良惡性膀胱腫瘤患者的PRMT5和Cox-2表達(dá)水平比較

郅玲然，王卉芳，蔡鳳梅，李元朋，焦向?qū)?/p>

（1.西安市第四醫(yī)院病理科，西安 710004；2.武警陜西省總隊(duì)醫(yī)院泌尿外科，西安 710054）

膀胱癌是指發(fā)生于膀胱黏膜移行上皮的惡性腫瘤，是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，在全球范圍內(nèi)，膀胱癌發(fā)病率居惡性腫瘤的第11位，世界范圍內(nèi)每年新增病例數(shù)約為1200萬，我國每年膀胱癌發(fā)病率約為6.69/10萬，其中男性發(fā)病率約為女性的3.7倍，且隨著近年來我國居民生活方結(jié)構(gòu)的調(diào)整，膀胱癌發(fā)病率逐年遞增[1-3]。有研究發(fā)現(xiàn)，PRMT5在蛋白質(zhì)甲基化中發(fā)揮重要作用，參與了細(xì)胞增殖、分化、凋亡和腫瘤形成等過程[4-5]；Cox-2屬于誘導(dǎo)酶的一類，越來越多的研究指出，其與腫瘤的發(fā)展、新生血管的形成等過程有密切聯(lián)系[6]。聯(lián)合檢測PRMT5與Cox-2在膀胱腫瘤良惡性的應(yīng)用價(jià)值尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本文對PRMT5和Cox-2在良惡性膀胱腫瘤患者表達(dá)水平進(jìn)行了比較，以為良惡性膀胱腫瘤的診斷提供參考價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1月—2018年1月我院經(jīng)病理確診為膀胱腫瘤的患者83例，取其膀胱組織，分為良性組53例和惡性組30例，另選20例行前列腺增生癥開放術(shù)中所取膀胱黏膜組織且經(jīng)病理檢查確定為正常的黏膜組織作為對照組。3組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 檢測方法 良性組及惡性組均在經(jīng)過尿道膀胱電切術(shù)或膀胱鏡術(shù)時(shí)取膀胱腫瘤組織，對照組為行前列腺增生癥開放術(shù)中所取膀胱黏膜組織且經(jīng)病理檢查確定為正常的黏膜組織，均經(jīng)10%甲醛固定、石蠟包埋，將包埋后的組織蠟塊行4 μm連續(xù)切片，之后采用免疫組織化學(xué)法[7-8]檢測PRMT5及Cox-2表達(dá)水平。兔抗人PRMT5單克隆抗體購自瑞士Enzo Life Sciences公司，羊抗兔二抗購自美國Invitrogen公司；Cox-2兔抗人多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司；即用型SP-9003 His-tostain TM-Plus Kits試劑盒（包括封閉用的生物素標(biāo)記的抗山羊IgG、正常兔血清、辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素）購自美國Zymed公司；DAB顯色試劑購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 在裝有目鏡網(wǎng)格測微尺（80 μm×80 μm），×400倍視野下，每個(gè)組織切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)100個(gè)細(xì)胞中陽性細(xì)胞所占的百分比，結(jié)果取5個(gè)視野中陽性細(xì)胞所占百分比的平均值。PRMT5陽性染色判定為細(xì)胞漿或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)黃色或褐色顆粒，Cox-2的陽性染色判定為細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)黃色或褐色顆粒。5個(gè)視野中PRMT5陽性細(xì)胞所占百分比平均值≥6%記為PRMT5陽性；5個(gè)視野中Cox-2陽性細(xì)胞所占百分比平均值≥6%記為Cox-2陽性。根據(jù)病理學(xué)檢查結(jié)果對惡性組進(jìn)行分級，分為低級別組與高級別組，低級別組11例，高級別組19例。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 16.0軟件，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和百分率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（） 表示，采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組PRMT5及Cox-2陽性表達(dá)率對比 見表1。

