• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    代謝組學(xué)在農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)檢測(cè)分析中的應(yīng)用

    2019-10-10 06:02:32許彥陽(yáng)姚桂曉劉平香趙潔王昕璐孫君茂錢永忠
    關(guān)鍵詞:代謝物組學(xué)質(zhì)譜

    許彥陽(yáng),姚桂曉,3,劉平香,趙潔,王昕璐,孫君茂,錢永忠

    代謝組學(xué)在農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)檢測(cè)分析中的應(yīng)用

    許彥陽(yáng)1,姚桂曉1,3,劉平香1,趙潔1,王昕璐1,孫君茂2,錢永忠1

    (1中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100081;2農(nóng)業(yè)農(nóng)村部食物與營(yíng)養(yǎng)發(fā)展研究所, 北京 100081;3西安理工大學(xué)印刷包裝與數(shù)字媒體學(xué)院,西安 710048)

    科學(xué)檢測(cè)和分析農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)對(duì)提升優(yōu)質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)水平具有重要作用。由于農(nóng)產(chǎn)品中營(yíng)養(yǎng)成分組成復(fù)雜,已有的分析方法只能針對(duì)已知營(yíng)養(yǎng)素的濃度、功能等進(jìn)行分析,無(wú)法對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中存在的大量其他功能性活性物質(zhì)進(jìn)行分析鑒定。代謝組學(xué)技術(shù)通過(guò)高通量化學(xué)分析技術(shù)對(duì)生物樣品中的小分子代謝產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量分析,在具有特殊營(yíng)養(yǎng)功能的小分子物質(zhì)分析中具有突出優(yōu)勢(shì)。代謝組學(xué)技術(shù)的引入,為農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)成分表征及差異性分析,產(chǎn)地溯源及真?zhèn)舞b別,生長(zhǎng)儲(chǔ)藏過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)成分變化規(guī)律揭示,營(yíng)養(yǎng)功能成分作用機(jī)制研究等提供了新方法,也為膳食結(jié)構(gòu)的優(yōu)化調(diào)整提供了新策略。本文對(duì)代謝組學(xué)研究方法的新進(jìn)展,包括樣品制備、代謝物分析鑒定以及數(shù)據(jù)分析等進(jìn)行了綜述,總結(jié)了代謝組學(xué)技術(shù)在農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)成分表征及差異性分析、產(chǎn)地溯源及真?zhèn)舞b別、生長(zhǎng)儲(chǔ)藏過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)成分變化規(guī)律以及營(yíng)養(yǎng)功能成分作用機(jī)制等方面的應(yīng)用,旨在為我國(guó)農(nóng)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展提供思路。在樣品制備方法方面,首先通過(guò)快速改變樣品所處的環(huán)境條件,如添加強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或液氮冷凍等技術(shù)終止新陳代謝相關(guān)酶的活性。然后針對(duì)代謝物的極性,選擇不同的提取溶劑,從而獲得較高的提取率。在樣品分析方法方面,核磁共振、色譜質(zhì)譜和毛細(xì)管電泳質(zhì)譜等技術(shù)得到了廣泛地應(yīng)用。其中,色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)將色譜的有效分離和質(zhì)譜的準(zhǔn)確定量相結(jié)合,已經(jīng)成為代謝組學(xué)中使用最廣泛的分析技術(shù)。在數(shù)據(jù)處理及分析方面,無(wú)監(jiān)督分析中的主成分分析和有監(jiān)督分析中的正交偏最小二乘法-判別分析是目前應(yīng)用最多的數(shù)據(jù)分析方法。通過(guò)通路分析軟件的富集分析和拓?fù)浞治觯梢悦鞔_與代謝物差異相關(guān)性最高的代謝通路,對(duì)差異代謝產(chǎn)物的機(jī)制進(jìn)行分析和解釋。在農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)成分分析應(yīng)用方面,通過(guò)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中初生代謝產(chǎn)物及次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行全面表征,形成農(nóng)產(chǎn)品獨(dú)特的代謝指紋圖譜,從而實(shí)現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)成分的差異性分析;通過(guò)非特定目標(biāo)物的檢測(cè)和無(wú)監(jiān)督分析方法,實(shí)現(xiàn)不同產(chǎn)地農(nóng)產(chǎn)品的組間差異鑒別和差異化合物篩選;通過(guò)農(nóng)產(chǎn)品生長(zhǎng)過(guò)程中關(guān)鍵成分的消長(zhǎng)規(guī)律及合成機(jī)理分析,指導(dǎo)最佳收獲期;通過(guò)體液代謝譜和生物標(biāo)志物的檢測(cè),系統(tǒng)研究營(yíng)養(yǎng)功能成分與生物體代謝之間的交互作用,為營(yíng)養(yǎng)功能成分作用機(jī)制研究及膳食指導(dǎo)提供有價(jià)值的信息。

    代謝組學(xué);農(nóng)產(chǎn)品;營(yíng)養(yǎng);品質(zhì)

    0 引言

    當(dāng)前,我國(guó)進(jìn)入消費(fèi)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)型升級(jí)和供給側(cè)結(jié)構(gòu)性改革的關(guān)鍵時(shí)期,面對(duì)“吃飽”到“吃好”的需求轉(zhuǎn)變,需要發(fā)展高品質(zhì)、高營(yíng)養(yǎng)的農(nóng)產(chǎn)品[1-2]。農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)一般根據(jù)產(chǎn)品中營(yíng)養(yǎng)素的種類、含量以及營(yíng)養(yǎng)素功能進(jìn)行判定。農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)素[3]主要包括蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、維生素、礦物質(zhì)元素、膳食纖維、水及其他各類微量功能活性成分等8大類,通過(guò)對(duì)8類物質(zhì)成分含量和組分的檢測(cè),建立食用農(nóng)產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù),從而評(píng)價(jià)農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量。同時(shí),針對(duì)不同農(nóng)產(chǎn)品中營(yíng)養(yǎng)素的特定功能性成分,如不飽和脂肪酸類、多酚類、黃酮類、多糖類、多肽類等物質(zhì)進(jìn)行降血糖、降血壓、抗衰老、抗動(dòng)脈硬化等功能研究,評(píng)價(jià)農(nóng)產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)功能。然而,農(nóng)產(chǎn)品中營(yíng)養(yǎng)成分組成復(fù)雜,已有的分析方法只能針對(duì)已知營(yíng)養(yǎng)素的濃度、功能等進(jìn)行分析,無(wú)法對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中存在的大量其他功能性活性物質(zhì)進(jìn)行分析鑒定。

    代謝組學(xué)以分子量在1 000以下的小分子為研究對(duì)象,通過(guò)對(duì)動(dòng)態(tài)多參數(shù)代謝應(yīng)答反應(yīng)進(jìn)行定量測(cè)量,研究生物體內(nèi)源性和外源性代謝物整體構(gòu)成及代謝途徑變化的新技術(shù)[4-6],在疾病研究[7]、藥物開(kāi)發(fā)[8]、毒性評(píng)價(jià)[9]、環(huán)境科學(xué)[10]等領(lǐng)域已經(jīng)得到較為廣泛的應(yīng)用。由于代謝組學(xué)可以在全景角度揭示生物系統(tǒng)、生理狀態(tài)等優(yōu)勢(shì),近年來(lái)被逐漸應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)研究。通過(guò)代謝組學(xué)分析,為農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)成分表征及差異性分析,產(chǎn)地溯源及真?zhèn)舞b別,生長(zhǎng)儲(chǔ)藏過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)成分變化規(guī)律揭示,營(yíng)養(yǎng)功能成分作用機(jī)制研究等提供新方法[11-12],也為膳食結(jié)構(gòu)的優(yōu)化調(diào)整提供新策略。

    1 代謝組學(xué)研究進(jìn)展

    代謝組學(xué)技術(shù)根據(jù)研究目的和研究層次不同分為非靶向代謝組學(xué)和靶向代謝組學(xué)[13]。非靶向代謝組學(xué)是對(duì)生物系統(tǒng)中代謝物進(jìn)行全面系統(tǒng)地分析,盡可能多地定性和相對(duì)定量生物體系中的代謝物,獲取大量數(shù)據(jù)并對(duì)其進(jìn)行處理,進(jìn)而分析獲得差異性代謝物;靶向代謝組學(xué)通常針對(duì)某個(gè)代謝通路或已知的某些特定代謝物,進(jìn)行高通量檢測(cè)和定量分析,主要用于驗(yàn)證差異性代謝物。應(yīng)用代謝組學(xué)技術(shù)開(kāi)展農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)檢測(cè)分析研究主要包括樣品的收集和制備,代謝物分離、檢測(cè)和鑒定,數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析等過(guò)程。

    1.1 代謝組學(xué)樣品制備方法

    樣品的收集和制備是代謝組學(xué)分析的基礎(chǔ),主要包括樣品采集、淬滅、儲(chǔ)存、提取等[14-15],旨在迅速、有效終止樣品新陳代謝反應(yīng),最大限度地去除樣本中雜質(zhì)(如蛋白質(zhì)、糖類、脂肪等),同時(shí)能較為完整地保留樣品中的整體代謝產(chǎn)物或特異性目標(biāo)代謝產(chǎn)物[16]。

    代謝組學(xué)技術(shù)的研究對(duì)象包括組織、器官、提取液等,分析對(duì)象種類多,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)差異大,要獲得穩(wěn)定可重復(fù)的試驗(yàn)結(jié)果,需考慮試驗(yàn)?zāi)康摹x器平臺(tái)、分析方法等要求,選擇合適的樣品處理方法。目前,主要通過(guò)快速改變樣品所處的環(huán)境條件,如添加強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或液氮冷凍等手段終止新陳代謝相關(guān)酶的活性。采用的前處理技術(shù)主要包括超聲波提取[17]、固相萃取[18]、固相微萃取[19]、分散液液微萃取[20]、超臨界流體萃取[21]等,使用的提取劑主要包括甲醇、乙醇、乙腈、異丙醇、氯仿、水以及混合溶劑等。Vargas等[22]比較了不同萃取劑、不同溫度和運(yùn)輸條件對(duì)代謝物提取效果的影響,結(jié)果顯示,提取溶劑對(duì)代謝產(chǎn)物具有顯著影響。

