高效液相色譜法檢測頭孢替唑殘留的檢驗方法分析

河南省駐馬店市食品藥品檢驗所（463000）趙正威 趙曉麗

頭孢菌素是一類臨床常用的抗生素，因為抗菌能力強、抗菌譜的范圍廣泛、臨床效果顯著，頭孢菌素類藥物在抗菌藥物中占有非常重要的地位。其合成原料來自于天然冠頭孢菌，根據(jù)發(fā)現(xiàn)發(fā)明的年代以及其抗菌特點和強度，頭孢菌素一共分為四代。第一代頭孢菌素對各種鏈球菌和葡萄球菌等革蘭陽性菌比較敏感，對革蘭陰性桿菌則抗菌能力較弱。頭孢替唑是一種半人工合成的頭孢類藥物，屬于第一代頭孢衍生物，具有廣譜的抗菌能力，在臨床上廣泛應用于呼吸道和泌尿道等部位的感染[1]。對藥物的殘留進行檢測是評估藥品是否合格的一種主要方式。國內(nèi)主流的藥物殘留檢測方法有液相色譜法和氣相色譜法，而高效液相色譜法在液相色譜法的基礎上進行了改進，是目前檢測頭孢替唑藥物殘留的主要方法。文章將從信噪比與檢測限等方面入手，應用該方法檢測頭孢替唑殘留，對其檢測效果進行評價分析?，F(xiàn)將情況匯報如下。

1 材料與方法

1.1 器材與材料 使用儀器的選擇方面，我們選用Agilent 1260高效液相色譜儀作為分析儀器；使用梅特勒XS205DU精密天平來稱量藥物樣品；并同時準備多個移液管和25ml、50ml、100ml三種容積的容量瓶用來制備不同濃度的對照樣品。

試劑需準備乙腈和枸櫞酸分別作為色譜純和分析純，并準備相應純化水，以及需要分析的頭孢替唑樣品。

色譜條件方面，使用3g枸櫞酸加水稀釋成900ml和90∶10的乙腈作為流動相；流速設置為0.8ml/分鐘；波長254nm；色譜柱的柱溫調(diào)至30℃；進樣量20μl。

附表 各組儲備液的濃度值與峰面積值

1.2 步驟與方法 （1）制備儲備液：使用天平稱取樣本頭孢替唑25.47mg，全部放入一25ml容量瓶中，加水至25ml，使其溶解，并震蕩搖勻。（2）對樣本定性、定量的重復性實驗：①配制高濃度對照溶液：用移液管取1.2ml的儲備液，加入純水制成100ml的高濃度對照溶液。②配制中濃度對照溶液：用移液管取1.0ml的儲備液，加入純水制成100ml的中等濃度對照溶液。③配制高濃度對照溶液：用移液管取0.8ml的儲備液，加入純水制成100ml的低濃度對照溶液。④檢測方法：取不同濃度的對照溶液分別注入高效液相色譜儀，檢測并記錄數(shù)據(jù)。（3）儲備液濃度的測定：最低劑量取0.6ml，最高劑量取1.4ml，每隔0.2個單位取一次樣，取樣后分別注入儀器中檢測。（4）儀器的基線穩(wěn)定后，注入空白溶液，檢測噪音，計算信噪比。

1.3 觀察指標 對比各組儲備液的峰面積和濃度，觀察樣本的檢測限和信噪比。

1.4 統(tǒng)計學分析 計量資料使用SPSS22.0進行統(tǒng)計，對濃度與峰面積的數(shù)值進行相關性分析。

2 結(jié)果

2.1 各組濃度與峰面積數(shù)值見附表，結(jié)果顯示，在該頭孢替唑樣本的濃度0.005622mg/ml～0.013470mg/ml與峰面積呈現(xiàn)良好的線性相關關系，其線性方程為Y=31803X+25.49，相關系數(shù)r=0.9858。

2.2 樣本的檢測限與信噪比：樣本濃度在0.005622mg/ml時檢測到的信噪比數(shù)值是4.65，符合國家信噪比標準（≥3），檢測限0.005622mg/ml。