表1 3組PRMT5及Cox-2陽性表達(dá)率對比 例（%）

2.2 不同病理分級惡性膀胱腫瘤組織PRMT5及Cox-2陽性表達(dá)率對比 見表2。

表2 不同病理分級惡性膀胱腫瘤組織PRMT5及Cox-2表達(dá)陽性率對比 例（%）

3 討論

膀胱癌是現(xiàn)階段泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，在我國男性癌癥發(fā)病率中居第8位，在女性中居第12位[9,10]。PRMT5是一類將S-腺苷甲硫氨酸上的甲基轉(zhuǎn)移至底物蛋白質(zhì)中精氨酸胍基上的酶，在蛋白質(zhì)甲基化中起著重要的作用。有研究[11]發(fā)現(xiàn)，PRMT5是一種表觀遺傳酶，可催化多種底物蛋白質(zhì)甲基化，從而發(fā)揮不同的生物學(xué)功能，對多個(gè)靶基因和信號通路產(chǎn)生影響。張還添等[12]的研究指出，PRMT5既是一種表觀遺傳酶，同時(shí)也是介導(dǎo)實(shí)體瘤發(fā)生發(fā)展的重要基因，該基因在多種實(shí)體瘤中均呈現(xiàn)高表達(dá)，同時(shí)還與患者的病情及預(yù)后密切相關(guān)。張尤歷等[13]通過對肝癌患者的研究也發(fā)現(xiàn)，PRMT5對肝癌細(xì)胞的增殖、凋亡等過程會(huì)產(chǎn)生較大的影響，PRMT5會(huì)抑制cdc20、cdc25B等蛋白的表達(dá)，抑制細(xì)胞克隆形成能力，從而起到調(diào)控細(xì)胞周期的效果。

本研究也證實(shí)，惡性組的PRMT5及Cox-2陽性表達(dá)率明顯高于良性組和對照組，且良性組也高于對照組，說明在膀胱腫瘤組織中，PRMT5及Cox-2陽性表達(dá)率在惡性組織中表達(dá)高，分析其原因，Cox-2為可誘導(dǎo)性酶，主要存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核膜中，正常情況下Cox-2水平較低，難以檢測到。但病理狀態(tài)下，患者體內(nèi)Cox-2水平會(huì)大幅度上升，催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素，促進(jìn)細(xì)胞增殖、血管形成等進(jìn)程，因而可以通過對Cox-2水平的監(jiān)測來達(dá)到評估腫瘤狀態(tài)的效果。張軍衛(wèi)等[14]的研究指出，Cox-2對膀胱癌診斷的敏感性為60.0%，特異度為92.0%，準(zhǔn)確性為76.0%，提示該物質(zhì)在腫瘤產(chǎn)生浸潤、轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮重要作用。

同時(shí)本文通過將膀胱腫瘤患者惡性組織按照病理分級進(jìn)行分組對比的方式發(fā)現(xiàn)，高級別組PRMT5及Cox-2表達(dá)陽性率明顯高于低級別組，說明在惡性組織中，惡化程度越嚴(yán)重，PRMT5及Cox-2表達(dá)陽性率越高。分析認(rèn)為，其原因?yàn)閮煞N物質(zhì)均在腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、浸潤過程中發(fā)揮較為明顯的作用，PRMT5能夠反映腫瘤細(xì)胞DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)移的進(jìn)程，而Cox-2可反映腫瘤組織新生血管的形成，膀胱的惡性病變會(huì)使PRMT5及Cox-2表達(dá)水平上升，遠(yuǎn)高于良性病變者。同時(shí)隨著患者病情的加重，其膀胱組織中PRMT5及Cox-2會(huì)出現(xiàn)過表達(dá)現(xiàn)象，原因與腫瘤組織的轉(zhuǎn)移、浸潤會(huì)使PRMT5的合成激增，加快細(xì)胞的有絲分裂，而高級別組的膀胱癌細(xì)胞增殖分裂更為活躍，因而其PRMT5表達(dá)陽性率更高；Cox-2可通過誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子的分泌促進(jìn)新生血管的形成，而高級別組惡性腫瘤的浸潤增殖均需血管的營養(yǎng)，因而其Cox-2表達(dá)陽性率也較高。