    代謝物的極性不同,提取溶劑也應(yīng)不同。如極性代謝物的提取溶劑主要為含水的有機(jī)溶劑,如甲醇/水溶液、乙腈/水溶液、氯仿/甲醇/水溶液等[23]。脂溶性代謝物常用的提取溶劑主要有氯仿、甲基叔丁醚和二氯甲烷等[23-24],獲得較高提取率的關(guān)鍵是氯仿/甲醇/水的比例。BLIGH等[25]在FOLCH等[26]提取方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了進(jìn)一步的優(yōu)化,指出提取鱈魚(yú)組織中脂質(zhì)的氯仿/甲醇/水的最佳比例為1﹕2﹕0.8。鑒于氯仿具有高毒性,作為其替代物的二氯甲烷逐漸被用于脂溶性代謝產(chǎn)物的提取[27]。此外,使用氯仿/甲醇法提取脂質(zhì)代謝產(chǎn)物時(shí),目標(biāo)物位于下方的氯仿層,操作時(shí)需穿過(guò)上方水層,操作不方便。MATYASH等[28]基于甲基叔丁醚密度小于水的原理,提出了以甲基叔丁醚代替氯仿或二氯甲烷提取脂質(zhì)的方法,使得脂質(zhì)所在的甲基叔丁醚層位于水層上方,簡(jiǎn)化了脂質(zhì)提取的操作過(guò)程。

    生物體內(nèi)的部分代謝物極性強(qiáng)、揮發(fā)性低,如氨基酸、脂肪酸、胺類、糖類和核苷酸類物質(zhì),前處理過(guò)程中需要進(jìn)行化學(xué)衍生化,常用的衍生化方法包括硅烷化、甲酯化、烷基化、?;萚29]。另外,代謝物的基質(zhì)不同,所選擇的提取方法和提取試劑也各不相同,在實(shí)際操作過(guò)程中應(yīng)結(jié)合基質(zhì)特點(diǎn),妥善選擇前處理方法,以達(dá)到最佳提取效果。在非靶向代謝組學(xué)研究中,通常需要制備質(zhì)控(QC)樣品,保證分析數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性和可靠性。

    1.2 代謝組學(xué)分析方法

    代謝組學(xué)基于高通量分析技術(shù)對(duì)生物樣品中小分子代謝產(chǎn)物的組成、含量及其變化進(jìn)行定性和定量分析,通過(guò)代謝物信息與生物體生理變化的關(guān)聯(lián)分析,尋找生物標(biāo)志物。樣品中的成分復(fù)雜多樣,有效分離并準(zhǔn)確鑒定各種物質(zhì)是代謝組學(xué)研究的前提。目前,代謝組學(xué)主要的分析技術(shù)包括核磁共振、色譜質(zhì)譜和毛細(xì)管電泳質(zhì)譜等。

    1.2.1 核磁共振技術(shù) 核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)技術(shù)是指核磁矩不為零的原子核,在外磁場(chǎng)的作用下,共振吸收某一特定頻率的電磁波。通過(guò)能量吸收曲線分析,判斷該原子在分子中所處的位置及相對(duì)數(shù)目,從而實(shí)現(xiàn)定量分析和結(jié)構(gòu)分析。NMR技術(shù)可以對(duì)樣品實(shí)現(xiàn)無(wú)偏性分析,具有前處理較少、不破壞樣品結(jié)構(gòu)和性質(zhì)等優(yōu)點(diǎn),能夠?qū)ν旰媒M織、生物液等進(jìn)行代謝成分分析,并確定代謝物結(jié)構(gòu)式[30]。適用于農(nóng)產(chǎn)品中脂肪、多元醇類、有機(jī)酸、糖類等營(yíng)養(yǎng)成分的檢測(cè)分析。應(yīng)用最為廣泛的一維氫譜核磁共振(1H-NMR)對(duì)含氫代謝產(chǎn)物具有普適性,具有無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)品、無(wú)損等特點(diǎn),可得到豐富的樣品信息,在農(nóng)產(chǎn)品組分分析、產(chǎn)品質(zhì)量鑒別、質(zhì)量控制等方面應(yīng)用廣泛[31-32]。許茜等[33]采用NOESY脈沖序列對(duì)14個(gè)不同來(lái)源的固體動(dòng)物膠樣品進(jìn)行原料來(lái)源鑒定,結(jié)果顯示,1H-NMR技術(shù)能夠區(qū)分不同樣品的來(lái)源,判別正確率達(dá)91.67%。對(duì)復(fù)雜樣品的代謝物鑒定需結(jié)合二維核磁共振波譜,如總相干轉(zhuǎn)移光譜(total correlation spectroscopy,TOCSY)[34],TOCSY可以解決重疊峰的問(wèn)題,能進(jìn)一步提高分辨率[35]。另外,核磁共振技術(shù)與色譜結(jié)合使用可有效提高分析的靈敏度,如液相核磁共振聯(lián)用(LC-NMR)解決了NMR中干擾過(guò)多等問(wèn)題,有效提高了分析的檢測(cè)限[36]。BRAUNBERGER等[37]綜合液相質(zhì)譜技術(shù)、液相核磁共振聯(lián)用和離線NMR技術(shù),分析了茅膏菜中黃酮類和鞣花酸衍生物,并解析了13種化合物的結(jié)構(gòu)。

    1.2.2 質(zhì)譜分析技術(shù) 色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)將色譜的有效分離和質(zhì)譜的準(zhǔn)確定量相結(jié)合,已經(jīng)成為代謝組學(xué)中使用最廣泛的分析技術(shù)。經(jīng)過(guò)近年來(lái)的發(fā)展,目前,質(zhì)譜分析技術(shù)主要包括四級(jí)桿質(zhì)譜(quadrupole mass spectrometer, QMS)、三重四級(jí)桿質(zhì)譜(triple quadrupole mass spectrometer,QQQ)、飛行時(shí)間質(zhì)譜(time-of-flight mass spectrometry,TOF-MS)、四級(jí)桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(quadrupole time-of-flight mass spectrometry,Q-TOF-MS)、離子阱質(zhì)譜(ion trap mass spectrometer,ITMS)等,所使用的電離源主要包括電噴霧電離源(electron spray ionization,ESI)[38]、大氣壓化學(xué)電離源(atmospheric-pressure chemical ionization,APCI)、基質(zhì)輔助激光解析電離源(matrix- assisted laser desorption ionization,MALDI)[39]、大氣壓光電離源(atmospheric-pressure photoionization,APPI)、質(zhì)子轉(zhuǎn)移反應(yīng)器(proton transfer reaction,PTR)[40]、實(shí)時(shí)直接分析(direct analysis in real time,DART)[41]等。相較于NMR技術(shù),質(zhì)譜的靈敏度更高,但穩(wěn)定性不足,在不同儀器甚至不同日期獲得的數(shù)據(jù)之間存在差異,為保證結(jié)果的穩(wěn)定,需采用標(biāo)準(zhǔn)化的操作步驟[42]。

    GC-MS是指氣化后的樣品根據(jù)各組分的熔沸點(diǎn)、吸附性及極性不同在色譜柱中實(shí)現(xiàn)分離,在質(zhì)譜系統(tǒng)中經(jīng)電離產(chǎn)生具有不同質(zhì)荷比的離子后進(jìn)行分析的技術(shù)。GC-MS技術(shù)具有分離能力強(qiáng),靈敏度高,分析速度快,操作方便,標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)成熟等優(yōu)點(diǎn),通常用于揮發(fā)性、半揮發(fā)性、低分子量和熱穩(wěn)定化合物的鑒定和定量檢測(cè)。適用于農(nóng)產(chǎn)品中精油、酯類、類十二烷酸、類胡蘿卜素、類黃酮、脂質(zhì)等極性較小物質(zhì)的分析。相對(duì)于NMR技術(shù),GC-MS分析技術(shù)樣品前處理較為復(fù)雜,部分代謝物在分析前需要衍生化處理,以增強(qiáng)揮發(fā)性[43]。MARI等[44]使用甲硅烷基化混合物,經(jīng)兩步衍生化后,對(duì)蕨麻植物樣品中的53種代謝物進(jìn)行了分析。也有學(xué)者[45]采用甲氧基胺化/三甲基硅基化衍生化后,分析了乙烯利處理后甜櫻桃代謝譜變化規(guī)律。為同時(shí)分析盡可能多的代謝物,具有較高分離能力和靈敏度的質(zhì)譜分析技術(shù)被逐漸應(yīng)用于組學(xué)分析,如WONG等[46]采用二維氣相色譜飛行時(shí)間質(zhì)譜(GC- GC-TOF/MS)對(duì)桉樹(shù)葉油代謝譜進(jìn)行了全面分析。

    LC-MS是根據(jù)樣品中各組分在液相色譜柱中保留時(shí)間不同實(shí)現(xiàn)分離,在質(zhì)譜系統(tǒng)中經(jīng)離子源電離后產(chǎn)生具有不同質(zhì)荷比的離子后進(jìn)行分析的技術(shù)。LC-MS技術(shù)可以在常溫下實(shí)現(xiàn)分離,相較于NMR靈敏度低、GC-MS樣品處理較復(fù)雜等問(wèn)題,LC-MS更靈敏,不受試樣揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制,樣品前處理簡(jiǎn)單,可對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中糖類、氨基酸、多酚、萜類化合物等極性較強(qiáng)的代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析[47]。GARCIA等[38]基于UPLC-ESI-QToF-MS建立了非靶向的分析方法,對(duì)生菜代謝譜進(jìn)行了分析。此外,基于HPLC-QToF-MS的非靶向技術(shù)在雞蛋蛋黃[48]及大蒜[49]小分子物質(zhì)分析方面也得到了很好的應(yīng)用。但LC-MS沒(méi)有綜合性數(shù)據(jù)庫(kù),給后期代謝物的分析造成了一定的困難與挑戰(zhàn)。

    毛細(xì)管電泳質(zhì)譜(capillary electrophoresis–mass spectrometry,CE-MS)[50]是基于樣品中各組分間淌度和分配行為差異實(shí)現(xiàn)分離,經(jīng)質(zhì)譜系統(tǒng)中電離源電離產(chǎn)生不同質(zhì)荷比的離子,從而實(shí)現(xiàn)離子型化合物的分析。CE-MS技術(shù)能夠檢測(cè)離子型化合物,在含氨基化合物等復(fù)雜基質(zhì)食品分析中有很大優(yōu)勢(shì),常用于氨基酸類物質(zhì)的分析。CE-MS能夠同時(shí)測(cè)定丁醇衍生后的6種氨基酸(鳥(niǎo)氨酸、丙氨酸、γ-氨基丁酸、異亮氨酸、瓜氨酸和焦谷氨酸),該方法已成功應(yīng)用于大豆油、橄欖油摻假分析[51]。

