野棉花醇提物鎮(zhèn)痛、抗炎、止瀉及安全性實(shí)驗(yàn)研究

趙春梅 黃加文 肖茹月 楊和金 王自梁 楊鷗

摘要：目的 觀察野棉花醇提物的鎮(zhèn)痛、抗炎、止瀉作用及急性毒性研究。方法 采用小鼠醋酸扭體法、小鼠二甲苯耳廓腫脹、小鼠腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)，以及急性毒性試驗(yàn)。結(jié)果 野棉花醇提物能減少醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，降低二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度，可顯著抑制墨汁在小鼠小腸的推進(jìn)運(yùn)動(dòng)。野棉花醇提物24h內(nèi)小鼠灌胃給藥最小致死量為16.00 g/kg.bw（相當(dāng)于生藥101.91 g/kg.bw），死亡率為10%;最大耐受量為13.60 g/kg.bw（相當(dāng)于生藥86.62 g/kg.bw），死亡率為0%。結(jié)論 提示野棉花醇提物具有明顯的鎮(zhèn)痛、抗炎、止瀉作用，且具有一定毒性。

關(guān)鍵詞：野棉花醇提物;止痛劑;抗炎;抗腹瀉

中圖分類號(hào)：R285.5?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?? 文章編號(hào)：1007-2349（2019）09-0063-03

【Abstract】Objective：To observe the analgesic，anti-inflammatory，antidiarrheal effects and acute toxicity of wild cotton alcohol extracts. Methods：Mouse acetic acid writhing method，mouse xylene auricle swelling，mouse intestinal propulsion experiment and acute toxicity test were conducted. Results：The wild cotton extract could reduce the number of writhing reactions induced by acetic acid in mice，reduce the degree of swelling of mouse ear caused by xylene and significantly inhibit the advancement of ink in the small intestine of mice. The minimum lethal dose of mice fed with wild cotton extract within 24h was 16.00 g/kg. bw（equivalent to 101.91 g/kg. bw of crude drug）and the mortality rate was 10%. The maximum tolerated dose was 13.60 g/kg. bw（equivalent to 86.62 g/kg. bw of crude drug）and the mortality rate is 0%. Conclusion：It is suggested that the wild cotton alcohol extract has obvious analgesic，anti-inflammatory and antidiarrheal effects and also has certain toxicity.

【Key words】wild cotton alcohol extract，analgesic，anti-inflammatory，anti-diarrhea

野棉花（學(xué)名：Anemone vitifolia Buch.-Ham.）是毛茛科植物野棉花的根，銀蓮花屬多年生草本植物。分布于中國(guó)云南、四川西南部、西藏東南部和南部[1]。緬甸北部、不丹、尼泊爾、印度北部也有分布。生長(zhǎng)于山地草坡、溝邊或疏林中。野棉花具有清濕熱，解毒殺蟲，理氣散瘀的功效。對(duì)野棉花的藥理作用研究極少，因此，本文對(duì)野棉花的乙醇提取物進(jìn)行了藥理研究，探討其在鎮(zhèn)痛、抗炎、止瀉方面的藥理作用，為將來開發(fā)應(yīng)用野棉花提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥物 野棉花醇提取物，由云南省藥物研究所提供，70%乙醇提取3次，減壓回收，干燥。提取率為15.7%。使用時(shí)用純水配制。藥效試驗(yàn)給藥劑量以急性毒性試驗(yàn)結(jié)果為依據(jù)確定。阿司匹林腸溶片，100mg/片，Bayer Schering Pharma生產(chǎn)，批號(hào)：BJ10778;云南白藥，云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：ZAA1323;冰醋酸，天津市天達(dá)凈化材料精細(xì)化工廠，批號(hào)：020112;二甲苯，廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心，批號(hào)：20090831。

1.2 動(dòng)物 SPF級(jí)昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。許可證號(hào)：SCXK（粵）2013-0002。小鼠分性別飼養(yǎng)于空調(diào)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，室溫（25±2）℃，相對(duì)濕度40%～70%，喂顆粒標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水和攝食。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以（x±s）（n）表示，n是每組動(dòng)物數(shù)目。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行“Independent-Samples T Test”檢驗(yàn)。

