土鱉蟲與其混淆品的微性狀鑒別研究

鞠 康，張雪艷，胡云飛，郭宣宣，周建理1,*

1安徽中醫(yī)藥科學院亳州中醫(yī)藥研究所；2亳州職業(yè)技術學院，亳州 236800；3安徽中醫(yī)藥大學，合肥 230031；4亳州學院，亳州 236800

2015年版《中國藥典》收載供藥用的土鱉蟲為鱉蠊科昆蟲地鱉EupolyphagasinensisWalker.或冀地鱉Steleophagaplancyi(Boleny)的雌蟲干燥體。捕捉以后，置沸水中燙死，曬干或烘干[1]。入藥均為雌性蟲體，雄性土鱉蟲不入藥。在福建、湖北、廣東等地市售品中有金邊土鱉為姬嫌科動物東方后片蠊，華南、西 南等地還有一種龍虱也稱水鱉蟲，為龍虱科動物東方龍虱[2]。其中，龍虱的鞘翅邊緣雖有棣黃色“金邊”，但它并不是“金邊地鱉”。所謂 “金邊地鱉”亦稱金邊水，其前胸背板前緣有一黃色鑲邊故名。形態(tài)頗似冀地鱉，故尚有誤視本品乃冀地鱉之優(yōu)良者[3]。近年來地鱉蟲的藥理藥效研究受到了眾多學者的關注[4]，但對土鱉蟲的性狀等方面的研究較少，本文運用性狀鑒別結合微性狀鑒別主要對土鱉蟲各組成部分，以及頭部、腹部、背部和觸角等部位進行研究分析，從而找出其鑒別特征，為臨床研究提供參考依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 實驗材料

所有實驗材料均采集于亳州康美中藥材市場，共12批次。經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學周建理教授鑒定為5種，分別為地鱉、金邊土鱉蟲、雄性土鱉蟲(成蟲)、雄性土鱉蟲(幼蟲)、冀地鱉(見表1 )。

表1 土鱉蟲與其混淆品的學名及生物分類

1.2 實驗儀器

實驗設備有：掃描儀型號為Epson Perfection V330 Photo； EPSON Scan軟件程序(日本Seiko Epson Corporation制造)。生物顯微鏡型號為E130(麥克奧迪實業(yè)集團有限公司生產(chǎn))；顯微成像系統(tǒng)、鳳凰顯微圖像處理分析軟件型號為Phmias2008 Cs ver3.0 Demo；電子目鏡型號為MC-D500U(E)(鳳凰光學集團生產(chǎn))；Photoshop CS5軟件程序(美國Adobe公司制造)。徠卡EZ4W 體視顯微鏡，LAS EZ數(shù)碼攝像系統(tǒng)。

2 方法和結果

2.1 性狀鑒別的方法和結果

2.1.1 性狀鑒別方法

分別對不同品種的土鱉蟲的個體大小，色澤，表面特征等進行觀察；用掃描儀掃描，便于觀察土鱉蟲的體長、體寬并數(shù)據(jù)記錄；此外便于圖片加標尺。用EPSON Scan軟件程序先進行預覽，再把分辨率調(diào)成9 600，最后進行掃描與裁剪。將所得圖片用Photoshop CS5軟件程序，將掃描到的圖片載入合成軟件中；添加標尺和附注信息，從而得到所需圖片；備用。

2.1.2 性狀鑒別結果

地鱉的性狀鑒別：蟲體形狀呈橢圓形，前端較窄，后端相對較寬，背部隆微起，背甲覆瓦狀排列。顏色為紫褐色或紅褐色，有光澤；雌性成蟲無翅，長約3.0 cm。頭部小，呈倒三角形，紫褐色，咀嚼式口器。頭部頂端一對腎形復眼，向下有一對黃色單眼，單眼間距約等于復眼間距。單眼旁有一對絲狀觸角，較長且易脫落。頭部不露出第一節(jié)前胸背板，二、三兩節(jié)形似梯形。九節(jié)腹背板，第六、七、八腹節(jié)背板后緣弧形向內(nèi)凹。肛上板橫寬，且具中脊，肛上板后側中央具缺刻。生殖板橫寬，隆起。胸部足三對，具多數(shù)剛毛，脛節(jié)上具五至二十枚刺，跗節(jié)5，具2爪。腹部具橫環(huán)節(jié)九節(jié)，第一和第八、九節(jié)較小，腹面為深棕色。尾部呈扇形，一對螺絲狀尾須(見圖1、圖2中的A1、A2)。

