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    肝細(xì)胞癌中FHIT、P16和MMP-9的表達(dá)和意義

    2019-11-04 08:16:48夏振雄周程
    肝臟 2019年10期
    關(guān)鍵詞:癌栓門靜脈肝細(xì)胞

    夏振雄 周程

    肝細(xì)胞癌惡性程度高、侵襲性強(qiáng)、病情進(jìn)展快,患者早期癥狀不明顯,一旦出現(xiàn)癥狀就診,通常已屬中晚期,預(yù)后較差[1-3]。尋找腫瘤標(biāo)記物以早期診斷、早期治療和開發(fā)有效藥物治療肝細(xì)胞癌就顯得十分重要。目前已有大量研究表明,F(xiàn)HIT、P16和MMP-9對(duì)肝細(xì)胞癌的診斷、治療及預(yù)后都有重要價(jià)值。本研究采用免疫組化技術(shù)對(duì)90例肝細(xì)胞癌標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),探討FHIT、P16和MMP-9在肝細(xì)胞癌組織的表達(dá)及其與肝細(xì)胞癌病理特征的關(guān)系。

    資料與方法

    一、一般資料

    收集本院2015年5月至2018年4月90例肝細(xì)胞癌患者的臨床資料和組織標(biāo)本。其中男性60例,女性30例;年齡34~76歲,平均年齡(49.1±9.3)歲,其中≤50歲27例,> 50歲63例;腫瘤大小≤5 cm者58例,>5 cm者32例;低分化33例,高、中分化57例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者28例,陽性者62例;根據(jù)TNM肝臟腫瘤分期Ⅰ~Ⅱ期54例,Ⅲ~Ⅳ期36例;有門靜脈癌栓形成者23例,無門靜脈癌栓形成者67例。全部組織標(biāo)本均保存于醫(yī)院病理科,另取40例癌旁組織作為對(duì)照。

    二、方法

    (一)免疫組化法 組織經(jīng)10%福爾馬林固定,石蠟包埋,連續(xù)切片,制成4 μm厚片備染。采用免疫組化SP方法:脫蠟、水化;抗原高壓修復(fù);3%H2O2室溫10 min滅活內(nèi)源性酶;蒸餾水清洗后,抗原修復(fù);血清封閉20 min,加一抗后4 ℃過夜;次日依次滴加生物素化二抗及辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素,各37 ℃ 30 min,PBS清洗;DAB顯色;蘇木素復(fù)染;酒精分化后脫水、透明,封片后鏡檢。FHIT兔抗人單克隆抗體購自美國Sigma公司,P16兔抗人單克隆抗體購自上海微蒙酶聯(lián)試劑公司;MMP-9兔抗人單克隆抗體購自購自Zymed公司;免疫組化SP試劑盒和DAB顯色劑均購自北京中杉試劑公司。陽性對(duì)照為已知的陽性切片,陰性對(duì)照采用PBS做一抗。

    (二)結(jié)果判斷 細(xì)胞內(nèi)的FHIT、P16和MMP-9均定位于細(xì)胞漿中,陽性為胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕褐色或者棕黃色顆粒,不著色的細(xì)胞為陰性。在高倍鏡下隨機(jī)挑選10個(gè)不同視野計(jì)數(shù),以百分率(%)表示陽性細(xì)胞數(shù)占全部腫瘤細(xì)胞數(shù)的比例:陽性腫瘤細(xì)胞數(shù)<10%為表達(dá)陰性;陽性腫瘤細(xì)胞數(shù)≥10%為陽性表達(dá)。

    三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    一、FHIT、P16和MMP-9在肝細(xì)胞癌組織和癌旁組織的表達(dá)情況

