5309對(duì)不良孕產(chǎn)史夫婦外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)及G顯帶染色體核型分析

(河南省南陽(yáng)市第一人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科，河南 南陽(yáng) 473003)

不良孕產(chǎn)史為常見(jiàn)妊娠病理現(xiàn)象，主要包括習(xí)慣性流產(chǎn)、死胎、生育智力低下兒與畸形兒、胚胎停育、死產(chǎn)等，其中胚胎停育、習(xí)慣性流產(chǎn)為主要臨床表征[1-3]。不良孕產(chǎn)史病因較多，包括子宮結(jié)構(gòu)異常、生殖道感染、內(nèi)分泌代謝異常、母體全身性疾病、免疫因素、環(huán)境因素及染色體異常[數(shù)目異常、結(jié)構(gòu)異常(重復(fù)、易位、缺失、倒位、等臂染色體、插入、環(huán)狀染色體等)、染色體多態(tài)性]等，其中染色體異常為最重要原因[4-6]。本研究選取我院5309對(duì)不良孕產(chǎn)史夫婦，進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)、G顯帶染色體核型分析，探究不良孕產(chǎn)史與染色體異常的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取我院2016年1月—2019年3月5309對(duì)(10618例)不良孕產(chǎn)史夫婦，進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)、G顯帶染色體核型分析。臨床表現(xiàn)為習(xí)慣性流產(chǎn)、染色體異常兒孕產(chǎn)史、胚胎停育、畸胎史等。5309對(duì)不良孕產(chǎn)史夫婦中，染色體異常患者684例(6.44%)，其中胚胎停育、習(xí)慣性流產(chǎn)398例，占58.19%(398/684)；染色體異常兒孕產(chǎn)史158例，占23.10%(158/684)；畸胎史50例，占7.31%(50/684)；其他78例，占11.40%(78/684)?；颊呔橥猓狙芯拷?jīng)我院倫理委員會(huì)同意批準(zhǔn)。

1.2方法 抽取靜脈血3 ml，EDTA抗凝。于淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基中接種混勻的外周血(0.4 ml)，培養(yǎng)68～72 h(恒溫箱，37℃)，加入0.1 ml秋水仙素工作液，1 h后離心(8 min，2500 r/min)，將上清液去除。加入8 ml氯化鉀(KCl)(0.075 mol/L)，低滲(37℃水浴箱，30 min)。加入2 ml固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)，15 min后離心，將上清液去除。加入固定液8 ml，20 min后離心，將上清液去除，加入8 ml固定液，放置在4℃冰箱過(guò)夜。滴片將置于烤箱(80℃，4 h)。將玻片置于胰酶溶液(37℃，0.25%)，消化20～30 s，以生理鹽水對(duì)染色體片進(jìn)行漂洗，染色5 min(Giemsa、PBS混合液)，漂洗，晾干后掃片。核型分析≥5個(gè)/例，中期分裂相記數(shù)≥20個(gè)，異常者加倍。

2 結(jié)果

684例染色體異常中，數(shù)目、結(jié)構(gòu)異常184例，其中數(shù)目異常47例，超雄或超雌12例，表現(xiàn)為胚胎停育、畸胎史、反復(fù)性流產(chǎn)等；特納或超雌嵌合體22例，表現(xiàn)為胚胎停育、反復(fù)性流產(chǎn)等；Y染色體倒位13例，表現(xiàn)為畸胎引產(chǎn)或流產(chǎn)。結(jié)構(gòu)異常137例，72例染色體平衡易位，均為常-常染色體易位；16例羅伯遜易位，17例倒位，11例染色體增加，10例染色體重復(fù)，5例染色體缺失，6例標(biāo)記染色體。染色體多態(tài)性500例，1號(hào)、9號(hào)、16號(hào)、Y染色體次縊痕增加共330例，9號(hào)染色體倒位114例，染色體隨體柄增加36例，染色體隨體增加20例。見(jiàn)表1。