金邊土鱉蟲的性狀鑒別：雌性、雄性成蟲相似，雄性成蟲無翅，雌成蟲長約3.5 cm。前胸背板成微呈三角形，且前緣鑲有黃色邊，第二，三胸背板兩側各有特異的翅狀物一對。腹背板八節(jié)，胸部足三對；胸部前方米白色的狐形白紋[6]。氣腥臭，味微咸[1]。由中胸背板至腹部末端兩側緣有半圈(下半圈)棕紅色鑲邊，每節(jié)均有鋸齒。足短粗，腿節(jié)下緣有巨刺[7](見圖1、圖2中的B1、B2)。

雄性土鱉蟲(成蟲)的性狀鑒別：體型較小，長約2.2 cm，略扁平；頭部不露出前胸背板；單眼間距明顯寬于復眼間距；上唇隆起，唇基縫向上不達觸角窩下緣。觸角不長于體長，易脫落。前胸背板略呈三角形，表面密被細小的顆粒及短剛毛。雄性成蟲有翅，雄性幼蟲無翅，成蟲有翅膀2對，前翅為革質，后翅為膜質。且前、后翅發(fā)育較完全，前翅前緣較厚，具短剛毛；后翅脈分枝較多。前足股節(jié)僅一具根端刺；中足、后足股節(jié)腹面無刺，而后足跗節(jié)腹面具2列小刺，跗節(jié)基節(jié)短于其余節(jié)之和，且具跗墊，兩爪對稱且具爪墊。腹背板側緣有短剛毛，肛上板橫寬，對稱，后緣呈微波曲形。尾須密被剛毛。生殖板橫寬且對稱，后緣近平直，被剛毛；具紅褐色外露生殖器(見圖1、圖2中的C1、C2)。

雄性土鱉蟲(幼蟲)的性狀鑒別：目前商品多數(shù)為家養(yǎng)的地鱉，其在生長過程中脫皮10 至12 次，每脫一次皮稱一齡。雄性成 5 齡后的雄幼蟲中，后胸背板翅芽形成45°角的直行曲線狀，雌幼蟲的中，后胸背板翅芽退化，形成60°角的弧形曲線狀；雄蟲生殖口蓋較小，雌蟲較大;雄蟲腹下橫線 6條，雌蟲4條[8](見圖1、圖2中的D1、D2)。

冀地鱉：與地鱉相類似，體型較地鱉大，雌、雄性成蟲異形，雌性成蟲有翅，長3.0～3.6cm。腹背板至尾端有一隆起的脊棱線。腹背板共十節(jié)。背部黑棕色，邊緣常有淡黃棕色斑塊，其中相間黑色小點(見圖1、圖2中的E1、E2)。

圖1 土鱉蟲與其混淆品背甲性狀鑒別特征圖Fig.1 Identification characteristics of backshell of the tubie beetle and its confounder注：A:地鱉；B:金邊土鱉蟲；C:雄性土鱉蟲(成蟲)；D:雄性土鱉蟲(幼蟲)；E:冀地鱉；下同。Note:A: Eupolyphaga sinensis Walker.;B: Opisthoplatia orientalis Burmister;C: Eupolyphaga sinensis Walker;D: Eupolyphaga sinensis Walker;E: Steleophaga plancyi(Boleny);the same as below.