    目前,代謝組學(xué)的研究大部分依賴成本相對(duì)較高的高分辨質(zhì)譜或核磁技術(shù),但LAN等[52]成功開(kāi)發(fā)了HPLC-UV技術(shù),分析了不同批次草藥提取物含量,該方法簡(jiǎn)單、廉價(jià),可以作為農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)成分分析的初步方法。由于農(nóng)產(chǎn)品代謝物種類多,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)差異大,僅采用單一分析手段很難實(shí)現(xiàn)代謝物的全景定性及定量分析,可采用多種分析手段,取長(zhǎng)補(bǔ)短,盡可能全面地覆蓋農(nóng)產(chǎn)品代謝物。

    1.3 代謝組學(xué)的數(shù)據(jù)處理及分析

    在代謝組學(xué)分析中,代謝物數(shù)據(jù)量大、樣本分析產(chǎn)生的數(shù)據(jù)復(fù)雜,需要能自動(dòng)、無(wú)歧視分析原始數(shù)據(jù)文件[53]。為使數(shù)據(jù)更簡(jiǎn)潔、分析簡(jiǎn)便,儀器分析獲得的數(shù)據(jù)通常需要預(yù)處理,主要包括信號(hào)濾噪、代謝特征提取、色譜與質(zhì)譜匹配、缺失值過(guò)濾與補(bǔ)值、信號(hào)歸一化、化合物定性定量等步驟[54-55]。經(jīng)過(guò)預(yù)處理后的代謝組學(xué)數(shù)據(jù)需要借助數(shù)據(jù)分析軟件實(shí)現(xiàn)單變量分析和多元變量等統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)分析方法包括無(wú)監(jiān)督分析和有監(jiān)督分析兩種,其中無(wú)監(jiān)督分析包括主成分分析(principal component analysis,PCA)[56]、聚類分析(hierarchical cluster analysis,HCA)[57]等。由于無(wú)監(jiān)督分析法不能忽略組內(nèi)誤差,不利于組間差異的鑒別,需要進(jìn)一步結(jié)合有監(jiān)督分析突出組間差異;有監(jiān)督分析主要包括偏最小二乘分析(partial least squares discrimination analysis,PLS-DA)[58]、正交偏最小二乘法-判別分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)等。數(shù)據(jù)分析時(shí)也可以通過(guò)數(shù)據(jù)分析軟件特有的分析功能揭示代謝物上/下調(diào)情況、變量權(quán)重(variable importance,VIP值)和顯著性變化,經(jīng)多種組合數(shù)據(jù)分析后,可以揭示不同組別樣本中小分子代謝物的差異,篩選獲得差異代謝物。隨著組學(xué)技術(shù)的發(fā)展,多家儀器公司結(jié)合數(shù)據(jù)采集軟件開(kāi)發(fā)了多種數(shù)據(jù)分析軟件,如Agilent公司的MPP軟件、Waters公司的QI軟件、SCIEX公司的Lipid View軟件等[59-61]。上述數(shù)據(jù)分析軟件的成功研發(fā)給從事代謝組學(xué)研究的學(xué)者們提供了便利條件,簡(jiǎn)化了數(shù)據(jù)分析工作。

    通過(guò)組學(xué)軟件篩選出的差異代謝物需要進(jìn)一步借助通路分析軟件、網(wǎng)站或大量相關(guān)文獻(xiàn),實(shí)現(xiàn)生物標(biāo)志物的重要性和功能性解讀,了解其在生命活動(dòng)過(guò)程中參與的代謝通路,繼而進(jìn)一步為物質(zhì)靶點(diǎn)分析、營(yíng)養(yǎng)功能評(píng)價(jià)等提供參考依據(jù)[62]。HMDB[63]、KEGG、METLIN[64]、NIST[65]等數(shù)據(jù)庫(kù)是常用的代謝物結(jié)構(gòu)鑒定和代謝通路分析的數(shù)據(jù)庫(kù)。我國(guó)學(xué)者WANG等[66]也開(kāi)發(fā)了代謝途徑延伸(MPE)的方法快速表征代謝組學(xué)生物標(biāo)志物,即通過(guò)已知的代謝途徑連接未知的代謝物到特定的核心化合物,然后通過(guò)定量測(cè)定匹配代謝物的MS/MS譜進(jìn)行驗(yàn)證,獲得93種生物標(biāo)志物(95%覆蓋)的結(jié)構(gòu)后,通過(guò)MS/MS匹配確認(rèn)獲得66種代謝物(70%覆蓋),快速闡明了肉堿的靶向代謝網(wǎng)絡(luò)。

    2 代謝組學(xué)在農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)檢測(cè)分析中的應(yīng)用

    代謝組學(xué)能在生物學(xué)水平上檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中小分子代謝產(chǎn)物的差別,定性與定量分析不同品種、不同產(chǎn)地和不同生長(zhǎng)儲(chǔ)藏條件下農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)成分的差異。同時(shí),經(jīng)過(guò)非靶向代謝組學(xué)全面系統(tǒng)分析和靶向代謝組學(xué)的確證后,新的生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步推動(dòng)了代謝組學(xué)在產(chǎn)地溯源、作用機(jī)制、育種策略以及種養(yǎng)方式等方面的應(yīng)用,見(jiàn)表1。

    2.1 農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)成分表征及差異性分析

    不同農(nóng)產(chǎn)品具有不同的特征營(yíng)養(yǎng)成分,代謝組學(xué)技術(shù)可對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中初生代謝產(chǎn)物及次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行全面表征,形成農(nóng)產(chǎn)品獨(dú)特的代謝指紋圖譜。ZHU等[67]采用廣泛靶向的LC-MS/MS分析方法,研究了442份成熟番茄果實(shí)果皮組織中代謝物,共發(fā)現(xiàn)了980個(gè)不同的代謝物。B?TTCHER等[68]采用LC/ESI-QTOF-MS技術(shù)對(duì)洋蔥中的低聚果糖、氨基酸、多肽、S-半胱氨酸、黃酮及皂苷類等極性及半極性成分進(jìn)行了全面的代謝輪廓分析。對(duì)葡萄代謝組的研究發(fā)現(xiàn),野生品種的葡萄花色苷及芪類化合物組成比雜交品種及歐亞種葡萄復(fù)雜,歐亞種葡萄果皮和種籽中原花青素含量更高[69]。意大利‘藍(lán)蟹’等3個(gè)品種代謝組學(xué)分析結(jié)果顯示,谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、龍蝦堿、乳酸、甜菜堿和?;撬岬?種代謝物含量具有顯著差異[70]。

    農(nóng)產(chǎn)品中代謝物種類及水平通常與其感官特征具有重要相關(guān)性,如番茄中鄰甲基苯乙酮、苯甲酮等揮發(fā)性成分對(duì)番茄氣味形成起關(guān)鍵作用[71],蕪菁中L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺與苦味呈負(fù)相關(guān),而金縷梅糖、麥芽糖和蘋果酸與苦味呈正相關(guān),異硫氰酸烯丙酯等芥子甙降解產(chǎn)物與“銳”度呈正相關(guān)[72]。此外,不同農(nóng)產(chǎn)品品種、不同組織及器官營(yíng)養(yǎng)成分不同,如不同品種蔓越莓[73]、樹(shù)莓[74]花青素的含量及水平,馬鈴薯皮和塊莖組織[75]、番茄果肉與種子[76]代謝物種類及水平均存在較大差異,借助代謝組學(xué)分析,可以獲得不同品種、組織及器官的營(yíng)養(yǎng)成分組成及含量,從而應(yīng)用于不同的農(nóng)產(chǎn)品加工和消費(fèi)。

    轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高了糧食產(chǎn)量,但由此而來(lái)的安全問(wèn)題引起廣泛爭(zhēng)論,代謝組學(xué)技術(shù)能在生物學(xué)水平上鑒別和篩選轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品代謝差異物,揭示轉(zhuǎn)基因帶來(lái)的本質(zhì)性變化以及各種非預(yù)期變異效應(yīng)[77]。RAO等[78]對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米與常規(guī)玉米中210種代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析,在考慮自然變異后發(fā)現(xiàn)4種差異代謝物。番茄經(jīng)基因修飾后氨基酸和多酚等物質(zhì)含量水平發(fā)生顯著性改變,其中山奈酚、桂皮素苷含量水平較對(duì)照組提高10倍以上[79]。非靶向代謝組學(xué)在考慮自然變異的情況下能為轉(zhuǎn)基因作物代謝產(chǎn)物分析提供技術(shù)手段。

    2.2 農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)地溯源及真?zhèn)舞b別

    農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)地來(lái)源是消費(fèi)者選擇食品的重要依據(jù),食品摻假等問(wèn)題引起了消費(fèi)者的廣泛關(guān)注。代謝組學(xué)技術(shù)在非特定目標(biāo)物的檢測(cè)方面有著其他方法無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì),有監(jiān)督分析方法可以有效減少同一產(chǎn)地農(nóng)產(chǎn)品的組內(nèi)誤差,實(shí)現(xiàn)不同產(chǎn)地農(nóng)產(chǎn)品的組間差異鑒別和差異化合物篩選,為農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)地溯源和真?zhèn)舞b別提供了重要技術(shù)手段[80-81]。ISABAL等[82]基于非靶向代謝組學(xué)方法分析了4種不同地理來(lái)源枸杞的化學(xué)成分區(qū)別,發(fā)現(xiàn)了蒙古枸杞中槲皮素、山奈酚糖苷、二咖啡酰奎寧酸和酚酸含量顯著高于其他地區(qū)的枸杞。對(duì)捷克、中國(guó)和西班牙3個(gè)國(guó)家的大蒜進(jìn)行代謝輪廓分析[83],獲得了蒜氨酸、PC(16﹕0/18﹕2)和精氨酸3種標(biāo)志性差異化合物。RITOTA等[84]采用高分辨率魔角旋轉(zhuǎn)核磁共振技術(shù)(HRMAS-NMR)及偏最小二乘法判別分析(PLS-DA)等多元數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法,成功實(shí)現(xiàn)意大利4個(gè)產(chǎn)地、2個(gè)品種大蒜(白皮蒜、紫皮蒜)的分類及溯源。CAMARGO[85]、VADALA[86]和SMITH等[87]也分別通過(guò)礦物質(zhì)元素及痕量金屬元素實(shí)現(xiàn)了大蒜不同產(chǎn)地的溯源。