表1 染色體異常與臨床的關(guān)系

3 討論

有報(bào)道稱[7-9]，在我國(guó)人群中，不良孕產(chǎn)史患者染色體異常率為2.98%～10.8%，顯著高于染色體總異常率(0.5%～1.0%)。本研究中，5309對(duì)不良孕產(chǎn)史夫婦染色體異常率為6.44%(684/10618)；684例染色體異常中，數(shù)目異常47例，其中超雄或超雌12例，特納或超雌嵌合體22例，表現(xiàn)為反復(fù)性流產(chǎn)、畸胎史，胚胎停育等。其原因在于，X染色體單體致使特納表型特征復(fù)雜，如無(wú)月經(jīng)、胚胎停育、流產(chǎn)等[10]。Y染色體倒位13例，表現(xiàn)為流產(chǎn)、畸胎引產(chǎn)，其原因在于，Y染色體倒位攜帶者配子形成時(shí)易產(chǎn)生倒位環(huán)，導(dǎo)致不平衡配子形成，進(jìn)而引起死胎、流產(chǎn)等[11]。

684例染色體異常中，結(jié)構(gòu)異常137例，染色體易位為最主要染色體結(jié)構(gòu)異常，表現(xiàn)為胚胎停育、畸胎、多次自然流產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局。其原因在于，染色體易位攜帶者生殖細(xì)胞減數(shù)分裂時(shí)，通過(guò)配對(duì)、互換、分離可形成不平衡易位合子，導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局(死胎、流產(chǎn)、畸胎、死產(chǎn)等)[12]。染色體倒位可產(chǎn)生部分缺失、重復(fù)，其致生殖異常的機(jī)制有：①配子形成時(shí)，同源染色體形成倒位圈，進(jìn)而發(fā)生交換，形成異常染色體(部分缺失、部分重復(fù))，導(dǎo)致不平衡配子形成，引起胎兒畸形、流產(chǎn)等；②常染色質(zhì)重排移至異染色質(zhì)區(qū)，發(fā)生染色質(zhì)化，抑制某些基因表達(dá)。本研究中，染色體倒位17例，行產(chǎn)前診斷，無(wú)部分重復(fù)或缺失胎兒，同時(shí)，發(fā)現(xiàn)11例染色體增加，10例染色體重復(fù)，5例染色體缺失，6例標(biāo)記染色體，這些染色體大片段重復(fù)、增加、缺失可對(duì)減數(shù)分裂造成影響，進(jìn)而引起流產(chǎn)。

684例染色體異常中，染色體多態(tài)性500例，1號(hào)、9號(hào)、16號(hào)、Y染色體次縊痕增加共330例，114例9號(hào)染色體倒位，36例染色體隨體柄增加，20例染色體隨體增加。次縊痕增加指由異染色質(zhì)區(qū)DNA序列(高度重復(fù))增加，導(dǎo)致減數(shù)分裂時(shí)，同源染色體聯(lián)會(huì)、配對(duì)受到影響，形成非整倍體配子，引起流產(chǎn)[13]。胡蘭萍等[14]研究顯示，染色體多態(tài)性qh+與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、畸形兒、胚胎停育等不良孕產(chǎn)史密切相關(guān)。36例染色體隨體柄增加，20例染色體隨體增加，其原因可能為次縊痕區(qū)著絲粒-動(dòng)粒復(fù)合體(CKC)為染色體運(yùn)動(dòng)、均等分離的基礎(chǔ)，染色體隨體變異，使端著絲粒染色體的不分離概率增加，導(dǎo)致異常配子形成，干擾細(xì)胞分裂，影響胚胎發(fā)育。既往研究顯示，inv(9)不涉及遺傳物質(zhì)丟失，不引起臨床效應(yīng)。本研究中，13例46，XY，inv(9)(p12q13)，均存在死胎、畸形兒史，其原因可能在于，9號(hào)染色體發(fā)生臂間倒位，由于位置效應(yīng)，使松弛基因(RLX)作用減弱，進(jìn)而引起生育障礙[15]。

綜上可知，夫婦染色體異常為引起不良孕產(chǎn)史的重要因素，同時(shí)應(yīng)對(duì)染色體多態(tài)性對(duì)不良孕產(chǎn)史的影響給予充分重視。