珍黃胃片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升的研究

喬莉 劉瀟瀟 李華 劉曉鎮(zhèn)

【摘 要】 目的：建立珍黃胃片的制酸力檢查方法和含量測定方法，對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行完善提高。方法：采用回滴定的方法測定珍黃胃片的制酸力，控制溫度為37℃，振搖速度為150r/min，振搖時(shí)間為1h，以溴酚藍(lán)指示劑（黃→藍(lán)紫）為指示滴定終點(diǎn);采用高效液相色譜法，以大黃素和大黃酚為檢測指標(biāo)建立大黃的定量測定方法，色譜柱為phenomenex luna C18（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液（82∶ 18），流速為1.0mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為439nm，進(jìn)樣量為20μL。結(jié)果：測得12批珍黃胃片制酸力為30～36mL/片，平均制酸力為33mL/片;含量測定方法中大黃素的進(jìn)樣量在0.0406～0.812μg（r=1.0000）、大黃酚的進(jìn)樣量在0.0808～1.616 μg（r=1.0000）的范圍內(nèi)均與各自的峰面積呈良好的線性關(guān)系;經(jīng)低、中、高三個(gè)濃度的準(zhǔn)確度試驗(yàn)考察，大黃素的回收率為95%～100%，大黃酚的回收率為95%～103%。結(jié)論：建立的制酸力檢查方法和含量測定方法操作簡單，具有良好的重復(fù)性和準(zhǔn)確性，且專屬性強(qiáng)，為該品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高奠定研究基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】 珍黃胃片;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);制酸力;大黃;含量測定;大黃素;大黃酚

【中圖分類號(hào)】R284.1?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2019）16-0030-06

Abstract：Objective To establish anacid-consuming capacity method and a content determination method for Zhenhuangwei Tablets，in order to improve the quality standard of Zhenhuangwei Tablets. Methods The acid- consuming capacity of Zhenhuangwei Tablets was determined by neutral titration. The experimental temperature was controlled at 37 ℃， the shaking speed was 150 r·min-1， the shaking time was 1 hour， and the bromophenol blue indicator （yellow→blue-violet） was used as the indicator end point. Emodin and Chrysophanol which were taken as index components in Rheum Off-icinale was determined by HPLC. The chromatographie column was phenomenex luna C18（2） （250mm×4.6mm， 5μm）， the mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid solution（82∶ 18），the flow rate was 1.0 mL·min-1，the column temperature was 30 ℃，the detection wavelength was set at 439 nm， and the injection amount was 20 μL. Results The acid-consuming capacity of 12 batches of Zhenhuangwei Tablets was measured to be 30mL/table to 36mL/tablet，and the average acid-consuming capacity was 33mL/ table. The linearrang of emodin was 0.0406-0.812 μg （r=1.0000）， and the The linearrang of chrysophanol was 0.0808～ 1.616 μg （r=1.0000）. At 3 concentration levels the recovery of emodinwas 95%～100% and the recovery of e chrysophanolwas 95%～103%. Conclusion The acid-consuming capacity method and content determination method are simple accurate， it have good repeatability and accuracy， and have strong specificityWhich can laya reaserrch foundation for the improvement of quality standard of Zhenhuangwei Tablets.

Keywords：Zhenhuangwei Tablets; Aualityustandard; Acid-consuming capacity; Rheum palmatum L.; Content determination;Emodin; Chrysophanol

珍黃胃片是在常用臨床制劑“珍子王”基礎(chǔ)上研制的中藥復(fù)方制劑，在多年的臨床應(yīng)用中具有顯著的治療效果[1]。其處方系由大黃、三七、木香、珍珠層粉、碳酸鈣等十味藥組成，諸藥配伍，有健胃行氣、制酸止痛、止血生肌之功，可用于氣滯血瘀、濕濁中阻所致的胃脘脹痛、納差吞酸、慢性胃炎見上述癥候者。珍黃胃片的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)第十八冊[2]，檢驗(yàn)項(xiàng)目僅包括：顯微鑒別、2個(gè)化學(xué)反應(yīng)鑒別以及以大黃對(duì)照藥材和大黃酸、大黃素甲醚、大黃酚、大黃素對(duì)照品作為對(duì)照參照的大黃薄層色譜鑒別。對(duì)于由十種藥味組合而成的中藥復(fù)方制劑來說，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)過于簡單，且缺少對(duì)處方中君藥的定量檢測項(xiàng)目，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可控性較差，有待進(jìn)一步完善。歐國萍等[3]對(duì)珍黃胃片中的三七和木香進(jìn)行了薄層色譜鑒別的研究，對(duì)于珍黃胃片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究基礎(chǔ)較為薄弱。研究采用回滴定的方法測定珍黃胃片的制酸力，用于檢測其消耗過多胃酸的能力;采用高效液相色譜法，以大黃素和大黃酚為檢測指標(biāo)，建立方中主藥大黃的定量測定方法。為完善珍黃胃片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供可靠的技術(shù)支撐，對(duì)保障珍黃胃片的臨床療效具有重要的意義。