    表1 代謝組學(xué)在農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)檢測(cè)分析中的應(yīng)用

    經(jīng)非靶向代謝組學(xué)篩查獲得差異代謝物后,靶向代謝組學(xué)可以對(duì)產(chǎn)品中的特異性指標(biāo)如氨基酸、揮發(fā)性成分等化合物成分進(jìn)行定量分析[88-89],進(jìn)一步提高模型鑒別能力。KLOCKMANN等[90]采用UPLC- QTOF-MS對(duì)來(lái)自德國(guó)、法國(guó)、意大利、土耳其和格魯吉亞共196個(gè)榛子進(jìn)行了產(chǎn)地溯源,篩選確定了20種關(guān)鍵差異代謝物(5種磷脂酰膽堿,3種磷脂酰乙醇胺,4種甘油二酯,7種三?;视秃挺?生育酚),PCA-LDA訓(xùn)練精度可達(dá)99.5%。隨后,對(duì)鑒定出的差異代謝物采用LC-ESI-QqQ-MS進(jìn)行了靶向分析[91],預(yù)測(cè)模型訓(xùn)練精度達(dá)到100%,交叉驗(yàn)證精度達(dá)到97%。

    2.3 農(nóng)產(chǎn)品生長(zhǎng)儲(chǔ)藏過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)成分變化規(guī)律

    農(nóng)產(chǎn)品不同生長(zhǎng)階段營(yíng)養(yǎng)成分存在較大差異,研究農(nóng)產(chǎn)品生長(zhǎng)過(guò)程中關(guān)鍵成分的消長(zhǎng)規(guī)律及合成機(jī)理,對(duì)于確定最佳收獲期和改善果蔬的保質(zhì)期具有重要意義。ZHANG等[92]對(duì)草莓生長(zhǎng)過(guò)程中的揮發(fā)性成分進(jìn)行了定性和定量分析,發(fā)現(xiàn)草莓成熟之前游離氨基酸含量逐漸下降,過(guò)熟后快速上升,涉及的代謝通路包括酯生物合成、三羧酸循環(huán)、莽草酸途徑和氨基酸代謝。對(duì)‘赤霞珠’和‘梅洛’2個(gè)不同葡萄品種在生長(zhǎng)、發(fā)育及成熟過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)成分變化規(guī)律及代謝途徑研究發(fā)現(xiàn),葡萄在坐果和顏色轉(zhuǎn)化期代謝物變化較大,且在果實(shí)成熟過(guò)程中,糖類和氨基酸呈現(xiàn)相反的變化趨勢(shì)[93]。農(nóng)產(chǎn)品在采后、儲(chǔ)藏過(guò)程中,營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)化或降解,對(duì)其營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)產(chǎn)生影響。OMS-OLIU等[94]鑒定發(fā)現(xiàn),甘露糖、檸檬酸、葡萄糖酸和酮-1-古洛糖酸等4種代謝產(chǎn)物與番茄采后階段密切相關(guān)。JOHNSON等[48]研究了不同儲(chǔ)藏時(shí)間蛋黃內(nèi)小分子代謝物的變化規(guī)律,確定膽堿為不同儲(chǔ)藏時(shí)間的差異代謝物,隨后靶向驗(yàn)證結(jié)果顯示,12周儲(chǔ)藏時(shí)間內(nèi)膽堿水平由6.8 μg?g-1上升至28.7 μg?g-1。

    此外,外界環(huán)境以及灌溉、施肥、管理措施等因素均會(huì)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的變化規(guī)律產(chǎn)生影響[95],借助代謝組學(xué)高通量檢測(cè)技術(shù)研究不同環(huán)境條件下農(nóng)產(chǎn)品的生物標(biāo)志物,可為農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)優(yōu)化提供科學(xué)的指導(dǎo)意見(jiàn)。我國(guó)西南地區(qū)在大豆收獲期溫度低,濕度大,持續(xù)降雨天氣易導(dǎo)致霉菌爆發(fā),DENG等[96]研究了豆莢、種皮和子葉對(duì)霉菌的抵抗機(jī)制,發(fā)現(xiàn)不同組織代謝輪廓存在差異,脯氨酸、賴氨酸和硫在子葉、種皮和豆莢代謝中發(fā)揮重要作用。

    2.4 農(nóng)產(chǎn)品中營(yíng)養(yǎng)功能成分作用機(jī)制及對(duì)代謝的影響

    代謝組學(xué)通過(guò)體液代謝譜和生物標(biāo)志物的檢測(cè),可以系統(tǒng)性地研究營(yíng)養(yǎng)功能成分與生物體代謝之間的交互作用[97],為營(yíng)養(yǎng)功能成分作用機(jī)制研究及膳食指導(dǎo)提供有價(jià)值的信息[98-99]。代謝組學(xué)為食藥兩用農(nóng)產(chǎn)品中功能成分作用機(jī)制研究提供了可靠便利的方法。LIU等[100]基于雄性C57BL/6小鼠模型,研究了生姜中姜精油(GEO)和檸檬醛的抗氧化能力和肝臟保護(hù)作用,采用HPLC-QTOF-MS分析技術(shù)對(duì)小鼠血清中的代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分析,結(jié)果顯示,服用姜精油(GEO)和檸檬醛后,因食用含酒精液體飲食而導(dǎo)致的D-葡糖醛酸-6,3-內(nèi)酯、甘油-3-磷酸、丙酮酸、石膽酸、2-吡啶酸和前列腺素E1等異常代謝產(chǎn)物可恢復(fù)至正常水平,上述代謝產(chǎn)物的改變主要涉及碳代謝、氨基酸代謝等代謝通路。枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)的降糖作用研究結(jié)果顯示[101],枸杞多糖干預(yù)一個(gè)月后,2型糖尿病模型大鼠血清中丙氨酸、胸腺嘧啶脫氧核苷酸含量有所上升,氨基酸代謝和核苷酸代謝通路的確認(rèn)為進(jìn)一步研究LBP的降糖作用機(jī)制提供了參考。除小鼠和大鼠模型外,也有學(xué)者采用細(xì)胞模型分析農(nóng)產(chǎn)品中營(yíng)養(yǎng)素的作用機(jī)制,如FUJIMURA等[102]基于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,研究了不同品種綠茶抑制肌球蛋白調(diào)節(jié)輕鏈(MRLC)磷酸化的活性,分析獲得了能夠顯著抑制MRLC磷酸化的品種,并發(fā)現(xiàn)多酚含量與其獨(dú)特的代謝特征和生物活性相關(guān)。

    此外,通過(guò)對(duì)膳食攝入后人體尿液、血液、糞便等生物樣本的研究,代謝組學(xué)可以了解機(jī)體對(duì)單一物質(zhì)或復(fù)雜物質(zhì)的代謝應(yīng)答[103-104],從而為全面考察農(nóng)產(chǎn)品攝入對(duì)機(jī)體代謝的影響提供參考[105-106]。邊會(huì)喜[107]基于小鼠模型研究了苦瓜及苦瓜的不同提取組分對(duì)降低血脂的作用,通過(guò)對(duì)尿液樣本的NMR代謝組分析識(shí)別了37種差異代謝物,確定了泛酸和輔酶a合成、淀粉和蔗糖代謝、三羧酸循環(huán)等3條主要作用途徑,發(fā)現(xiàn)苦瓜的正丁醇提取物和胰島素對(duì)小鼠體重及多種脂肪組織的抵抗效應(yīng)高于其他提取物。人體尿液樣品的代謝譜分析發(fā)現(xiàn)[108],適量飲用白茶使機(jī)體內(nèi)馬尿酸和檸檬酸上調(diào)、肌酐下降。1H-NMR光譜技術(shù)結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析研究素食、少肉、多肉3種飲食模式對(duì)人體代謝的影響顯示,肌酸、肉堿、乙酰肉堿和三甲胺-N-氧化物等代謝物在多肉飲食模式中含量較高,而對(duì)-羥基苯基在素食飲食模式下含量較高[109]。

    3 展望

    隨著組學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和完善,代謝組學(xué)技術(shù)將在農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)檢測(cè)分析中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用,該類技術(shù)在提升農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)的同時(shí)還有助于提升農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì),對(duì)農(nóng)產(chǎn)品育種策略、種養(yǎng)模式調(diào)整和膳食指導(dǎo)等方面具有重要指導(dǎo)意義。然而,當(dāng)前階段組學(xué)分析中存在樣品分析結(jié)果不穩(wěn)定、儀器分析范圍局限和數(shù)據(jù)庫(kù)不完善等諸多挑戰(zhàn),因此,如何優(yōu)化代謝組學(xué)的樣品前處理技術(shù),建立高通量的檢測(cè)技術(shù),如何使數(shù)據(jù)處理過(guò)程更加標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范,以便獲得更多更準(zhǔn)確的代謝物信息,在取樣方法、分析技術(shù)研發(fā)和數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建等方面,都需要進(jìn)一步的研究。另外,基于代謝組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)了許多農(nóng)產(chǎn)品中的生物標(biāo)志物,但對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中生物活性成分的作用機(jī)制研究還不夠系統(tǒng)和深入,需結(jié)合基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白組學(xué)等組學(xué)技術(shù),形成系統(tǒng)生物學(xué)數(shù)據(jù)鏈,通過(guò)多組學(xué)聯(lián)合分析技術(shù),從表型-通路等多角度解釋功能活性成分的作用機(jī)制,為膳食結(jié)構(gòu)的優(yōu)化調(diào)整提供技術(shù)手段。

    [1] 吳永寧. 我國(guó)食品安全科學(xué)研究現(xiàn)狀及"十三五"發(fā)展方向. 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全, 2015(6): 3-6.

    WU Y N. The research status of food safety science in China and the development direction in “13th Five-year Plan”., 2015(6): 3-6. (in Chinese)

    [2] 唐華俊. 中國(guó)營(yíng)養(yǎng)型農(nóng)業(yè)發(fā)展正當(dāng)其時(shí). 高科技與產(chǎn)業(yè)化, 2018, 266(7): 3.

    TANG H J. China's nutritious agriculture is developing at the right time., 2018, 266(7): 3. (in Chinese)

    [3] 韓娟, 孫君茂, 秦玉昌. 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與營(yíng)養(yǎng)功能風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究方向探討. 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全, 2016(2): 45-48.