圖2 土鱉蟲與其混淆品腹甲性狀鑒別特征圖Fig.2 Identification characteristics of woodlouse worm and its confused products

2.2 微性狀鑒別方法與結果

2.2.1 微性狀鑒別方法

將不同品種的樣品按照不同部位選取后置于載玻片上，先用低倍鏡尋找到部位的位置，將目鏡更換為電子攝像目鏡，然后打開電腦以及鳳凰顯微圖像處理軟件(Phmias 2008 Cs ver3.0 Demo)，將電子目鏡的USB接口與電腦連接，調(diào)節(jié)光源和各個色調(diào)選項，使電腦上顯示的圖片與目鏡中看到的土鱉蟲各部位顏色一致。選擇多幀拍攝并微調(diào)顯微鏡并調(diào)節(jié)顯微鏡微調(diào)旋鈕，由模糊到清晰，再從清晰到模糊連續(xù)拍攝，拍攝不同景深條件下的一系列圖片，拍攝時固定住載玻片。圖片根據(jù)不同景深以拍攝10～20張為宜，從而得到較多的圖像數(shù)據(jù)以便最終合成高清晰度的圖片[5]。

將所得圖片運用Photoshop CS5軟件程序，將拍攝到的同一組圖片載入合成軟件中，對圖片進行自動混合圖層及合并可見圖層等操作，合成高清晰度的特征圖片，并篩選出具有代表性的圖片進行相互比較使用Photoshop對帶有標尺的載玻片進行拍攝并制作成符合圖片大小的標尺，給圖片添加標尺，備用。

分別選取不同產(chǎn)地土鱉蟲不同部位置于載玻片上，放于徠卡EZ4W體視顯微鏡下，最低倍數(shù)8倍下調(diào)整到需拍攝部分，聚焦后打開計算機與LAS EZ數(shù)碼攝像系統(tǒng)，調(diào)整至所需倍數(shù)后旋轉聚焦，拍攝3到5張不同焦距下觀察部的圖片，拍攝時需固定載玻片。將所得圖片運用Photoshop CS5 軟件程序進行圖片合成，并制作不同倍數(shù)標尺對拍攝圖片中物體進行測量[5]。

2.2.2 微性狀鑒別結果

2.2.2.1 土鱉蟲與其混淆品頭部微性狀區(qū)別

地鱉頭部：頭部不露出胸背板，頭部長、寬分別約為3.8、3 mm；隆起上唇為紅棕色，間有亮黃色，其中唇基縫不到達觸角窩下緣之水平，兩觸角窩之間為紅棕色，單眼上緣略高于觸角窩。胸背板密被剛毛。

金邊土鱉蟲頭部：頭部不露出胸背板，頭部長、寬分別約為3.6、3.0 mm；隆起上唇為紫紅色，間有紅棕色，其中唇基縫超過觸角窩下緣之水平兩觸角窩之間為紫紅色，單眼上緣約齊平于觸角窩。胸背板幾乎無剛毛；且具有凹陷小圓點。且第一塊胸背板邊緣微黃色金邊，第二、第三胸背板各有一對特異的翅狀物。

雄性土鱉蟲(成蟲)頭部：頭部不露出胸背板，頭部長、寬分別約為2.7、2.5 mm；隆起上唇為橙黃色，間有黃棕色，其中唇基縫不到達觸角窩下緣之水平，兩觸角窩之間為紫紅色，單眼下緣超過觸角窩。胸背板被剛毛。

雄性土鱉蟲(幼蟲)頭部：頭部不露出胸背板，頭部長、寬分別約為2.7、2.3 mm；隆起上唇為紫紅色，間有黃色，其中唇基縫不到達觸角窩下緣之水平，兩觸角窩之間為紫紅色，單眼上緣略高于觸角窩。胸背板被剛毛；跗節(jié)頂端為爪，爪具中墊。

冀地鱉頭部：頭部不露出胸背板，頭部長、寬分別約為5.7、5.5 mm；隆起上唇為紫黑色，間有鮮黃色，其中唇基縫不到達觸角窩下緣之水平，兩觸角窩之間為紫黑色，單眼上緣約齊平于觸角窩。胸背板被稀疏剛毛，表面呈現(xiàn)粗糙顆粒狀，且胸背板邊緣具黃色斑塊(見圖3、圖4、圖5)。

