昔布;水通道蛋白1;水通道蛋白3;大鼠

Effects of Celecoxib on the Expressions of AQP1 and AQP3 in the Cartilage of Rats with? Osteoarthritis

ZHENG Shi-xiong，LIU He-liang，YANG Wei，WEI Yan-zhen，LIN Liang-ming

【ABSTRACT】Objective：To study the effects of celecoxib on the distribution and expressions of AQP1 and AQP3 in the cartilage of rats with osteoarthritis.Methods：Forty-five SD rats were randomly divided into a blank control group，a model control group and a celecoxib group，with 15 rats in each.In the model control group and the celecoxib group，papain was injected into the articular cavity to establish models.In the celecoxib group，17.85 mg·kg-1·d-1 of celecoxib was administered to the stomach，and in the other two groups，the same amount of normal saline was administered to the stomach.HE staining and toluidine blue staining were used to observe the cartilage morphology of the left knee joint，the expressions of AQP1 and AQP3 was observed by immunohistochemistry，and the content of IL-1β in serum was detected by ELISA.The expressions of AQP1 and AQP3 in cartilage of the right knee joint were detected by real-time PCR and Western blot.Results：Compared with the blank control group，the model control group had cartilage defects，disordered cell arrangement，weakened toluidine blue staining，significantly increased Mankin score（P < 0.01），significantly increased AQP1 and AQP3 expressions in the transitional layer（P < 0.05 or P < 0.01），increased IL-1β expression in serum（P < 0.01），and increased AQP1，AQP3 mRNA and protein expressions（P < 0.05）.Compared with the model control group，the defect of cartilage surface in the celecoxib group was smaller，the cell arrangement was more regular，toluidine blue staining was deeper，Mankin score was lower

（P < 0.05），AQP3 expression in the transitional layer was lower（P < 0.05），IL-1β expression in serum was lower

（P < 0.01），and AQP3 mRNA and protein expressions were lower（P < 0.01）.Conclusion：Celecoxib can reduce the distribution and expression of AQP3 and the permeability of cartilage tissue，which may be one of the potential mechanisms of treating osteoarthritis.

【Keywords】 osteoarthritis;celecoxib;aquaporin 1;aquaporin 3;rats

骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是常見(jiàn)的退行性疾病，發(fā)病率隨人口老齡化而逐年增高，其病理變化以關(guān)節(jié)軟骨變性和繼發(fā)性骨質(zhì)增生為主[1]，具體發(fā)病機(jī)制仍未明確。軟骨細(xì)胞是軟骨中唯一的細(xì)胞成分，其主要功能為合成和分泌軟骨基質(zhì)，水是軟骨基質(zhì)的主要成分，約占軟骨濕重的75%，軟骨中不存在血管、淋巴、神經(jīng)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)由關(guān)節(jié)液和軟骨下骨提供。當(dāng)軟骨組織蛋白多糖含量正常，負(fù)電荷密度高，流動(dòng)水分子少，軟骨滲透性小;而OA蛋白多糖含量減少，負(fù)電荷密度低，流動(dòng)水分子增多，軟骨滲透性增強(qiáng)，出現(xiàn)軟骨水腫，軟骨液相承重減弱而有機(jī)固相承重增加，導(dǎo)致軟骨退變進(jìn)一步加重。因此，水分子的流動(dòng)、軟骨滲透性的改變?cè)贠A的發(fā)展中起重要作用。

水通道蛋白（AQPs）是疏水性的跨膜蛋白家族，主要介導(dǎo)水的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)以維持細(xì)胞物質(zhì)代謝[2]。近年來(lái)研究表明，AQP1和AQP3在OA發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[3-6]，AQP1、AQP3可能在OA的發(fā)生、發(fā)展中起協(xié)同作用。塞來(lái)昔布膠囊是臨床常用的非甾體抗炎藥，用于緩解OA臨床癥狀。本研究通過(guò)建立大鼠OA模型，采用塞來(lái)昔布進(jìn)行干預(yù)，觀察軟骨組織中AQP1、AQP3分布與表達(dá)的變化，探討塞來(lái)昔布對(duì)OA抗炎消腫的潛在作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與藥物 SPF級(jí)8周齡雄性SD大鼠45只，體質(zhì)量（250±10）g，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（滬）2012-0002。在福建省中醫(yī)藥研究院比較醫(yī)學(xué)中心進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK（閩）2016-0005。塞來(lái)昔布膠囊（輝瑞制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)X00278，規(guī)格200 mg）。