1 儀器與材料

1.1 儀器 1100 Infinity型高效液相色譜儀（Agilent Technologies色譜工作站，美國安捷倫公司）;LC-10AT高效液相色譜儀（Lab Solution色譜數(shù)據(jù)處理軟件，日本島津公司）;JulaboSW22恒溫水浴搖床（德國優(yōu)萊博）;Sartorius PB-10酸度計(jì)（德國賽多利斯）;Sartorius CP225D萬分之一電子天平、Sartorius BT125D十萬分之一電子天平（德國賽多利斯）;KQ-300DA型數(shù)控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器公司）。

1.2 材料 大黃素（批號(hào)：110756-201512，含量以98.7%計(jì)），大黃酚（批號(hào)：110796-201621，含量以99.2%計(jì)）均購于中國食品藥品檢定研究院。25批次的珍黃胃片樣品（規(guī)格：0.7g/片）。氫氧化鈉（NaOH）滴定液（0.1mol/L，F(xiàn)=1.004）、氫氧化鈉（NaOH）溶液（0.1mol/L）、鹽酸溶液（0.1mol/L）均按中國藥典2015年版通則8006要求制備;甲基橙指示液、溴酚藍(lán)指示液均按中國藥典2015年版通則8005要求制備;甲醇為色譜純，水為超純水;溴酚藍(lán)、甲基橙均為分析純，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 制酸力

2.1.1 試驗(yàn)方法 取重量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約0.18g，精密稱定，置250mL的具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸滴定液（0.1mol/L）50mL，密塞，在37℃不斷振搖1小時(shí)（振搖速度為150r/min），放冷，濾過，精密量取續(xù)濾液25mL，加溴酚藍(lán)指示液6滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液由黃色變?yōu)樗{(lán)紫色。

2.1.2 反應(yīng)原理 CaCO3+2HCl→CaCl2+H2O+CO2↑，理論上每片最小消耗鹽酸溶液（0.1mol/L）的體積應(yīng)為30mL。

2.1.3 指示劑的選擇 參考英、美、日等國家的藥典，制酸力的終點(diǎn)指示常使用酸度計(jì)，并規(guī)定pH值在3.5時(shí)為終點(diǎn)[4]。試驗(yàn)用酸度計(jì)測定滴定終點(diǎn)，當(dāng)pH值在3.5左右時(shí)突躍明顯，故確定pH值在3.5時(shí)為滴定終點(diǎn)。根據(jù)指示液的變色范圍，可選擇甲基橙指示液或溴酚藍(lán)指示液，但由于甲基橙指示液的終點(diǎn)突躍顏色不明顯而溴酚藍(lán)指示液的終點(diǎn)突躍顏色明顯，且采用酸度計(jì)指示終點(diǎn)與采用溴酚藍(lán)指示液指示終點(diǎn)時(shí)，樣品制酸力測定的結(jié)果基本一致，故確定溴酚藍(lán)指示液指示滴定終點(diǎn)。

2.1.4 取樣量的考察 取重量差異項(xiàng)下的本品（樣本09），研細(xì)，分別取0.18g、0.35g、0.70g，精密稱定，置250mL的具塞錐形瓶中，按“2.1.1”項(xiàng)下的方法進(jìn)行試驗(yàn)，測得制酸力的結(jié)果分別為36mL/片、36mL/片和35mL/片，認(rèn)為上述三種取樣量對(duì)制酸力的測定結(jié)果無顯著差異，但由于取樣量為0.18g時(shí)供試品溶液的底色較0.35g和0.70g淺，終點(diǎn)突躍顏色較明顯，且消耗滴定液的量適中，故確定取樣量為0.18g。