3 討論

頭孢替唑作為臨床抗菌的一線用藥，是一種廣譜的抗菌素，對革蘭陽性和陰性菌都有殺滅作用，但尤其對革蘭陽性菌具有更強的殺滅能力，其主要作用機制在于可以抑制有害病菌的細胞壁形成，使病菌水解死亡[2]，臨床實踐證明其抗菌效果十分強大。頭孢替唑進入機體后主要分布在肝腎和血清中，其半衰期比較長，代謝緩慢，可以在人體內(nèi)持續(xù)起抗菌作用，但同樣的也帶來藥物殘留造成不良反應的問題?，F(xiàn)如今制藥行業(yè)進步飛快，在藥物為人民的健康保駕護航的同時，藥品的質(zhì)量安全問題也逐步進入人們的視野，在科技高速發(fā)展的今天，世界各國都十分重視藥品的安全問題，不合格的藥物流入市場將對患者造成不可估量的損失，甚至威脅到生命安全，如：頭孢替唑中的雜質(zhì)過多將會導致患者的嚴重過敏反應。特別是抗生素類的藥物，該類藥物使用的范圍廣、劑量大，尤其需要慎重制造與使用。

對藥物殘留進行檢測，旨在于確保藥物在使用過程中的安全性。一方面能盡早發(fā)現(xiàn)或減少因藥物殘留造成的不良反應以及藥物的相互作用，另一方面，可以檢測藥物的純凈度，篩除掉不合格的藥物，促進制藥工藝的改進提升，減少因制備工藝粗糙或其他原因致使的藥物雜質(zhì)增多。

目前，高效液相色譜法是檢測藥物殘留的主流方法[3]。液相色譜法與傳統(tǒng)的氣相色譜法的檢測方法和其他各方面都有不同之處。液相色譜法要求將被檢的物質(zhì)溶解成溶液，放入色譜柱當中，在該液體的流動的過程中，溶液中的各種物質(zhì)與高效液相色譜儀內(nèi)的固定相進行反應和相互作用，最終造成樣本內(nèi)的各種混合物的分離和解體[4]，分離之后的樣品按照一定的分級分類進行檢測和分析。但是傳統(tǒng)的液相色譜法在檢測過程中分離的時間長，效率低下，檢測分析的速度也十分的緩慢，操作步驟比較復雜[5]。而高效液相色譜法與普通的液相色譜法相比，使用高壓高速的方法，不僅分離快、分析效率高而且操作十分簡單便捷，這種檢測方法越來越受到各個檢驗檢測領域的重視。

本研究通過制備不同濃度的頭孢替唑溶液，將其放入高效液相色譜儀中進行分離檢測，計算各濃度溶液的峰面積，使用相關性分析，筆者發(fā)現(xiàn)，該溶液的峰面積隨濃度的改變而改變，且這種改變具有線性相關關系，相關系數(shù)r=0.9858，并得出其方程為Y=31803X+25.49。本實驗的研究結(jié)果表明，在該頭孢替唑樣本的濃度0.005622mg/ml～0.013470mg/ml與峰面積呈現(xiàn)良好的線性相關關系。而樣本濃度在0.005622mg/ml時檢測到的信噪比數(shù)值是4.65，符合國家信噪比標準，檢測限0.005622mg/ml。數(shù)據(jù)提示高效液相色譜法在應用于頭孢替唑藥物殘留的檢測中的結(jié)果是可信且有效的。

使用高效液相色譜法檢測頭孢替唑的藥物殘留，可以更有效地分離樣品中的混合物，能夠更加清楚地分析藥物的各種組成成分，并且本實驗檢測所花費的時間不到0.5h，說明高效液相色譜法是一種十分高效快速的檢驗方法?？梢哉J為使用高效液相色譜法檢測頭孢替唑的藥物殘留具有效率高、準確度高、分析檢測速度快等優(yōu)點。

綜上所述，使用高效液相色譜法對頭孢替唑的藥物殘留進行檢測有著高效、快速、方便以及檢測結(jié)果可信度高等一系列的優(yōu)點，可以提高檢測效率和準確度，提高檢測人員的工作效率。高效液相色譜法有望為我國食品藥品安全作出貢獻，值得在其他領域推廣使用。