圖3 土鱉蟲與其混淆品頭部(腹)微性狀鑒別特征圖Fig.3 Identification characteristics of head (abdomen) of woodlouse worm and its confused products

圖4 土鱉蟲與其混淆品頭部(背)微性狀鑒別特征圖Fig.4 Identification of microcharacters in the head (back) of tuturtle and its confusions

圖5 土鱉蟲與其混淆品口器微性狀鑒別特征圖Fig.5 Identification characteristics of microcharacters of the mouthparts of chitons and its confounders

2.2.2.2 土鱉蟲與其混淆品腹背板邊緣微性狀區(qū)別

地鱉腹背板邊緣：每節(jié)腹背板邊緣都較鈍，顏色為紫紅色。

金邊土鱉蟲腹背板邊緣：每腹背板邊緣皆為鋸齒狀，且兩側有半圈棕紅色鑲邊。

雄性土鱉蟲(成蟲)腹背板邊緣：第一塊胸背板除外，背甲由黃棕色翅覆蓋。

雄性土鱉蟲(幼蟲)腹背板邊緣：每節(jié)腹背板邊緣較鈍，顏色為紫紅色。

冀地鱉腹背板邊緣：每節(jié)腹背板邊緣較鈍，為紫黑色。邊緣帶有淡黃褐色斑塊及黑色小點(見圖6)。

圖6 土鱉蟲與其混淆品腹甲邊緣微性狀鑒別特征圖Fig.6 Identification of marginal characters of woodlouse worm and its obfuscation

2.2.2.3 土鱉蟲與其混淆品肛上板、生殖板微性狀區(qū)別

地鱉肛上板、生殖板：肛上板橫寬，具中脊，后緣中央具缺刻。下生殖板橫寬，后緣寬圓[3]。

金邊土鱉蟲肛上板、生殖板：肛上板鈍圓且較長，無中脊，后緣中央具缺刻，且具有紅棕色鑲邊。下生殖板略鼓。

雄性土鱉蟲(成蟲)肛上板、生殖板：肛上板橫寬且對稱無中脊，后緣微波曲形。下生殖板橫寬且對稱，后緣近乎平直，密被短毛。具紅棕色外露的生殖器。

雄性土鱉蟲(幼蟲)肛上板、生殖板：肛上板較寬，無中脊，后緣具缺刻且為微波曲形。下生殖板橫寬，后緣寬圓。

冀地鱉肛上板、生殖板：肛上板橫寬，無中脊，后緣中央具較深缺刻。下生殖板橫寬，后緣寬圓，顏色為黑色與紅色相間(見圖7、圖8)。

圖7 土鱉蟲與其混淆品杠上板微性狀鑒別特征圖Fig.7 Identification of microcharacters in the upper plate of soil turtle and its confusions

圖8 土鱉蟲與其混淆品生殖板微性狀鑒別特征Fig.8 Identification characteristics of microcharacters of chitons and its confusion products in the reproductive plate

2.2.2.4 土鱉蟲與其混淆品觸角微性狀區(qū)別

地鱉觸角：顏色為紅棕色，每節(jié)觸角近端較遠端略狹窄，且遠端具金黃色剛毛。

金邊土鱉蟲觸角：顏色為紅棕色，每節(jié)觸角近端與遠端近等寬，幾乎無剛毛。

雄性土鱉蟲(成蟲)觸角：顏色為黃棕色，觸角較粗壯，每節(jié)近端較遠端狹窄，密被剛毛。

雄性土鱉蟲(幼蟲)觸角：顏色為紅棕色，觸角粗壯，每節(jié)長度較其他品種短，且近端與遠端近等寬，幾乎無剛毛。

冀地鱉觸角：顏色為紫黑色，每節(jié)觸角近端較遠端略狹窄，幾乎無剛毛(見圖9、圖10)。

圖9 土鱉蟲與其混淆品觸角微性狀鑒別特征圖(體視顯微鏡)Fig.9 Identification characteristics of the antennae microcharacters of tubie and its confounder (stereoscopic microscope)