2.1.5 振搖速度的考察 取重量差異項(xiàng)下的本品（批號(hào)：190109），研細(xì)，取0.18g（共四份），精密稱定，置250mL的具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸滴定液（0.1mol/L）50mL，密塞，在37℃不斷振搖30 min（振搖速度分別為50r/min、100r/min、150r/min、200r/min），放冷，按“2.1.1”項(xiàng)下的方法進(jìn)行試驗(yàn)，測得制酸力的結(jié)果分別為34.8mL/片、34.5mL/片、35.5mL/片和34.8mL/片，認(rèn)為上述四種振搖速度對(duì)制酸力的測定結(jié)果無顯著差異，且當(dāng)振搖速度為150r/min時(shí)測得制酸力最大，故確定振搖速度為150r/min。

2.1.6 振搖時(shí)間的考察 取重量差異項(xiàng)下的本品（樣本09），研細(xì)，取0.18g（共三份），精密稱定，置250mL的具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸滴定液（0.1mol/L）50mL，密塞，在37℃分別不斷振搖30、60、90min（振搖速度為150r/min），放冷，按“2.1.1”項(xiàng)下的方法進(jìn)行試驗(yàn)，測得制酸力的結(jié)果分別為35.8mL/片、36.4mL/片和36.6mL/片，結(jié)果：當(dāng)振搖時(shí)間為60min時(shí)測得制酸力與90min時(shí)的基本一致，故確定振搖是時(shí)間為60min。

2.1.7 樣品測定 照“2.1.1”項(xiàng)下的方法測定了12批樣品的制酸力，結(jié)果見表1。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：phenomenex luna C18（250mm×4.6mm，5μm）;流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液（82∶ 18）;檢測波長：439nm;流速：1.0mL/min;柱溫：30℃;進(jìn)樣量為20μL。理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取大黃素對(duì)照品和大黃酚對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含大黃素10μg、大黃酚20μg的混合溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取重量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10mL，置錐形瓶中，減壓回收溶劑，加鹽酸-水（1∶ 10）的混合溶液20mL，超聲處理5min，再加二氯甲烷30mL，加熱回流1h，放冷，置分液漏斗中，用少量二氯甲烷分次洗滌容器，并入分液漏斗中，分取二氯甲烷液，酸液用二氯甲烷振搖提取3次，每次20mL，合并二氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓D(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備 按珍黃胃片處方、工藝制備成缺大黃陰性樣品，再按“2.2.3”項(xiàng)下方法制成缺大黃陰性樣品溶液。

2.2.5 專屬性考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液與陰性樣品溶液各20μL，按“2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1，表明缺大黃陰性樣品無干擾。

2.2.6 線性關(guān)系的考察 精密稱取大黃素對(duì)照品10mg、大黃酚對(duì)照品20mg，置100mL容量瓶中，加甲醇適量使溶解并至刻度適量，搖勻，得對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密吸取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液1、3、5、10、20mL，置50mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成系列濃度的混合對(duì)照品溶液，分別吸取20μL，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，以進(jìn)樣量（μg）（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖2），其線性回歸方程為：大黃素y=1125183.4978x-212.2040，R2=1.0000;大黃酚y=1147555.0878x-2661.7684，R2=1.0000。結(jié)果表明：大黃素在0.0406～0.812μg、大黃酚在0.0808～1.616μg的范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果：大黃素峰面積的RSD為0.15%（n=6），大黃酚峰面積的RSD為0.4%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品（樣本013），研細(xì)，取約3g，共6份，精密稱定，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，結(jié)果：大黃素的平均含量為0.11874mg/g，RSD為2.0%（n=6）、大黃酚的平均含量為0.70558mg/g，RSD為1.5%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已測定含量的樣品（樣本013）研細(xì)，取約1.5g，共9份，精密稱定，其中：低濃度3份精密加入每1mL含大黃素3.16μg、大黃酚19.82μg的混合對(duì)照品溶液25mL;中濃度3份精密加入每1mL含大黃素6.33μg、大黃酚40.00μg的混合對(duì)照品溶液25mL;高濃度3份精密加入每1mL含大黃素9.50μg、大黃酚57.29μg的混合對(duì)照品溶液25mL，按“2.2.3”項(xiàng)下的方法制成回收供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件測定，計(jì)算大黃素和大黃酚的回收率。結(jié)果見表2～3，表明本方法的準(zhǔn)確度較好。