    90例肝細(xì)胞癌組織標(biāo)本中有33例FHIT表達(dá)呈陽性,陽性率為36.7%(33/90),癌旁組織29例陽性,陽性率72.5%(29/40)。肝細(xì)胞癌組織中FHIT蛋白的表達(dá)均顯著低于癌旁組織(χ2=14.253,P=0.000)。35例P16表達(dá)呈陽性,陽性率為38.9%(35/90),癌旁組織31例陽性,陽性率77.5%(31/40)。肝細(xì)胞癌組織中P16蛋白的表達(dá)均顯著低于癌旁組織(χ2=16.518,P=0.000)。33例MMP-9表達(dá)呈陽性,陽性率為75.6%(68/90),癌旁組織13例陽性,陽性率32.5%(13/40)。肝細(xì)胞癌組織中MMP-9蛋白的表達(dá)均顯著高于癌旁組織(χ2=21.859,P=0.000)。見圖1。

    圖1 MMP-9在癌旁組織(a)和肝細(xì)胞癌組織(b)中的表達(dá)(DAB染色×100)

    二、FHIT、P16和MMP-9表達(dá)與臨床指標(biāo)之間的關(guān)系

    FHIT、P16和MMP-9表達(dá)均與患者年齡和性別無關(guān)(P>0.05),與其他臨床指標(biāo)之間的關(guān)系各有不同。FHIT與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及門靜脈癌栓是否形成有關(guān)(P<0.05);P16與腫瘤大小和分化程度有關(guān)(P<0.05);MMP-9與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和門靜脈癌栓是否形成有關(guān)(P<0.05),見表1。

    表1 肝細(xì)胞癌組織中FHIT、P16和MMP-9表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

    討 論

    FHIT基因是脆性位點(diǎn)和腫瘤關(guān)聯(lián)的抑癌基因。FHIT蛋白在絕大多數(shù)正常組織器官中均有表達(dá),通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、阻滯細(xì)胞生長來發(fā)揮抑癌作用,但在人類多種惡性腫瘤中(肺癌、乳腺癌、食管癌、胃癌、結(jié)腸癌和膀胱癌等)FHIT基因出現(xiàn)了轉(zhuǎn)錄異常和表達(dá)缺失,其抑癌作用降低甚至消失。大量研究表明FHIT基因改變可能在惡性腫瘤的早期發(fā)生過程中占有重要地位[4-8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,肝細(xì)胞癌組織中FHIT蛋白的表達(dá)顯著低于癌旁組織(36.7% vs. 72.5%),F(xiàn)HIT與肝細(xì)胞癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及門靜脈癌栓是否形成有關(guān),綜合上述結(jié)果可知FHIT與肝細(xì)胞癌的病程發(fā)展有密切關(guān)系,且與其分化的程度和腫瘤的轉(zhuǎn)移具有一定相關(guān)性。

    P16基因被稱為多腫瘤抑制的基因,P16蛋白參與細(xì)胞周期的調(diào)控,具有負(fù)調(diào)控細(xì)胞增殖的作用[9-11],對(duì)腫瘤產(chǎn)生有效抑制,在肺癌、胃癌、食管癌、胰腺癌和腸癌等多種腫瘤中都檢測(cè)到P16基因或蛋白的高頻率突變和缺失,說明P16基因的異常和P16蛋白缺失可能在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中有著重要的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,肝細(xì)胞癌組織中P16蛋白的表達(dá)顯著低于癌旁組織(38.9% vs. 77.5%),P16的表達(dá)與腫瘤大小和分化程度有關(guān),上述結(jié)果均提示P16低表達(dá)是肝細(xì)胞癌發(fā)生與發(fā)展過程中的一個(gè)重要事件。

    腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的主要特點(diǎn)之一。研究表明,細(xì)胞外基質(zhì)和血管基膜的降解與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[12]。MMPs是一類降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的金屬依賴蛋白酶,一方面,MMP-9可通過破壞局部組織結(jié)構(gòu)和基膜屏障,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移,另一方面,MMP-9降解細(xì)胞外基質(zhì)和血管基膜,使腫瘤細(xì)胞進(jìn)入門靜脈末端分支并種植于血管壁,形成癌栓[13]。本研究表明,癌組織中MMP-9顯著高表達(dá),且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、門靜脈癌栓是否形成有關(guān),上述結(jié)果進(jìn)一步佐證MMP-9在腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制中具有重要意義。

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