2 方法

2.1 鎮(zhèn)痛試驗(yàn) 選用KM小鼠48只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，組別及劑量如表1，按照表1劑量ig給藥，每日1次，連續(xù)8 d。末次給藥后45 min，ip0.6%冰醋酸0.1 mL/10 g/只，記錄15 min內(nèi)的扭體反應(yīng)（小鼠出現(xiàn)腹部?jī)?nèi)凹、軀干與后肢伸張，臀部抬起反應(yīng)為準(zhǔn)）次數(shù)，并計(jì)算其抑制率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

野棉花醇提物4.00 g/kg，8.00 g/kg 2組均能不同程度抑制醋酸所致小鼠扭體性疼痛，抑制率分別為：41.52%、63.50%，與空白對(duì)照組相比較具著性差異，顯示出鎮(zhèn)痛作用。

2.2 抗炎試驗(yàn) 選用KM小鼠48只，按體重隨機(jī)分為4組，每組雌雄各6只，分組及給藥情況見表2。各組均預(yù)先每日灌胃給藥1次，連續(xù)9 d，對(duì)照組灌服等容量純水，各組灌胃容積均為20 mL/kg體重。末次給藥后30 min，各組小鼠于右耳兩面均勻涂抹二甲苯0.05 mL，左耳不涂為對(duì)照。致炎后1 h脫頸椎處死動(dòng)物，用直徑6 mm的打孔器將雙耳同部位等面積切下，取耳片稱重，以兩耳片重量之差作為腫脹度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

野棉花醇提物4.00 g/kg，8.00 g/kg兩個(gè)劑量均能不同程度抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，2組抑制率分別為：32.37%、35.30%，尤以8.00 g/kg劑量組作用明顯，與空白對(duì)照組相比較具有顯著性差異。顯示出抗炎作用。

2.3 腸推進(jìn)作用研究 選用KM小鼠48只，小鼠按體重隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組、復(fù)方地芬諾酯片組、野棉花醇提物低、高劑量組。禁食12 h后，按劑量灌胃給藥1次，給藥30 min后，以0.2 mL/只給藥量灌服墨汁（5%的炭末溶于0.5%的羧甲基纖維素鈉）20 min后脫頸椎處死小鼠，打開腹腔，分離腸系膜，剪取自幽門至回盲部的小腸，測(cè)量小腸長(zhǎng)度、推進(jìn)距離（幽門到墨汁推進(jìn)前沿距離）。結(jié)果見表3。

野棉花醇提物4.00 g/kg，8.00 g/kg兩個(gè)劑量均能顯著抑制墨汁在小鼠小腸的推進(jìn)運(yùn)動(dòng)，2組抑制率分別為：83.42%、94.03%，4.0 g/kg，8.0 g/kg劑量組與空白對(duì)照組相比較差異顯著（P<0.001，P<0.001）。顯示出腸推進(jìn)抑制作用。

2.4 小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)

2.4.1 正式實(shí)驗(yàn) 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，將KM小鼠60只隨機(jī)分為3組，即溶媒對(duì)照組和野棉花16.00 g/kg、13.60 g/kg.bw 2個(gè)劑量組，每組20只，雌雄各10只。動(dòng)物禁食不禁水約6 h 2 min～6 h 45 min后，按40 mL/kg體重一次灌胃給予相應(yīng)供試品，觀察其急性毒性反應(yīng)和死亡情況，以后每天觀察1次，連續(xù)14 d;于給藥第4、7、14 d稱量體重;觀察結(jié)束處死動(dòng)物，大體解剖觀察各動(dòng)物臟器、器官的體積、顏色、質(zhì)地等有無明顯異常。