圖10 土鱉蟲與其混淆品觸角微性狀鑒別特征圖(生物顯微鏡)Fig.10 Identification characteristics of antennae microcharacters of tubie and its confounders (biological microscope)

2.2.2.5 土鱉蟲與其混淆品單眼間距與復眼間距比例、復眼、單眼微性狀區(qū)別

地鱉單眼間距與復眼間距比例、復眼、單眼：單眼間距與復眼間距近等長，復眼紫紅色，單眼黃色。

金邊土鱉蟲單眼間距與復眼間距比例、復眼、單眼：單眼間距狹于復眼間距，復眼紫紅色與黑色相間，單眼橙黃色。

雄性土鱉蟲(成蟲)土鱉蟲單眼間距與復眼間距比例、復眼、單眼：單眼間距明顯寬于復眼間距，單眼為透明橙黃色，且明顯向外突出。

雄性土鱉蟲(幼蟲)土鱉蟲單眼間距與復眼間距比例、復眼、單眼：單眼間距與復眼間距近等長，復眼紫紅色，單眼黃白色。

冀地鱉單眼間距與復眼間距比例、復眼、單眼：單眼間距狹于復眼間距，復眼黑色與黃棕色相間，單眼淡黃白色見(圖11、圖12、圖13)。

表2 土鱉蟲與其混淆品單眼間距與復眼間距比例、復眼、單眼檢索表

圖11 土鱉蟲與其混淆品單眼與復眼間距微性狀鑒別Fig.11 Identification of microcharacters of monocular and compound eye spacing between triton and its confusions

2.2.2.6 土鱉蟲與其混淆品前足脛節(jié)、跗節(jié)、爪微性狀區(qū)別

地鱉前足脛節(jié)、跗節(jié)、爪：脛節(jié)具9根刺，其中端刺8根，中刺1根。跗節(jié)無跗節(jié)墊，密被刺與剛毛；跗節(jié)無跗墊、頂端為爪，爪無爪墊與附屬物。

金邊土鱉蟲前足脛節(jié)、跗節(jié)、爪：脛節(jié)具多根刺。跗節(jié)具跗墊，第一跗節(jié)有一凹陷縱溝，且被少數(shù)剛毛；跗節(jié)頂端為爪，爪具中墊與爪墊。

圖12 土鱉蟲與其混淆品復眼微性狀鑒別特征Fig.12 Identification characteristics of microcharacters of compound eye of confoundation triton and its confounders

圖13 土鱉蟲與其混淆品單眼微性狀鑒別特征Fig.13 Identification characteristics of monocular microcharacters of tubie and its confounders

雄性土鱉蟲(成蟲)前足脛節(jié)、跗節(jié)、爪：脛節(jié)具8根刺，其中端刺7根，中刺1根；被刺與剛毛；跗節(jié)具跗墊且腹面具兩列小刺、頂端為爪，爪具中墊。

雄性土鱉蟲(幼蟲)前足脛節(jié)、跗節(jié)、爪：脛節(jié)具9根刺，其中端刺8根，中刺1根。跗節(jié)無跗節(jié)墊，密被刺與剛毛。

冀地鱉前足脛節(jié)、跗節(jié)、爪：顏色為紫黑色。脛節(jié)具9根刺，其中端刺8根，中刺1根。跗節(jié)無跗節(jié)墊，密被顆粒狀短刺與剛毛；跗節(jié)無跗墊、頂端為爪，爪無爪墊與附屬物(見圖14、圖15、圖16)。

表3 土鱉蟲與其混淆品前足脛節(jié)、跗節(jié)、爪檢索表

圖14 土鱉蟲與其混淆品前足脛節(jié)刺微性狀鑒別特征Fig.14 Identification characteristics of spines of the tibia segment of the forefoot of tubie and its confoundations