    HAN J, SUN J M, QIN Y C. Discussion on the research direction of risk assessment in agricultural product quality and nutrition function., 2016(2): 45-48. (in Chinese)

    [4] 許國(guó)旺, 路鑫, 楊勝利. 代謝組學(xué)研究進(jìn)展. 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào), 2007, 29(6): 701-711.

    XU G W, LU X, YANG S L. Recent advances in metabonomics., 2007, 29(6): 701-711. (in Chinese)

    [5] NICHOLSON J K, LINDON J C, HOLMES E. ''Metabonomics'': understanding the metabolic responses of living systems to pathophysiological stimuli via multivariate statistical analysis of biological NMR spectroscopic data., 1999, 29(11): 1181-1189.

    [6] FIEHN O. Metabolomics–the link between genotypes and phenotypes., 2002, 48(1/2): 155-171.

    [7] COCCI P, MOSCONI G, PALERMO F A. Changes in expression of microRNA potentially targeting key regulators of lipid metabolism in primary gilthead sea bream hepatocytes exposed to phthalates or flame retardants., 2019, 209: 81-90.

    [8] EVERETT J R. Pharmacometabonomics in humans: A new tool for personalized medicine., 2015, 16(7): 737-754.

    [9] POTRATZ S, TARNOW P, JUNGNICKEL H, BAUMANN S, VON BERGEN M, TRALAU T, LUCH A. Combination of metabolomics with cellular assays reveals new biomarkers and mechanistic insights on xenoestrogenic exposures in MCF-7 Cells., 2017, 30(4): 883-892.

    [10] JIANG G T, KANG H Y, YU Y Q. Cross-platform metabolomics investigating the intracellular metabolic alterations of HaCaT cells exposed to phenanthrene., 2017, 1060: 15-21.

    [11] ZOTTI M, DE PASCALI S A, DEL COCO L, MIGONI D, CARROZZO L, MANCINELLI G, FANIZZI F P.1H NMR metabolomic profiling of the blue crab () from the Adriatic Sea (SE Italy): a comparison with warty crab (), and edible crab ()., 2016, 196: 601-609.

    [12] CHEN J P, CHAN P H, LAM C T W, LI Z G, LAM K Y C, YAO P, DONG T T X, LIN H Q, LAM H, TSIM K W K. Fruit of ziziphus jujuba (Jujube) at two stages of maturity: distinction by metabolic profiling and biological assessment., 2015, 63(2): 739-744.

    [13] CEVALLOS-CEVALLOS J M, REYES-DE-CORCUERA J I, ETXEBERRIA E, DANYLUK M D, RODRICK G E. Metabolomic analysis in food science: A review., 2009, 20(11): 557-566.

    [14] 趙春霞, 許國(guó)旺. 基于液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)的代謝組學(xué)分析方法新進(jìn)展. 分析科學(xué)學(xué)報(bào), 2014, 30(5): 761-766.

    ZHAO C X, XU G W. Progress of metabonomics technique based on liquid chromatography-mass spectrometry.,2014, 30(5): 761-766. (in Chinese)

    [15] 馬寧, 楊亞軍, 劉希望, 李劍勇. 基于液質(zhì)平臺(tái)代謝組學(xué)生物樣本的采集和制備. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2017, 37(6): 1193-1200.

    MA N, YANG Y J, LIU X W, LI J Y. Biological sample collection and preparation for metabonomic study with LC-MS platform.,2017, 37(6): 1193-1200. (in Chinese)

    [16] KNOLHOFF A M, CROLEY T R. Non-targeted screening approaches for contaminants and adulterants in food using liquid chromatography hyphenated to high resolution mass spectrometry., 2016, 1428: 86-96.

    [17] LIU Y Y, HU X L, BAO Y F, YIN D Q. Simultaneous determination of 29 pharmaceuticals in fish muscle and plasma by ultrasonic extraction followed by SPE-UHPLC-MS/MS., 2018, 41(10): 2139-2150.

    [18] ANDRADE-EIROA A, CANLE M, LEROY-CANCELLIERI V, CERDà V. Solid-phase extraction of organic compounds: A critical review (Part I)., 2016, 80: 641-654.

    [19] WANG C H, SU H, CHOU J H, HUANG M Z, LIN H J, SHIEA J. Solid phase microextraction combined with thermal-desorption electrospray ionization mass spectrometry for high-throughput pharmacokinetics assays., 2018, 1021: 60-68.

    [20] SHAMSIPUR M, YAZDANFAR N, GHAMBARIAN M. Combination of solid-phase extraction with dispersive liquid–liquid microextraction followed by GC–MS for determination of pesticide residues from water, milk, honey and fruit juice., 2016, 204: 289-297.

    [21] GIL-RAMIREZ A, AL-HAMIMI S, ROSMARK O, HALLGREN O, LARSSON-CALLERFELT A K, RODRíGUEZ-MEIZOSO I. Efficient methodology for the extraction and analysis of lipids from porcine pulmonary artery by supercritical fluid chromatography coupled to mass spectrometry., 2019, 1592: 173-182.

    [22] VARGAS L H G, NETO J C R, RIBEIRO J A D, RICCI-SILVA M E, SOUZA M T, RODRIGUES C M, OLIVEIRA A E, ABDELNUR P V. Metabolomics analysis of oil palm () leaf: evaluation of sample preparation steps using UHPLC-MS/MS., 2016, 12(10): 153.

    [23] 徐佳, 劉其南, 翟園園, 單進(jìn)軍, 張麗. 細(xì)胞代謝組學(xué)樣品前處理研究進(jìn)展. 中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào), 2018, 40(3): 418-425.

    XU J, LIU Q N, ZHAI Y Y, SHAN J J, ZHANG L. The Research development of sample pretreatment in cell metabolomics., 2018, 40(3): 418-425. (in Chinese)

    [24] WANG X, XU Y, SONG X, JIA Q, ZHANG X, QIAN Y, QIU J. Analysis of glycerophospholipid metabolism after exposure to PCB153 in PC12 cells through targeted lipidomics by UHPLC- MS/MS., 2019, 169: 120-127.

    [25] BLIGH E G, DYER W J. A rapid mmethord of total lipid extraction and purification., 1959, 37(8): 911.

    [26] FOLCH J, LEES M, SLOANE STANLEY G H. A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues., 1957, 226(1): 497-509.

    [27] SARAFIAN M H, GAUDIN M, LEWIS M R, MARTIN F P, HOLMES E, NICHOLSON J K, DUMAS M E. Objective set of criteria for optimization of sample preparation procedures for ultra-high throughput untargeted blood plasma lipid profiling by ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry., 2014, 86(12): 5766-5774.

    [28] MATYASH V, LIEBISCH G, KURZCHALIA T V, SHEVCHENKO A, SCHWUDKE D. Lipid extraction by methyl-tert-butyl ether for high-throughput lipidomics., 2008, 49(5): 1137-1146.

    [29] MOROS G, CHATZIIOANNOU A C, GIKA H G, RAIKOS N, THEODORIDIS G. Investigation of the derivatization conditions for GC-MS metabolomics of biological samples., 2017, 9(1): 53-65.

    [30] 焦宏. 核磁共振技術(shù)在代謝組學(xué)中的應(yīng)用. 山西醫(yī)藥雜志, 2011(4): 335-336.

    JIAO H. Application of nuclear magnetic resonance technology in metabolomics., 2011(4): 335-336. (in Chinese)

    [31] 王超, 涂文志, 王穆, 讓蔚清. 代謝組學(xué)分析技術(shù)及代謝物鑒定. 國(guó)際藥學(xué)研究雜志, 2010, 37(5): 355-360.

    WANG C, TU W Z, WANG M, RANG W Q. Metabonomics analytical technologies and metabolite identification., 2010, 37(5): 355-360. (in Chinese)

    [32] 夏建飛, 梁瓊麟, 胡坪, 王義明, 羅國(guó)安. 代謝組學(xué)研究策略與方法的新進(jìn)展. 分析化學(xué), 2009, 37(1): 136-143.

    XIA J F, LIAGN Q L, HU P, WANG Y M, LUO G A. recent trends in strategies and methodologies for metabonomics., 2009, 37(1): 136-143. (in Chinese)

    [33] 許茜, 王磊, 張杰, 許卉. 基于核磁代謝組學(xué)的阿膠原料來(lái)源鑒別. 食品科技, 2018, 43(1): 316-319.

    XU Q, WANG L, ZHANG J, XU H. Origin identification of Colla Corii Asini based on1H-NMR metabolomics., 2018, 43(1): 316-319. (in Chinese)

    [34] BRENNAN L. NMR-based metabolomics: From sample preparation to applications in nutrition research., 2014, 83: 42-49.

    [35] SANDUSKY P, APPIAH-AMPONSAH E, RAFTERY D. Use of optimized 1D TOCSY NMR for improved quantitation and metabolomic analysis of biofluids., 2011, 49(3/4): 281-290.

    [36] STURM S, SEGER C. Liquid chromatography-nuclear magnetic resonance coupling as alternative to liquid chromatography-mass spectrometry hyphenations: curious option or powerful and complementary routine tool?, 2012, 1259(19): 50-61.

    [37] BRAUNBERGER C, ZEHL M, CONRAD J, FISCHER S, ADHAMI H R, BEIFUSS U, KRENN L. LC-NMR, NMR, and LC-MS identification and LC-DAD quantification of flavonoids and ellagic acid derivatives in drosera peltata., 2013, 932(15): 111-116.

    [38] GARCIA C J, GARCíA-VILLALBA R, GARRIDO Y, GIL M I, TOMáS-BARBERáN F A. Untargeted metabolomics approach using UPLC-ESI-QTOF-MS to explore the metabolome of fresh-cut iceberg lettuce., 2016, 12(8): 138.

    [39] SARABIA L D, BOUGHTON B A, RUPASINGHE T, VAN DE MEENE A M L, CALLAHAN D L, HILL C B, ROESSNER U. High-mass-resolution MALDI mass spectrometry imaging reveals detailed spatial distribution of metabolites and lipids in roots of barley seedlings in response to salinity stress., 2018, 14(5): 1-16.

    [40] FARNETI B, KHOMENKO I, CAPPELLIN L, TING V, ROMANO A, BIASIOLI F, COSTA G, COSTA F. Comprehensive VOC profiling of an apple germplasm collection by PTR-ToF-MS., 2015, 11(4): 838-850.

    [41] KIM H J, SEO Y T, PARK S-I, JEONG S H, KIM M K, JANG Y P. DART–TOF–MS based metabolomics study for the discrimination analysis of geographical origin ofroots collected from Korea and China., 2015, 11(1): 64-70.