1.2 主要試劑與儀器 戊巴比妥鈉（Merck）、木瓜蛋白酶（Merck）、多聚甲醛（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;乙二胺四乙酸二鈉（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;蘇木素-伊紅（HE）染液、甲苯胺藍(lán)（沃凱）、通用SP超敏免疫組化（北京索萊寶科技有限公司）;白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）ELISA試劑盒（上海西唐生物科技有限公司）;TRIzol（invitrogen）;SYBR? Premix Ex Taq?（Takara）;Anti-AQP 1（Abcam）;Anti-AQP 3（Abcam）;石蠟切片機(jī)（Leica，RM2255）熒光定量PCR儀（ABI，7500 Fast）;多色熒光/化學(xué)發(fā)光成像（Protein simple，F(xiàn)luorChem M）。

2 方 法

2.1 模型制備 將45只SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組和塞來(lái)昔布組，每組15只。模型對(duì)照組和塞來(lái)昔布組采用關(guān)節(jié)腔注射木瓜蛋白酶制備模型[7-8]，術(shù)前禁食不禁水，稱重，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的戊巴比妥鈉0.2 mL·（100 g）-1腹腔注射麻醉;電動(dòng)剃毛刀剃毛、碘伏消毒，屈膝，髕韌帶附著點(diǎn)外上方為進(jìn)針點(diǎn);質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的木瓜蛋白酶關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射0.2 mL，每隔3 d注射一次，即第1，4，7 d，共注射3次;每次注射后給予20萬(wàn)U青霉素鈉肌內(nèi)注射以預(yù)防感染;末次注射7 d后，模型建立。

2.2 藥物干預(yù) 模型建立后，根據(jù)人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物等效劑量系數(shù)折算法[9]，計(jì)算大鼠給藥劑量，塞來(lái)昔布組給予塞來(lái)昔布17.85 mg·kg-1·d-1灌胃，空白對(duì)照組、模型對(duì)照組給予等量生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)4周。藥物干預(yù)結(jié)束后取材，腹主動(dòng)脈采血分離血清備用，取左側(cè)膝關(guān)節(jié)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的多聚甲醛保存?zhèn)溆?取右側(cè)膝關(guān)節(jié)快速刮取透明軟骨，過(guò)液氮后轉(zhuǎn)移至-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 病理學(xué)觀察 膝關(guān)節(jié)采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的

多聚甲醛常溫固定48 h，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的EDTA常溫脫鈣，每3日更換脫鈣液至刀切無(wú)阻力感，水洗，梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋，矢狀面為切面，4 μm厚連續(xù)切片，42 ℃攤片，60 ℃

烤片，切片脫蠟至水。蘇木素染液染色40 min，水洗，鹽酸酒精分色，伊紅染液染色1 min，水洗。甲苯胺藍(lán)染液染色30 min，水洗，反梯度脫水透明，封片，半定量分析蛋白多糖含量，并結(jié)合HE染色結(jié)果行Mankin評(píng)分[10]。

2.4 免疫組織化學(xué) 切片脫蠟至水，滅活過(guò)氧化物酶，微波抗原修復(fù)，封閉，分別加入1∶500 AQP1、1∶100 AQP3一抗4 ℃孵育過(guò)夜，PBS洗滌;Bio-羊抗小鼠/兔IgG工作液室溫孵育

30 min，洗滌;鏈酶親和素-POD工作液室溫孵育30 min，洗滌;DAB顯色，蘇木素復(fù)染，反梯度脫水透明，封片，鏡下觀察分析。

2.5 ELISA 血清、ELISA試劑盒恢復(fù)至室溫備用，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，酶標(biāo)儀450 nm處測(cè)OD值。標(biāo)準(zhǔn)曲線為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，將OD值代入公式，計(jì)算血清IL-1β含量。