2.4.2 結(jié)果與分析

2.4.2.1 毒性反應(yīng) 小鼠灌胃給予供試品野棉花醇提物后，在4 h內(nèi)出現(xiàn)毒性反應(yīng)，主要表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)減少、俯臥等，死亡動(dòng)物出現(xiàn)驚厥、抽搐、角弓反張等反應(yīng)。至第2 d恢復(fù)。給藥組動(dòng)物的毒性反應(yīng)見表4。

2.4.2.2 死亡情況 觀察期內(nèi)16.00 g/kg.bw雌性小鼠死亡1只，雄性小鼠死亡1只，死亡率為10%;13.60 g/kg.bw劑量組無小鼠死亡，死亡率為0%。

2.4.2.3 體重 試驗(yàn)期間，給藥后第3、7、14 d，16.00 g/kg.bw劑量組雌、雄小鼠體重增長(zhǎng)緩慢，與溶媒對(duì)照組比較具有顯著性差異;給藥后第3、7、14 d，13.60 g/kg.bw劑量組雄性小鼠體重增長(zhǎng)緩慢，與溶媒對(duì)照組比較具有顯著性差異;給藥后第7、14 d，13.60 g/kg.bw劑量組雌性小鼠體重增長(zhǎng)緩慢，與溶媒對(duì)照組比較具有顯著性差異。結(jié)果見表5。

2.4.2.4 解剖觀察 觀察14 d結(jié)束后脫頸椎處死的動(dòng)物進(jìn)行大體解剖觀察，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、卵巢、子宮、精囊、前列腺、睪丸、胃、腸及胸腔、腹腔，各組織和器官的體積、顏色、質(zhì)地等，野棉花醇提物各劑量組、溶媒對(duì)照組各小鼠器官均無肉眼所見異常。

2.4.3 評(píng)價(jià)與結(jié)論 在本實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)野棉花醇提物不同劑量進(jìn)行24h內(nèi)小鼠單次灌胃給藥急性毒性試驗(yàn)，可見動(dòng)物于4 h內(nèi)出現(xiàn)毒性反應(yīng)，主要表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)減少、俯臥等，死亡動(dòng)物出現(xiàn)俯臥等反應(yīng)。至第2 d恢復(fù)。試驗(yàn)結(jié)束對(duì)存活動(dòng)物進(jìn)行大體解剖觀察，各組動(dòng)物臟器、器官的體積、顏色、質(zhì)地等均未見明顯異常。野棉花醇提物24 h內(nèi)小鼠灌胃給藥最小致死量為16.00 g/kg.bw（相當(dāng)于生藥101.91 g/kg.bw），死亡率為10%;最大耐受量為13.60 g/kg.bw（相當(dāng)于生藥86.62 g/kg.bw），死亡率為0%。

3 討論

野棉花是云南民間常用藥。文獻(xiàn)記載野棉花具有清濕熱，解毒殺蟲，理氣散瘀的功效。主治泄瀉、痢疾、黃疸、瘧疾、蛔蟲病、蟯蟲病、小兒疳積、腳氣腫痛、風(fēng)濕骨痛、跌打損傷、癰疽腫毒、蜈蚣咬傷，野棉花藥理作用的活性成分及其作用機(jī)制研究較少。為了探討和開發(fā)野棉花的藥用價(jià)值，筆者對(duì)其進(jìn)行了鎮(zhèn)痛、抗炎、止瀉藥理作用的實(shí)驗(yàn)研究。急性毒性實(shí)驗(yàn)顯示，野棉花醇提物24 h內(nèi)小鼠灌胃給藥最小致死量為16.00 g/kg.bw（相當(dāng)于生藥101.91 g/kg.bw），死亡率為10%;最大耐受量為13.60 g/kg.bw（相當(dāng)于生藥86.62 g/kg.bw），死亡率為0%。表明其具有一定毒性。野棉花能抑制醋酸所致小鼠扭體性疼痛，能抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，可顯著抑制墨汁在小鼠小腸的推進(jìn)運(yùn)動(dòng)，說明野棉花具有腸推進(jìn)抑制作用，具有鎮(zhèn)痛作用和抗炎作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為野棉花將來產(chǎn)品研發(fā)和臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999.

（收稿日期：2019-06-05）