    [42] GONG Z G, HU J, WU X, XU Y J. The Recent developments in sample preparation for mass spectrometry-based metabolomics., 2017, 47(4): 1-7.

    [43] BEALE D J, PINU F R, KOUREMENOS K A, POOJARY M M, NARAYANA V K, BOUGHTON B A, KANOJIA K, DAYALAN S, JONES O A H, DIAS D A. Review of recent developments in GC-MS approaches to metabolomics-based research., 2018, 14(11): 152.

    [44] MARI A, LYON D, FRAGNER L, MONTORO P, PIACENTE S, WIENKOOP S, EGELHOFER V, WECKWERTH W. Phytochemical composition ofL. analyzed by an integrative GC-MS and LC-MS metabolomics platform., 2013, 9(3): 599-607.

    [45] SMITH E D, WHITING M D, RUDELL D R. Metabolic profiling of ethephon-treated sweet cherry (L.)., 2011, 7(1): 126-133.

    [46] WONG Y F, PERLMUTTER P, MARRIOTT P J. Untargeted metabolic profiling ofspp. leaf oils using comprehensive two-dimensional gas chromatography with high resolution mass spectrometry: Expanding the metabolic coverage., 2017, 13(5): 46.

    [47] TOFFALI K, ZAMBONI A, ANESI A, STOCCHERO M, PEZZOTTI M, LEVI M, GUZZO F. Novel aspects of grape berry ripening and post-harvest withering revealed by untargeted LC-ESI-MS metabolomics analysis., 2011, 7(3): 424-436.

    [48] JOHNSON A E, SIDWICK K L, PIRGOZLIEV V R, EDGE A, THOMPSON D F. Metabonomic profiling of chicken eggs during storage using high-performance liquid chromatography–quadrupole time-of-flight mass spectrometry., 2018, 90(12): 7489-7494.

    [49] MOLINA-CALLE M, SáNCHEZ DE MEDINA V, CALDERóN- SANTIAGO M, PRIEGO-CAPOTE F, LUQUE DE CASTRO M D. Untargeted analysis to monitor metabolic changes of garlic along heat treatment by LC-QTOF MS/MS., 2017, 38(18): 2349-2360.

    [50] IBá?EZ C, SIMó C, GARCíA-CA?AS V, CIFUENTES A, CASTRO- PUYANA M. Metabolomics, peptidomics and proteomics applications of capillary electrophoresis-mass spectrometry in foodomics: A review., 2013, 802: 1-13.

    [51] BAN E, PARK S H, KANG M J, LEE H J, SONG E J, YOO Y S. Growing trend of CE at the omics level: The frontier of systems biology-an update., 2012, 33(1): 2-13.

    [52] LAN K, ZHANG Y, YANG J Y, XU L. Simple quality assessment approach for herbal extracts using high performance liquid chromatography-UV based metabolomics platform., 2010, 1217(8): 1414-1418.

    [53] FIEHN O. Metabolomics--the link between genotypes and phenotypes., 2002, 48(1/2): 155-171.

    [54] 徐淑玲, 魏芳, 董緒燕, 陳洪. 脂質(zhì)組學(xué)在脂質(zhì)膳食營(yíng)養(yǎng)與健康研究中的應(yīng)用. 中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng), 2017, 23(11): 5-10.

    XU S L, WEI F, DONG X Y, CHEN H. The Application of lipidomics in lipids dietary nutrition and health research., 2017, 23(11): 5-10. (in Chinese)

    [55] GIKA H G, THEODORIDIS G A, PLUMB R S, WILSON I D. Current practice of liquid chromatography-mass spectrometry in metabolomics and metabonomics., 2014, 87: 12-25.

    [56] GUO Q, WU W, MASSART D L, BOUCON C, JONG S D. Feature selection in principal component analysis of analytical data., 2002, 61(1): 123-132.

    [57] ARROIO A, HONóRIO K M, SILVA A B F D. A theoretical study on the analgesic activity of cannabinoid compounds., 2004, 709(1): 223-229.

    [58] BOULESTEIX A L, STRIMMER K. Partial least squares: a versatile tool for the analysis of high-dimensional genomic data., 2007, 8(1): 32-44.

    [59] DAYGON V D, PRAKASH S, CALINGACION M, RIEDEL A, OVENDEN B, SNELL P, MITCHELL J, FITZGERALD M. Understanding the Jasmine phenotype of rice through metabolite profiling and sensory evaluation., 2016, 12(4): 63.

    [60] CAI Y, WENG K, GUO Y, PENG J, ZHU Z-J. An integrated targeted metabolomic platform for high-throughput metabolite profiling and automated data processing., 2015, 11(6): 1575-1586.

    [61] RAFIEI A, SLENO L. Comparison of peak-picking workflows for untargeted liquid chromatography/high-resolution mass spectrometry metabolomics data analysis., 2015, 29(1): 119-127.

    [62] 王昕璐. 基于脂質(zhì)組學(xué)的PCB153和PCB95對(duì)PC12細(xì)胞聯(lián)合毒性效應(yīng)研究[D]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 2018.

    WANG X L. PCB153 and PCB95 in combined exposure modulate PC12 cells as defined by targeted lipidomics analysis [D]. Chinese Academy of Agricultural Sciences, 2018. (in Chinese)

    [63] WISHART D S, JEWISON T, GUO A C, WILSON M, KNOX C, LIU Y, DJOUMBOU Y, MANDAL R, AZIAT F, DONG E. HMDB 3.0-The human metabolome database in 2013., 2013, 41: 801-807.

    [64] SMITH C A. METLIN: A metabolite mass spectral database., 2005, 27(6): 747-751.

    [65] PAUPIèRE M J, MüLLER F, LI H, RIEU I, TIKUNOV Y M, VISSER R G F, BOVY A G. Untargeted metabolomic analysis of tomato pollen development and heat stress response., 2017, 30(2): 81-94.

    [66] WANG L, YE H, SUN D, MENG T, CAO L J, WU M Q, ZHAO M, WANG Y, CHEN B Q, XU X W, WANG G J, HAO H P. Metabolic pathway extension approach for metabolomic biomarker identification., 2017, 89(2): 1229-1237.

    [67] ZHU G T, WANG S C, HUANG Z J, ZHANG S B, LIAO QBG, ZHANG C Z, LIN T, QIN M, PENG M, YANG C K, CAO X, HAN X, WANG X X, VAN DER KNAAP E, ZHANG Z H, CUI X, KLEE H, FERNIE A R, LUO J, HUANG S W. Rewiring of the fruit metabolome in tomato breeding., 2018, 172(1/2): 6-8.

    [68] B?TTCHER C, KR?HMER A, STüRTZ M, WIDDER S, SCHULZ H. Comprehensive metabolite profiling of onion bulbs () using liquid chromatography coupled with electrospray ionization quadrupole time-of-flight mass spectrometry., 2017, 13(4): 35.

    [69] NARDUZZI L, STANSTRUP J, MATTIVI F. Comparing wild American grapes with: A metabolomics study of grape composition., 2015, 63(30): 6823-6834.

    [70] ZOTTI M, COCO L D, PASCALI S A D, MIGONI D, VIZZINI S, MANCINELLI G, FANIZZI F P. Comparative analysis of the proximate and elemental composition of the blue crab callinectes sapidus, the warty crab eriphia verrucosa, and the edible crab cancer pagurus., 2016, 2(2): e00075.

    [71] CORTINA P R, SANTIAGO A N, SANCE M M, PERALTA I E, CARRARI F, ASIS R. Neuronal network analyses reveal novel associations between volatile organic compounds and sensory properties of tomato fruits., 2018, 14(5): 57.

    [72] FUKUDA T, OKAZAKI K, WATANABE A, SHINANO T, OKA N. GC–MS based metabolite profiling for flavor characterization of brassica crops grown with different fertilizer application., 2015, 12(2): 20.

    [73] BROWN P N, MURCH S J, SHIPLEY P. Phytochemical diversity of cranberry (Aiton) cultivars by anthocyanin determination and metabolomic profiling with chemometric analysis., 2012, 60(1): 261-271.

    [74] CARVALHO E, FRANCESCHI P, FELLER A, HERRERA L, PALMIERI L, ARAPITSAS P, RICCADONNA S, MARTENS S. Discovery of A-type procyanidin dimers in yellow raspberries by untargeted metabolomics and correlation based data analysis., 2016, 12(9): 144.

    [75] INOSTROZA-BLANCHETEAU C, DE OLIVEIRA SILVA F M, DURáN F, SOLANO J, OBATA T, MACHADO M, FERNIE A R, REYES-DíAZ M, NUNES-NESI A. Metabolic diversity in tuber tissues of native Chiloé potatoes and commercial cultivars ofssp.L., 2018, 14(10): 138.

    [76] MOUNET F, LEMAIRE-CHAMLEY M, MAUCOURT M, CABASSON C, GIRAUDEL J-L, DEBORDE C, LESSIRE R, GALLUSCI P, BERTRAND A, GAUDILLèRE M, ROTHAN C, ROLIN D, MOING A. Quantitative metabolic profiles of tomato flesh and seeds during fruit development: complementary analysis with ANN and PCA., 2007, 3(3): 273-288.

    [77] 張曉磊, 張瑞英. 代謝組學(xué)及其在農(nóng)作物研究中的應(yīng)用. 生物技術(shù)通訊, 2018, 29(3): 446-450.

    ZHAGN X L, ZHANG R Y. Metabolomics and its application in the crop research., 2018, 29(3): 446-450. (in Chinese)

    [78] RAO J, YANG L T, GUO J C, QUAN S, CHEN G H, ZHAO X X, ZHANG D B, SHI J X. Metabolic changes in transgenic maize mature seeds over-expressing the., 2016, 35(2): 429-437.

    [79] LE GALL G, COLQUHOUN I J, DAVIS A L, COLLINS G J, VERHOEYEN M E. Metabolite profiling of tomato () using1H NMR spectroscopy as a tool to detect potential unintended effects following a genetic modification., 2003, 51(9): 2447-2456.

    [80] LI Y, PANG T, LI Y, WANG X L, LI Q H, LU X, XU G W. Gas chromatography-mass spectrometric method for metabolic profiling of tobacco leaves., 2011, 34(12): 1447-1454.

    [81] KIM J, JUNG Y, SONG B, BONG Y S, RYU D H, LEE K S, HWANG G S. Discrimination of cabbage (ssp.) cultivars grown in different geographical areas using1H NMR-based metabolomics., 2013, 137(1): 68-75.