2.6 Real-time PCR TRIzol法提取軟骨組織總RNA，Nanodrop2000讀取OD260/280比值，總RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。采用20 μL反應(yīng)體系，引物見(jiàn)表1，ABI 7500Fast擴(kuò)增儀，反應(yīng)條件：

95 ℃預(yù)變性30 s，1個(gè)循環(huán);95 ℃變性3 s、60 ℃退火30 s，40個(gè)循環(huán)。測(cè)定目標(biāo)基因Ct值，2-ΔΔCt計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量。

2.7 Western Blot 提取軟骨組織總蛋白，BCA定量，蛋白變性，上樣，SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)膜，常溫封閉，TBST洗滌;分別加入1∶5000 β-actin、1∶1000 AQP1、1∶200 AQP3一抗，4 ℃孵育過(guò)夜，洗滌;加入相應(yīng)二抗，常溫孵育1 h，洗滌，BeyoECL化學(xué)發(fā)光成像，軟件分析條帶灰度值，計(jì)算目的蛋白相對(duì)表達(dá)量。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以表示，采用單因素方差分析;不符合正態(tài)分布采用非參數(shù)檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 3組病理變化比較 空白對(duì)照組軟骨表面光滑，未見(jiàn)裂隙、缺損，4層結(jié)構(gòu)清晰，放射層軟骨細(xì)胞成群分布、柱狀排列，軟骨細(xì)胞囊呈強(qiáng)嗜堿性，基質(zhì)染色均勻。模型對(duì)照組軟骨面可見(jiàn)缺損，缺損達(dá)移行層、部分可至放射層，缺損下方部分軟骨陷窩內(nèi)未見(jiàn)細(xì)胞核，軟骨數(shù)量減少，排列尚規(guī)則、未見(jiàn)明顯紊亂，細(xì)胞囊、軟骨基質(zhì)未見(jiàn)明顯蘇木素著色，OA建模成功，處于病變?cè)缙凇Ｅc模型對(duì)照組比較，塞來(lái)昔布組軟骨面較光滑，未見(jiàn)明顯缺損，軟骨細(xì)胞數(shù)量稍多，排列較規(guī)則，基質(zhì)染色較均勻。見(jiàn)圖1。

3.2 3組蛋白多糖表達(dá)量比較 空白對(duì)照組軟骨基質(zhì)甲苯胺藍(lán)深染、呈深藍(lán)色，染色均勻，顯示蛋白多糖含量豐富。模型對(duì)照組軟骨全層染色重度減弱，未見(jiàn)明顯著色、染色分布不均，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組含量顯著降低（P < 0.01），蛋白多糖大量丟失。塞來(lái)昔布組較模型對(duì)照組深染，以放射層深處較為顯著，與模型對(duì)照組比較，塞來(lái)昔布組蛋白多糖含量略增，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)圖2、表2。

3.3 3組Mankin評(píng)分比較 每個(gè)樣本隨機(jī)選取相同倍數(shù)下5個(gè)不同視野，HE染色結(jié)合甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果做Mankin評(píng)分，對(duì)病程分期：0～

4分為Ⅰ期，5～8分為Ⅱ期，9～11分為Ⅲ期，12～14分為Ⅳ期?？瞻讓?duì)照組Mankin得分最低，近似為零;與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組得分顯著升高（P < 0.01）;與模型對(duì)照組比較，塞來(lái)昔布組得分降低（P < 0.05）。見(jiàn)表3。