2.2.10 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品（樣本016），按 “2.2.3”項(xiàng)下的供試品制備方法制成供試品溶液，精密吸取20μL，按 “2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件，分別在0、2、4、8、10和24h，注入液相色譜儀測定其含量。結(jié)果：大黃素峰面積的RSD為0.9%（n=6）;大黃酚峰面積的RSD為0.4%（n=6），表明樣品在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.11 樣品測定 按上述的方法測定了25批樣品中大黃素和大黃酚的總量，結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 制酸力 珍黃胃片為治療胃酸過多的抗酸藥，處方中珍珠層粉和碳酸鈣具有制酸止痛的效果，通過與胃酸反應(yīng)，減輕甚至消除過酸的胃液對(duì)胃黏膜的刺激和腐蝕作用，進(jìn)而達(dá)到治療胃潰瘍或慢性胃炎中胃酸分泌過多的癥狀。檢測抗酸藥對(duì)胃酸的作用效果，限定藥物對(duì)胃酸的中和能力，能夠更好的保證抗酸藥對(duì)于人體的用藥安全和有效，避免出現(xiàn)堿血癥、腹瀉、便秘等副作用[4]。因此，制酸力檢查項(xiàng)是一項(xiàng)對(duì)于抗酸類藥物必不可少的檢驗(yàn)項(xiàng)目。

3.2 含量測定

3.2.1 指標(biāo)成分的選定 大黃為珍黃胃片處方中的主藥，其具有瀉下攻積，清熱解毒等功效，含有多類活性成分，其中以蒽醌類、蒽酮類成分為主。王玲[5]研究表明，大黃中的蒽醌類化合物及其衍生物具有良好的止血、活血、抗?jié)?、抗菌作用，孫冉[6]研究表明大黃中蒽醌類化合物及其衍生物對(duì)藥效起作用的主要包含大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃酸和大黃素甲醚。其中大黃素具有抗炎、抑菌、抗病毒作用，對(duì)于胃腸道的炎癥具備顯著療效，是檢測大黃含量測定的常用組分之一[7]。大黃酚則是對(duì)多種細(xì)菌具有抑制作用，可促進(jìn)腸管運(yùn)動(dòng)，對(duì)于清除胃潰瘍或慢性胃炎患者胃腸道內(nèi)多余的幽門螺桿菌具有顯著效果，也是大黃中的常用檢測指標(biāo)成分[8]?；谏鲜鲈颍敬螌?duì)于珍黃胃片中大黃含量測定的研究選定大黃素和大黃酚作為含量測定指標(biāo)成分。

3.2.2 檢測波長的確定 大黃素和大黃酚的紫外吸收光譜測定結(jié)果顯示大黃素在439nm 、288nm、266nm、253nm波長處有最大吸收，大黃酚在430nm、287nm、277nm、257nm波長處有最大吸收，當(dāng)選用439nm為檢測波長時(shí)，大黃素和大黃酚的檢測靈敏度較高，雜質(zhì)峰較少，基線平穩(wěn)，雜質(zhì)均不干擾測定，故選用439nm為測測波長。

3.2.3 提取方法的選擇 參考中國藥典2015年版一部收載的“大黃”含量測定方法[9]，采用25mL甲醇作為提取溶劑，分別加熱回流提取0.5h、1h、1.5h，經(jīng)比較加熱回流1h和1.5h測得結(jié)果無明顯差異，且高于0.5h，故采用加熱回流1h的提取方法。

綜上所述，建立的珍黃胃片的制酸力檢查方法和主藥大黃的定量檢測方法操作簡單，具有良好的重復(fù)性和準(zhǔn)確性，且專屬性強(qiáng)，能有效提高其質(zhì)量可控性，為該品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供可靠的技術(shù)支持。

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（收稿日期：2019-06-19 編輯：程鵬飛）