    [82] BONDIA-PONS I, SAVOLAINEN O, T?RR?NEN R, MARTINEZ J A, POUTANEN K, HANHINEVA K. Metabolic profiling of Goji berry extracts for discrimination of geographical origin by non- targeted liquid chromatography coupled to quadrupole time-of-flight mass spectrometry., 2014, 63(Part B): 132-138.

    [83] HRBEK V, REKTORISOVA M, CHMELAROVA H, OVESNA J, HAJSLOVA J. Authenticity assessment of garlic using a metabolomic approach based on high resolution mass spectrometry., 2018, 67: 19-28.

    [84] RITOTA M, CASCIANI L, HAN B Z, COZZOLINO S, LEITA L, SEQUI P, VALENTINI M. Traceability of Italian garlic (L.) by means of HRMAS-NMR spectroscopy and multivariate data analysis., 2012, 135(2): 684-693.

    [85] CAMARGO A B, RESNIZKY S, MARCHEVSKY E J, LUCO J M. Use of the Argentinean garlic (L.) germplasm mineral profile for determining geographic origin., 2010, 23(6): 586-591.

    [86] VADALà R, MOTTESE A F, BUA G D, SALVO A, MALLAMACE D, CORSARO C, VASI S, GIOFRè S V, ALFA M, CICERO N, DUGO G. Statistical analysis of mineral concentration for the geographic identification of garlic samples from sicily (Italy), Tunisia and Spain., 2016, 5(1): 20.

    [87] SMITH R G. Determination of the country of origin of garlic () using trace metal profiling., 2005, 53(10): 4041-4045.

    [88] DU H Y, FU J L, WANG S Q, LIU H L, ZENG Y C, YANG J R, XIONG S B.1H-NMR metabolomics analysis of nutritional components from two kinds of freshwater fish brain extracts., 2018, 8(35): 19470-19478.

    [89] 陳羽紅, 張東杰, 張桂芳, 王穎, 王長(zhǎng)遠(yuǎn). 代謝組學(xué)技術(shù)在食品產(chǎn)地溯源中的研究進(jìn)展. 糧食與飼料工業(yè), 2016, 12(7): 16-19.

    CHEN Y H, ZHANG D J, ZHANG G F, WANG Y, WAGN C Y. Review on metabonomics techniques in food origin traceability., 2016, 12(7): 16-19. (in Chinese)

    [90] KLOCKMANN S, REINER E, BACHMANN R, HACKL T, FISCHER M. Food fingerprinting: metabolomic approaches for geographical origin discrimination of hazelnuts () by UPLC-QTOF-MS., 2016, 64(48): 9253-9262.

    [91] KLOCKMANN S, REINER E, CAIN N, FISCHER M. Food targeting: Geographical origin determination of hazelnuts () by LC-QqQ-MS/MS-based targeted metabolomics application., 2017, 65(7): 1456-1465.

    [92] ZHANG J J, WANG X, YU O, TANG J J, GU X G, WAN X C, FANG C B. Metabolic profiling of strawberry (×Duch.) during fruit development and maturation., 2011, 62(3): 1103-1118.

    [93] CUADROS-INOSTROZA A, RUíZ-LARA S, GONZáLEZ E, ECKARDT A, WILLMITZER L, PE?A-CORTéS H. GC-MS metabolic profiling of Cabernet Sauvignon and Merlot cultivars during grapevine berry development and network analysis reveals a stage- and cultivar-dependent connectivity of primary metabolites., 2016, 12(2): 39.

    [94] OMS-OLIU G, HERTOG M L A T M, VAN DE POEL B, AMPOFO- ASIAMA J, GEERAERD A H, NICOLA? B M. Metabolic characterizationof tomato fruit during preharvest development, ripening, and postharvest shelf-life., 2011, 62(1): 7-16.

    [95] MARTINS N, PETROPOULOS S, FERREIRA I C F R. Chemical composition and bioactive compounds of garlic (L.) as affected by pre- and post-harvest conditions: A review., 2016, 211: 41-50.

    [96] DENG J C, YANG C Q, ZHANG J, ZHANG Q, YANG F, YANG W Y, LIU J. Organ-specific differential NMR-based metabonomic analysis of soybean [(L.) Merr.] fruit reveals the metabolic shifts and potential protection mechanisms involved in field mold infection., 2017, 8(508).

    [97] 許騰, 張玥, 張海麗, 辛鳳姣, 王艷, 王鳳忠. 代謝組學(xué)技術(shù)在營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究中的應(yīng)用. 中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng), 2017, 23(11): 11-16.

    XU T, ZHANG Y, ZHAGN H L, XIN F J, WANG Y, WANG F Z. Applications of metabonomics in nutriology research., 2017, 23(11): 11-16. (in Chinese)

    [98] 張雙慶, 黃振武. 營(yíng)養(yǎng)代謝組學(xué)技術(shù)在營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究中的應(yīng)用. 衛(wèi)生研究, 2013, 42(6): 1041-1046.

    ZHAGN S Q, HUANG Z W. Application of nutritional metabolomics technology in nutrition research., 2013, 42(6): 1041-1046. (in Chinese)

    [99] 何慶華, 任萍萍, 王玉蘭. 代謝組學(xué)在營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究中的應(yīng)用. 食品科學(xué), 2011, 32(5): 317-320.

    HE Q H, REN P P, WANG Y L. Applications of metabolomics in nutrition research: A review., 2011, 32(5): 317-320. (in Chinese)

    [100] LIU C T, RAGHU R, LIN S H, WANG S Y, KUO C H, TSENG Y F J, SHEEN L Y. Metabolomics of ginger essential oil against alcoholic fatty liver in mice., 2013, 61(46): 11231-11240.

    [101] 唐華麗, 夏惠, 王鋒, 孫桂菊. 枸杞多糖作用于2型糖尿病大鼠的血清代謝組學(xué)研究. 食品科學(xué), 2017, 38(13): 160-166.

    TANG H L, XIA H, WANG F, SUN G J. Serum metabonomics study of type 2 diabetic rats administrated with lycium barbarum polysaccharides., 2017, 38(13): 160-166. (in Chinese)

    [102] FUJIMURA Y, KURIHARA K, IDA M, KOSAKA R, MIURA D, WARIISHI H, MAEDA-YAMAMOTO M, NESUMI A, SAITO T, KANDA T, YAMADA K, TACHIBANA H. Metabolomics-driven nutraceutical evaluation of diverse green tea cultivars,. 2011, 6(8): e23426.

    [103] ACCARDI C J, WALKER D I, UPPAL K, QUYYUMI A A, ROHRBECK P, PENNELL K D, MALLON C T, JONES D P. High-resolution metabolomics for nutrition and health assessment of armed forces personnel., 2016, 58(8S Suppl 1): S80-S88.

    [104] RAI A, SAITO K, YAMAZAKI M. Integrated omics analysis of specialized metabolism in medicinal plants., 2017, 90(4): 764-787.

    [105] 侯紹英, 黃放放, 劉鑫妍, 彭雪. 基于UPLC-MS技術(shù)的人體內(nèi)芒果苷代謝組學(xué)研究. 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2016, 50(4): 315-318.

    HOU S Y, HUANG F F, LIU X Y, PENG X. Metabolomics study of mangiferin in human based on UPLC-MS., 2016, 50(4): 315-318. (in Chinese)

    [106] LLORACH R, URPI-SARDA M, TULIPANI S, GARCIA-ALOY M, MONAGAS M, ANDRES-LACUEVA C. Metabolomic fingerprint in patients at high risk of cardiovascular disease by cocoa intervention., 2013, 57(6): 962-973.

    [107] 邊會(huì)喜. 基于代謝組學(xué)與多光譜成像技術(shù)對(duì)苦瓜影響高脂飲食肥胖小鼠能量代謝的有效組分的研究[D]. 合肥: 合肥工業(yè)大學(xué), 2016.

    BIAN H X. The energy metabolism study of effective componets from bitter melon (Momordica charantia) on DIO mice based on metabolomics and multispectral imaging techonogy [D]. Hefei: Hefei University of Technology, 2016. (in Chinese)

    [108] TAKIS P G, ORAIOPOULOU M E, KONIDARIS C, TROGANIS A N. (1)H-NMR based metabolomics study for the detection of the human urine metabolic profile effects oftea ingestion., 2016, 7(9): 4104-4115.

    [109] STELLA C, BECKWITH-HALL B, CLOAREC O, HOLMES E, LINDON J C, POWELL J, VAN DER OUDERAA F, BINGHAM S, CROSS A J, NICHOLSON J K. Susceptibility of human metabolic phenotypes to dietary modulation., 2006, 5(10): 2780-2788.

    Review on the Application of Metabolomic Approaches to Investigate and Analysis the Nutrition and Quality of Agro-products

    XU YanYang1, YAO GuiXiao1, 3, LIU PingXiang1, ZHAO Jie1, WANG XinLu1, SUN JunMao2, QIAN YongZhong1

    (1Institute of Quality Standards and Testing Technology for Agro-Products, Chinese Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Agro-Product Quality and Safety, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Beijing 100081;2Institute of Food and Nutrition Development, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Beijing 100081;3Xi’an University of Technology, Xi’an 710048)