3.4 3組軟骨組織AQP1、AQP3表達(dá)變化比較 空白對(duì)照組AQP1主要分布移行層、放射層淺層細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，放射層深層表達(dá)較弱。模型對(duì)照組AQP1表達(dá)顯著增強(qiáng)，全層軟骨細(xì)胞染色增強(qiáng)，切線層損傷區(qū)可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)軟骨細(xì)胞聚集，移行層、放射層強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，定位細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)。塞來(lái)昔布組AQP1表達(dá)顯著增強(qiáng)，全層軟骨細(xì)胞染色較強(qiáng)，以移行層、放射層較為顯著。見(jiàn)圖3?？瞻讓?duì)照組AQP3主要分布于移行層、放射層淺層細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，弱陽(yáng)性表達(dá)。模型對(duì)照組移行層軟骨細(xì)胞聚集、體積增大，細(xì)胞質(zhì)呈強(qiáng)陽(yáng)性染色，AQP3表達(dá)顯著增強(qiáng)。塞來(lái)昔布組AQP3表達(dá)增強(qiáng)，主要分布于移行層軟骨細(xì)胞質(zhì)，染色較模型對(duì)照組稍弱。見(jiàn)圖4。

半定量分析顯示，空白對(duì)照組AQP1累積光密度最低，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組、塞來(lái)昔布組表達(dá)顯著升高（P < 0.05）;與模型對(duì)照組比較，塞來(lái)昔布組表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）?？瞻讓?duì)照組AQP3表達(dá)最低，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組、塞來(lái)昔布組表達(dá)顯著升高（P < 0.01）;與模型對(duì)照組比較，塞來(lái)昔布組表達(dá)降低（P < 0.05）。

見(jiàn)表4。

3.5 3組血清IL-1β表達(dá)量比較 空白對(duì)照組血清IL-1β含量最低，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組、塞來(lái)昔布組IL-1β含量均顯著升高（P < 0.01）;與模型對(duì)照組比較，塞來(lái)昔布組IL-1β含量降低（P < 0.05）。見(jiàn)表5。

3.6 3組軟骨組織AQP1、AQP3 mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組軟骨組織AQP1、AQP3 mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著上升（P < 0.05或P < 0.01）。與模型對(duì)照組比較，塞來(lái)昔布組AQP1 mRNA表達(dá)略低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）;AQP3 mRNA表達(dá)下調(diào)

（P < 0.01）。見(jiàn)表6。與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組AQP1、AQP3蛋白相對(duì)表達(dá)顯著上升（P < 0.01）;與模型對(duì)照組比較，塞來(lái)昔布組AQP1、AQP3蛋白相對(duì)表達(dá)一定程度下調(diào)（P < 0.01）。見(jiàn)表7。

4 討 論

透明軟骨由軟骨細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)組成，軟骨細(xì)胞負(fù)責(zé)合成細(xì)胞外基質(zhì)并維持其含量，細(xì)胞外基質(zhì)由有機(jī)固相（Ⅱ型膠原纖維、蛋白多糖）和液相（水）等組成，水是基質(zhì)的重要成分，為軟骨組織提供一定的膨脹壓，使軟骨組織具有剛性和抗變形能力;軟骨細(xì)胞對(duì)滲透壓非常敏感，可通過(guò)調(diào)節(jié)自身體積的大小來(lái)適應(yīng)滲透壓的改變。軟骨組織在負(fù)載和卸載過(guò)程中，水分子可帶走軟骨細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，亦可將關(guān)節(jié)液中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)帶回軟骨組織，為軟骨細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)，并提供良好的細(xì)胞外環(huán)境。

AQPs是疏水性、高度保守的跨膜蛋白，屬于主要內(nèi)源性蛋白質(zhì)（MIP）家族，是介導(dǎo)水分子被動(dòng)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的物質(zhì)基礎(chǔ)，可增加細(xì)胞膜上水的通透性，提供液體快速轉(zhuǎn)運(yùn)以維持細(xì)胞內(nèi)外的水平衡，目

