HPLC法測(cè)定清咽利喉合劑中黃芩苷的含量

鄧紹友 呂艷 李玲瑞 杜瑤 趙永崗 袁建平

【摘?要】?目的：建立HPLC法測(cè)定清咽利喉合劑中黃芩苷含量的方法。方法：采用十八烷基鍵合硅膠為固定相;乙腈-0.1%磷酸（32∶68）為流動(dòng)相;流速1.0mL/min;檢測(cè)波長326nm，柱溫30℃。結(jié)果：黃芩苷在0.05785～0.8677μg范圍內(nèi)呈良好線性（r=0.99977）;平均回收率為99.9%，RSD為0.62%。結(jié)論：本法快速準(zhǔn)確，雜質(zhì)分離完全，重現(xiàn)性好，可用于清咽利喉合劑中黃芩苷的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】?HPLC;清咽利喉合劑;黃芩苷

【中圖分類號(hào)】R284.1?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A?【文章編號(hào)】1007-8517（2019）17-0028-03

Abstract：ObjectiveTo establish a HPLC method for the determination of baicalin in Qingyan Lihou Mixture.Methods The octadecyl bonded silica gel was used as the stationary phase; acetonitrile： 0.1% phosphoric acid （32∶68） was used as the mobile phase; the flow rate was 1.0 mL/min; the detection wavelength was 326 nm， and the column temperature was 30℃.Results?Baicalin showed good linearity in the range of 0.05785～0.8677μg （r=0.99977）; the average recovery was 99.9%， and the RSD was 0.62%.Conclusion This method is fast and accurate， complete separation of impurities and good reproducibility. It can be used to determine the content of baicalin in Qingyan Lihou Mixture.

Key?words：HPLC; Qingyan Lihou Mixture; Baicalin

清咽利喉合劑是曲靖市第一人民醫(yī)院研制的院內(nèi)制劑。由黃芩、金蕎麥、玄參、麥冬等組成，具有養(yǎng)陰、清咽、清熱解毒的功效，臨床用于咽喉腫痛、急性扁桃體炎、咽頰炎、上呼吸道感染等癥。其中黃芩為制劑中的君藥，有著悠久的應(yīng)用歷史，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎的功效[1]?！侗静菡分杏涊d：“枯者清上焦之火，消痰利氣，定喘咳……，解瘟疫，清咽，療肺萎……”，臨床上主要用于肺熱咳嗽、癰腫瘡毒，咽喉腫痛等癥。黃芩苷是從黃芩中提取分離出來的一種黃酮類化合物，已證明有廣泛的藥理活性，具有消炎、解熱、抗病毒、抗菌等作用[1-2]。2015版《中國藥典》將黃芩苷作為黃芩的質(zhì)量控制指標(biāo)[3]。結(jié)合《中國藥典》和文獻(xiàn)[4-8]，通過對(duì)清咽利喉合劑中君藥黃芩的有效成分黃芩苷進(jìn)行含量測(cè)定，從而達(dá)到對(duì)該藥的質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定清咽利喉合劑中黃芩苷含量，操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性高，為有效控制清咽利喉合劑質(zhì)量提供可靠且簡(jiǎn)便易行的方法。

1?儀器與試藥

1.1?儀器?Agilent1260高效液相色譜儀（包括高壓四元泵、DAD檢測(cè)器、柱溫箱、自動(dòng)進(jìn)樣器、工作站）;超聲波清洗器（上海聲源超聲波清洗器設(shè)備有限公司）;ME104萬分之一電子分析天平、ME55十萬分之一電子分析天平。

1.2?材料?黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)：110715-201318，中國食品藥品檢定研究院，含量為93.3%）;清咽利喉合劑（批號(hào)：20190127-1、20190326-2、2019012-2，曲靖市第一人民醫(yī)院制劑室），甲醇（分析純，批號(hào)：127848，賽默飛世爾科技有限公司），乙腈為色譜純，水為超純水。

2?方法與結(jié)果

2.1?溶液制備

2.1.1?對(duì)照品溶液的制備?取黃芩苷對(duì)照品 1.55mg，精密稱定，置25mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成濃度為0.05785mg/mL 對(duì)照品溶液，備用。

2.1.2?供試品溶液的制備?精密量取清咽利喉合劑2.0mL，置50mL 量瓶中，加50%乙醇35mL，超聲處理30min，放冷至室溫，用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取此液5.0mL，置25mL 量瓶中，加50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液經(jīng)0.45μm濾膜，即得供試品溶液。

