快速免疫組化技術(shù)檢測在前列腺穿刺組織冰凍切片診斷中的應(yīng)用價(jià)值

河南省腫瘤醫(yī)院 鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院（450003）王大鵬

1 資料與方法

1.1 臨床資料 研究對(duì)象為我院從2017年2月～2018年4月醫(yī)院所選取的60例前列腺穿刺標(biāo)本，經(jīng)病理診斷為前列腺癌20例，良性前列腺增生40例。年齡為50～84歲，平均年齡為（67±11.2）歲。取所有病例組織冰凍切片，連續(xù)做6μm，取每例4張空白的冰凍切片。冰余組織經(jīng)石蠟包埋連續(xù)4μm切片。

1.2 方法 經(jīng)快速免疫組化染色檢測留取的空白冰凍切片，冰余組織石蠟切片經(jīng)常規(guī)免疫組化染色檢測。以PBS代替一抗為陰性，已知陽性對(duì)照組為陽性對(duì)照組組。常規(guī)石蠟切片免疫組化染色方法操作步驟：切片放在67℃的烘烤箱中，并進(jìn)行2h的烘片，脫蠟至水，經(jīng)pH值為7.4的PBS至少?zèng)_洗3次，每次沖洗時(shí)間3分鐘；取適量pH6.0檸檬酸鹽緩沖液，加到微波盒中，加熱至沸騰，之后脫蠟水化后組織，取組織切片放在耐高溫的塑料架上，放入沸騰緩沖液中，微波爐中檔溫度加熱10分鐘，取出后自然冷卻，并用蒸餾水進(jìn)行沖洗。

快速免疫組化染色法的操作步驟：冰凍切片放于冷甲醇4℃環(huán)境下固定1分鐘，在自然環(huán)境下晾干15s，經(jīng)PBS液體沖洗1次，每次沖洗10s；加即用型一抗放于37℃環(huán)境下，孵育10分鐘，經(jīng)PBS沖洗3次，每次沖洗時(shí)間20s；加即用型的試驗(yàn)試劑，放于37℃環(huán)境下，孵育5分鐘，經(jīng)PBS進(jìn)行3次沖洗，每次沖洗時(shí)間20s。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 評(píng)價(jià)P40、34βE12、p504S陽性表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)比兩種檢測方法的陽性率。P40陽性表達(dá)在基底細(xì)胞胞核；34βE12陽性表達(dá)基底細(xì)胞胞質(zhì)，p504S陽性表達(dá)腺體上皮細(xì)胞胞質(zhì)[1]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)處理工具為SPSS20.0。不同組間計(jì)數(shù)資料分別用x2檢驗(yàn)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05表示。

附表 P40、34βE12、p504S在前列腺穿刺組織陽性表達(dá)（n）

2 結(jié)果

快速免疫組化檢測：前列腺增生組織中的P40、34βE12陽性率分別為97.5%、92.5%，但在前列腺癌中均為陰性表達(dá)，p504S前列腺增生組織為陰性表達(dá)，而前列腺癌陽性率為95.0%；常規(guī)免疫組化法：前列腺增生P40、34βE12陽性率分別為95.0%、92.5%，但在前列腺癌中為陰性表達(dá)；前列腺增生中p504S陽性表達(dá)率為2.5%，而前列腺癌的陽性表達(dá)為90.0%。三種抗體在前列腺癌、前列腺增生中組織表達(dá)差異顯著，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見附表。

3 討論

臨床常用的前列腺基底細(xì)胞標(biāo)記抗體分別為34βE12、P63，前列腺癌細(xì)胞的標(biāo)記抗體為p504s。P40為一種臨床病理研究新提出的診斷標(biāo)志物，而且一些研究已經(jīng)證實(shí)其高度特異性性，可用于腺癌與肺鱗狀細(xì)胞癌的診斷[2]。為進(jìn)一步明確其診斷價(jià)值，本次研究中，應(yīng)用快速免疫組化聯(lián)合P40、34βE12、p504S在前列腺組織中表達(dá)，鑒別前列腺良惡性病變。研究結(jié)果表明，快速免疫組化檢測與常規(guī)免疫組化法結(jié)果為P40、34βE12、p504S的陽性表達(dá)無明顯差異（P＞0.05），但前列腺增生與前列腺癌中的P40、34βE12、p504S的陽性表達(dá)差異顯著（P＜0.05）。而且研究中存在兩種免疫組化試驗(yàn)結(jié)果不一致情況，分析可能是因切片組織處理不同，相較于石蠟切片，冰凍切片能更完整保留組織中抗原，也有可能中操作誤差導(dǎo)致。對(duì)比兩種檢測方法，快速免疫組化抗體表達(dá)定位準(zhǔn)確、背景清晰，且無干擾信號(hào)，檢測準(zhǔn)確率較高。

綜上所述，前列腺癌初期無明顯增加，但鑒于其發(fā)病率不斷增加，為了提高患者治療效果，臨床提出早期篩查快速診斷，為臨床治療提供準(zhǔn)確的病理檢查結(jié)果，并指導(dǎo)臨床治療選擇有效的前列腺癌治療效果，臨床應(yīng)用價(jià)值顯著。