前研究發(fā)現(xiàn)軟骨細(xì)胞上存在AQP1和AQP3[11-13]，

正常軟骨組織中基質(zhì)合成和分解處于動(dòng)態(tài)平衡中，軟骨細(xì)胞外環(huán)境較為穩(wěn)定，AQPs正常表達(dá)。高航飛等[14]發(fā)現(xiàn)，大鼠OA模型軟骨組織中AQP1 mRNA和Caspase-3 mRNA表達(dá)呈正相關(guān)，提示AQP1的異常表達(dá)可能與軟骨細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)，參與OA的病理進(jìn)程。MENG等[15]發(fā)現(xiàn)，大鼠OA模型軟骨組織AQP3 mRNA表達(dá)上調(diào)，AQP3的高表達(dá)與軟骨周圍組織腫脹、關(guān)節(jié)腔積液有密切關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，空白對(duì)照組軟骨組織蛋白多糖含量豐富、少量表達(dá)AQP1和AQP3，流動(dòng)水分子少，軟骨滲透性小，摩擦力較大，流體動(dòng)力壓力大，液相液壓是軟骨負(fù)重的主要形式;模型對(duì)照組軟骨組織蛋白多糖含量顯著降低、AQP1和AQP3分布范圍更廣并且表達(dá)量上升，流動(dòng)水分子增多，軟骨滲透性增強(qiáng)，水分子流動(dòng)摩擦力減小，液相承重減弱而有機(jī)固相承重增加，軟骨水腫破壞組織正常結(jié)構(gòu)功能和生物力學(xué)性質(zhì)，導(dǎo)致軟骨組織進(jìn)一步變性。

IL-1β是促炎性細(xì)胞因子，生理狀態(tài)下僅存于個(gè)別軟骨細(xì)胞中，OA患者IL-1β高表達(dá)，且與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)性[16];IL-1β促使一氧化氮、前列腺素E2（PGE2）等物質(zhì)合成，增強(qiáng)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-3、MMP-9和MMP-13表達(dá)，抑制軟骨細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡，增強(qiáng)軟骨基質(zhì)中膠原和蛋白多糖的降解，破壞軟骨組織[17-19]。本實(shí)驗(yàn)中空白對(duì)照組血清IL-1β含量在正常范圍之內(nèi)，而模型對(duì)照組血清IL-1β含量顯著增加，高達(dá)正常水平的3～4倍，循環(huán)血液中致炎性細(xì)胞因子含量增加，進(jìn)一步引發(fā)關(guān)節(jié)軟骨的炎癥反應(yīng)。

塞來(lái)昔布膠囊是最早上市的選擇性環(huán)氧合酶-2（COX-2）抑制劑，是新一代非甾體抗炎藥，傳統(tǒng)認(rèn)為其通過(guò)特異性抑制COX-2生成，降低PGE2生成，抑制IL-1、腫瘤壞死因子-α的促炎作用，抗炎鎮(zhèn)痛以緩解OA臨床癥狀[20-22]。而近年研究發(fā)現(xiàn)，塞來(lái)昔布可增加OA患者血清中基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子3（TIMP-3）的表達(dá)，從而抑制聚蛋白多糖酶1（Agase-1）的活性，減緩關(guān)節(jié)軟骨中蛋白多糖的降解，緩解癥狀[23]。因此，本實(shí)驗(yàn)以水分子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)為切入點(diǎn)，探討塞來(lái)昔布是否通過(guò)調(diào)節(jié)AQP1、AQP3的表達(dá)，降低軟骨滲透性而起抗炎消腫作用。結(jié)果顯示，塞來(lái)昔布干預(yù)4周后，一定程度抑制血清IL-1β表達(dá)，關(guān)節(jié)軟骨面較光滑，軟骨基質(zhì)甲苯胺藍(lán)染色較均勻，Mankin評(píng)分較模型對(duì)照組略低，表明藥物對(duì)OA軟骨結(jié)構(gòu)和成分具一定保護(hù)作用;AQP3表達(dá)顯著減弱，散在分布于核周細(xì)胞質(zhì)中，分布范圍稍小，Real-time PCR、Western Blot顯示AQP3表達(dá)顯著降低，而AQP1降低不顯著，表明藥物可一定程度下調(diào)AQP3的分布范圍和表達(dá)量。

綜上所述，塞來(lái)昔布膠囊可降低軟骨組織中AQP3的分布范圍和表達(dá)量，調(diào)控水分子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能，降低軟骨滲透性以消腫，可能是其治療OA的潛在作用機(jī)制之一。

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收稿日期：2019-05-26;修回日期：2019-07-21