2.2.2.7 土鱉蟲與其混淆品尾須微性狀區(qū)別

地鱉尾須：扁平圓錐形。顏色為紅棕色，密被剛毛，具顆粒狀附屬物且附屬物頂端具小孔。

金邊土鱉蟲尾須：圓錐形。顏色為紫紅色，邊緣微黃色且具翅狀。被稀疏剛毛與圓點狀凹陷。

雄性土鱉蟲(成蟲)尾須：圓錐形。顏色為黃色，密被剛毛。

雄性土鱉蟲(幼蟲)尾須：圓錐形。顏色為紫紅色，密被剛毛。

冀地鱉尾須：圓錐形。顏色為紫黑色，密被剛毛與短刺(見圖17、圖18)。

圖15 土鱉蟲與其混淆品跗節(jié)微性狀鑒別特征Fig.15 Identification characteristics of the tarsus microcharacters of triton and its confusional products

圖16 土鱉蟲與其混淆品爪微性狀鑒別特征Fig.16 Identification characteristics of microcharacters of soil turtle and its confusional claw

表4 土鱉蟲與其混淆品尾須檢索表

圖17 土鱉蟲與其混淆品尾須微性狀鑒別特征(體視顯微鏡)Fig.17 Identification characteristics of tail whisker microcharacters of tubie and its confounders(stereoscopic microscope)

圖18 土鱉蟲與其混淆品尾須微性狀鑒別特征(生物顯微鏡)Fig.18 Identification characteristics of tail whisker microcharacters of tubie and its confusions (biological microscope)

2.2.2.8 土鱉蟲與其混淆品背甲、腹甲剛毛微性狀區(qū)別

地鱉背甲、腹甲剛毛：紅棕色。密被短刺與剛毛。

金邊土鱉蟲背甲、腹甲剛毛：紅棕色。被稀疏剛毛，體表密被圓點狀凹陷。

雄性土鱉蟲(成蟲)背甲、腹甲剛毛：紅棕色。密被剛毛，具少量刺。

雄性土鱉蟲(幼蟲)背甲、腹甲剛毛：紅棕色。密被短刺與剛毛。

冀地鱉背甲、腹甲剛毛：紫黑色。被稀疏剛毛，且有顆粒狀凸起(見圖19、圖20)。

圖19 土鱉蟲與其混淆品背甲剛毛微性狀鑒別特征Fig.19 Identification characteristics of the setae microcharacters of the soil turtle and its confounders

圖20 土鱉蟲與其混淆品腹甲剛毛微性狀鑒別特征Fig.20 Identification characteristics of the setae microcharacters of euonychus and its confounders

3 結論

土鱉蟲為臨床常用中藥，目前市場價格約為35元/kg，其中摻有雄性土鱉蟲，而雄性土鱉蟲不作為藥用；課題組調(diào)查發(fā)現(xiàn)，有商家以金邊土鱉蟲充當冀地鱉，價格高達200元/kg。該不良行為不僅造成了品種的混亂，而且還給市場帶來了嚴重的負面影響。

土鱉蟲為節(jié)肢類動物，在市場流通中，蟲體足部易脫落，給性狀鑒別帶來了很大的不便，若混淆品脫落的足部摻入土鱉蟲中，將很難鑒別分類，而微性狀鑒別法在這一方面有很好的突破，可快速的鑒別藥材的易碎部位。

通過本次實驗微性狀的鑒別研究，土鱉蟲的微性狀鑒別體系進一步完善，同時也可以通過口器、腹背板邊緣、肛上板、生殖板、觸角、單眼間距與復眼間距比例、單眼、復眼、前足脛節(jié)、跗節(jié)、爪、尾須、背甲及腹甲剛毛等方法區(qū)分出不同品種土鱉蟲，以及與偽品的區(qū)別。結果顯示，微性狀鑒別法，可以用于節(jié)肢類動物的鑒別，實驗表明土鱉蟲與其混淆品有非常明顯的差異。