2.1.3?陰性樣品溶液的制備?按清咽利喉合劑的處方比例，分別稱取除黃芩以外的其他藥材，依照清咽利喉合劑工藝制備不含黃芩的陰性樣品，并按“2.1.2”項(xiàng)下制備陰性樣品溶液。

2.2?色譜條件?ZORBAX SB-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸（32∶68），檢測(cè)波長為326nm，流速1.0mL /min，柱溫30℃。

2.3?線性關(guān)系考察?按“2.2”色譜條件分別進(jìn)樣1、3、5、7、10、15μL進(jìn)行測(cè)定，以黃芩苷的進(jìn)樣質(zhì)量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到黃芩苷的回歸方程為Y=1808.8865*Amt+14.1250，相關(guān)系數(shù)為0.99970。

2.4?精密度?精密吸取清咽利喉合劑（批號(hào)：20181214-1）供試品溶液10μL，按“2.2”色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰的峰面積，結(jié)果峰面積的RSD%為0.12%，表明儀器的精密度良好。

2.5?專屬性?將陰性樣品溶液按 “2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果見圖1，在與樣品主峰保留時(shí)間處未出現(xiàn)相應(yīng)的色譜峰。

2.6?穩(wěn)定性試驗(yàn)?精密量取清咽利喉合劑（批號(hào)：20181214-1）5.00mL，置50mL 量瓶中，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，室溫放置，分別于0、2、4、8、12、24h進(jìn)行測(cè)定，記錄黃芩苷色譜峰的面積，結(jié)果峰面積的RSD為0.35%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7?重復(fù)性試驗(yàn)?精密量取清咽利喉合劑（批號(hào)：20181214-1）5.00mL，置50mL 量瓶中，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行操作6份，按“2.2”色譜條件測(cè)定，測(cè)定黃芩苷的峰面積，計(jì)算黃芩苷的平均含量為2.663mg/mL， RSD為0.49%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8?回收率試驗(yàn)?精密量取清咽利喉合劑（批號(hào)：20190127-1）1.0mL，置50mL 量瓶中，共6份，分成三組，每組分別依次精密加入黃芩苷0.05785mg/mL 的對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0mL，照“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)0.4μm濾膜濾過即得。按“2.3”色譜條件，精密吸取6份供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄黃芩苷峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算黃芩苷的含量，并計(jì)算回收率。平均回收率為99.9%，RSD為0.62%，回收率良好，符合分析方法的要求?；厥章式Y(jié)果見表1。

2.9?樣品含量測(cè)定?精密量取3批清咽利喉合劑（批號(hào)：20181214-1、20181207-1、20190110-1）5.00mL，置50mL 量瓶中，每批次平行操作2份，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”色譜條件測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算各供試品溶液中黃芩苷的含量。結(jié)果見表2。

3?討論

3.1?色譜條件的選擇?參照《中國藥典》2015年版中黃芩含量測(cè)定，甲醇-水、甲醇-0.1%磷酸、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為326nm，流速1.0mL /min，柱溫30℃，結(jié)果表明，以乙腈-0.1%磷酸為流動(dòng)相的供試品色譜峰分離度較好，達(dá)到基線分離。

3.2?提取溶劑和提取方法?分別考察了超聲提取法和回流提取法兩種提取方法及不同提取溶劑（甲醇、乙醇、50%乙醇、70%乙醇），結(jié)果表明，超聲提取效率較水浴加熱回流高，其中提取效率50%乙醇>甲醇>70%乙醇>乙醇。因此采用50%乙醇作為提取溶劑，超聲處理的方法，該操作方法簡(jiǎn)單易行，且主峰和雜質(zhì)峰分離較好。

3.3?提取時(shí)間的考察?精密量取清咽利喉合劑2.00mL，3份，置50mL 量瓶中，加入35mL?50%乙醇，分別超聲處理20、30、40min，結(jié)果表明，該樣品中黃芩苷的含量經(jīng)超聲處理30min可提取完全。

綜上所述，實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定清咽利喉合劑中黃芩苷的含量，操作簡(jiǎn)單，精密度高，穩(wěn)定性好，可以作為本制劑的監(jiān)控指標(biāo)，更好的控制該制劑的質(zhì)量。

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（收稿日期：2019-06-18?編輯：劉?斌）