    Scientific evaluation of the nutrition and quality of agricultural products is essential for improving the nutrition level of agro-products. Because of the complex composition of nutrients in agro-products, the existing analytical methods can only analyze the concentration and function of known nutrients but cannot analyze and identify a large number of unknown functional substances. On the basis of high-throughput chemical analyses, metabolomics can qualitatively and quantitatively analyze endogenous and exogenous metabolites of biological samples. Therefore, metabolomics has outstanding advantages in the analysis of small molecular substances with special nutritional functions in agricultural products; it has advantages like providing new methods for the characterization and differential analysis of nutrient components, traceability and authenticity of identification, variation analysis of functional substances during growth and storage, and the effect mechanisms of functional components. It also provides new strategies for structural optimization of dietary requirements. In this paper, the recent advances in metabolomics research, including sample preparation, metabolite analysis, data processing, differential metabolite identification, and metabolic pathway analysis were reviewed. This work summed up the application of metabolomics in the characterization and difference analysis of metabolites, traceability and authenticity identification of origin, metabolite variation in the process of storage, and the evaluation of nutritional functions to provide theoretical bases and practical references for high-quality agricultural development in China. In the field of sample preparation, the activity of metabolism-related enzymes is first terminated by rapidly changing the environmental conditions, such as adding strong acid (alkali) or freezing in liquid nitrogen. Different extraction solvents are selected based on the polarities of the metabolites to obtain a higher extraction rate. In the field of sample analysis methods, technologies, such as nuclear magnetic resonance spectroscopy, chromatography mass spectrometry and capillary electrophoresis-mass spectrometry, have been widely used. Among them, the combination of chromatography and mass spectrometry has become the most commonly used analytical technique in metabolomics. In the field of data processing and analysis, principal component analysis and orthogonal partial least squares-discriminant analysis are the most common data analysis techniques. Through enrichment and topological analysis, the metabolic pathway with the highest correlation to differential metabolites can be identified, and the reason of differential metabolites can be explained and analyzed. In the field of evaluation of nutrition and quality of agricultural products, through the comprehensive characterization of primary metabolites and secondary metabolites in agricultural products, unique fingerprints of agricultural products are established and used for differential analysis, whereas through non-specific target analysis and unsupervised analysis methods, differences between groups and relating metabolites can be identified. Via concentration analysis of key components in the growth process of agricultural products, the best harvest periods can be provided. Interaction studies between functional components and metabolism of organisms based on the detection of humoral metabolism and biomarkers can provide valuable information for dietary guidance.

    metabolomics; agro-product; nutrition; quality

    10.3864/j.issn.0578-1752.2019.18.009

    2019-02-22;

    2019-04-23

    國(guó)家自然科學(xué)基金(31701519)、科技部食品安全關(guān)鍵技術(shù)研發(fā)專項(xiàng)(2017YFC1600705)

    許彥陽(yáng),Tel:010-82106539;E-mail:xuyanyang@caas.cn。

    錢永忠,Tel:010-82106298;E-mail:qianyongzhong@caas.cn。通信作者孫君茂,Tel:010-82109887;E-mail:sunjunmao@caas.cn

    (責(zé)任編輯 趙伶俐)

    猜你喜歡
    代謝物組學(xué)質(zhì)譜
    阿爾茨海默病血清代謝物的核磁共振氫譜技術(shù)分析
    氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀在農(nóng)殘檢測(cè)中的應(yīng)用及維護(hù)
    口腔代謝組學(xué)研究
    基于UHPLC-Q-TOF/MS的歸身和歸尾補(bǔ)血機(jī)制的代謝組學(xué)初步研究
    吹掃捕集-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定水中18種揮發(fā)性有機(jī)物
    柱前衍生化結(jié)合LC-MSn分析人尿中茶堿及其代謝物
    代謝組學(xué)在多囊卵巢綜合征中的應(yīng)用
    HPLC-MS/MS法分析乙酰甲喹在海參中的主要代謝物
    棗霜化學(xué)成分的色譜質(zhì)譜分析
    Modeled response of talik development under thermokarst lakes to permafrost thickness on the Qinghai-Tibet Plateau
    欧美中文综合在线视频| 美女中出高潮动态图| 午夜视频精品福利| 纯流量卡能插随身wifi吗| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲第一av免费看| 久久av网站| 韩国精品一区二区三区| 他把我摸到了高潮在线观看 | 大片免费播放器 马上看| 亚洲国产精品成人久久小说| 嫩草影视91久久| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久av网站| 91成年电影在线观看| 电影成人av| 成人手机av| 夜夜夜夜夜久久久久| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久国产亚洲av麻豆专区| 丝袜脚勾引网站| 亚洲专区国产一区二区| 欧美乱码精品一区二区三区| 久热爱精品视频在线9| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久亚洲国产成人精品v| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 嫁个100分男人电影在线观看| cao死你这个sao货| 女警被强在线播放| www.熟女人妻精品国产| 亚洲av成人一区二区三| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 日本欧美视频一区| 国产免费现黄频在线看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 一本色道久久久久久精品综合| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产在视频线精品| 国产成人欧美| 国产免费av片在线观看野外av| 国产在线免费精品| 日韩大码丰满熟妇| 色综合欧美亚洲国产小说| 淫妇啪啪啪对白视频 | 免费一级毛片在线播放高清视频 | 男女下面插进去视频免费观看| 黄片大片在线免费观看| 国产一区二区在线观看av| 欧美中文综合在线视频| 精品国产国语对白av| 丝袜脚勾引网站| 老汉色∧v一级毛片| 免费少妇av软件| 在线天堂中文资源库| cao死你这个sao货| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 一级毛片电影观看| 国产1区2区3区精品| 一二三四在线观看免费中文在| 91字幕亚洲| 午夜免费观看性视频| 五月开心婷婷网| 高清黄色对白视频在线免费看| 男人操女人黄网站| 国产高清国产精品国产三级| 成年人午夜在线观看视频| 91字幕亚洲| 欧美激情 高清一区二区三区| 一二三四社区在线视频社区8| 国产成人精品无人区| 在线观看免费午夜福利视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久久久国产精品人妻一区二区| 涩涩av久久男人的天堂| 久久精品人人爽人人爽视色| av福利片在线| 高清在线国产一区| a级毛片黄视频| 亚洲全国av大片| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲七黄色美女视频| 欧美日韩一级在线毛片| 中国国产av一级| 中文字幕精品免费在线观看视频| 免费在线观看影片大全网站| 国产亚洲精品第一综合不卡| 久久久国产精品麻豆| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久久久视频综合| 国产成+人综合+亚洲专区| 悠悠久久av| 午夜福利乱码中文字幕| 国产福利在线免费观看视频| 亚洲免费av在线视频| 青青草视频在线视频观看| 欧美激情久久久久久爽电影 | 高清av免费在线| 欧美乱码精品一区二区三区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 啦啦啦在线免费观看视频4| 9热在线视频观看99| 蜜桃国产av成人99| 深夜精品福利| 视频在线观看一区二区三区| 狂野欧美激情性xxxx| 在线观看免费高清a一片| 麻豆乱淫一区二区| 男女无遮挡免费网站观看| 女人久久www免费人成看片| 国产91精品成人一区二区三区 | 欧美日韩一级在线毛片| 中文字幕最新亚洲高清| 老司机在亚洲福利影院| 两个人免费观看高清视频| 欧美激情高清一区二区三区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 黄色毛片三级朝国网站| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产一区二区三区av在线| 午夜成年电影在线免费观看| 成年人午夜在线观看视频| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 国产成人啪精品午夜网站| 丰满少妇做爰视频| 三上悠亚av全集在线观看| 人妻一区二区av| 午夜福利在线观看吧| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 好男人电影高清在线观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 天堂中文最新版在线下载| 色综合欧美亚洲国产小说| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 欧美黑人精品巨大| 日本一区二区免费在线视频| a级毛片黄视频| 国产xxxxx性猛交| 99精国产麻豆久久婷婷| 女警被强在线播放| 美国免费a级毛片| 久久精品国产a三级三级三级| 日韩欧美免费精品| 淫妇啪啪啪对白视频 | 一区二区三区精品91| 亚洲国产中文字幕在线视频| 成年人午夜在线观看视频| 丝袜喷水一区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 精品国产一区二区久久| 亚洲五月色婷婷综合| 久热这里只有精品99| 国产福利在线免费观看视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 成人影院久久| 亚洲中文字幕日韩| 久久久水蜜桃国产精品网| 一级,二级,三级黄色视频| 成人三级做爰电影| 高清欧美精品videossex| 亚洲少妇的诱惑av| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 女人精品久久久久毛片| 老司机影院成人| 在线观看人妻少妇| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲免费av在线视频| 咕卡用的链子| 韩国精品一区二区三区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 极品人妻少妇av视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 一级毛片精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产精品.久久久| 波多野结衣一区麻豆| 国产精品一区二区免费欧美 | 国产精品二区激情视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲av国产av综合av卡| 欧美xxⅹ黑人| 国产精品av久久久久免费| 91av网站免费观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 18禁观看日本| 波多野结衣av一区二区av| 欧美在线黄色| 日韩视频在线欧美| 国产av一区二区精品久久| 美女午夜性视频免费| 国产伦理片在线播放av一区| 国产在线观看jvid| 热99久久久久精品小说推荐| 一区在线观看完整版| 久久综合国产亚洲精品| 久久久精品区二区三区| 国产一区二区激情短视频 | 美国免费a级毛片| 男女午夜视频在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 丝袜脚勾引网站| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 香蕉丝袜av| 国产成人免费观看mmmm| 搡老熟女国产l中国老女人| 一个人免费看片子| 视频区欧美日本亚洲| 国产精品偷伦视频观看了| 丰满迷人的少妇在线观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲av美国av| 91国产中文字幕| 丰满迷人的少妇在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 十八禁网站网址无遮挡| 人人妻人人澡人人看| 黑人操中国人逼视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 大型av网站在线播放| 一级毛片电影观看| 少妇 在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 久久狼人影院| 亚洲av男天堂| 一级a爱视频在线免费观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | √禁漫天堂资源中文www| 久久人人爽人人片av| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲国产欧美网| 日本91视频免费播放| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产高清videossex| 在线观看www视频免费| 99精品欧美一区二区三区四区| 国产黄频视频在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产av精品麻豆| 国产成人免费观看mmmm| 在线观看www视频免费| 欧美激情极品国产一区二区三区| 精品欧美一区二区三区在线| 又紧又爽又黄一区二区| 十八禁网站网址无遮挡| 国产麻豆69| 超碰成人久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看| av福利片在线| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久久久国内视频| 国产1区2区3区精品| 丝袜喷水一区| 亚洲美女黄色视频免费看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 天天添夜夜摸| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 欧美亚洲日本最大视频资源| 叶爱在线成人免费视频播放| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 老汉色∧v一级毛片| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲三区欧美一区| 黑丝袜美女国产一区| 91麻豆av在线| 国产精品一二三区在线看| 十八禁网站免费在线| 99精品久久久久人妻精品| 欧美大码av| 五月天丁香电影| 999精品在线视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| www.自偷自拍.com| 91成人精品电影| 精品视频人人做人人爽| 亚洲av美国av| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲一码二码三码区别大吗| av超薄肉色丝袜交足视频| 三级毛片av免费| 国产一区二区在线观看av| 黄片播放在线免费| 亚洲精品第二区| 国产在线一区二区三区精| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 国产欧美亚洲国产| 久久精品人人爽人人爽视色| 最近最新中文字幕大全免费视频| 一区在线观看完整版| 日韩大片免费观看网站| 少妇的丰满在线观看| av一本久久久久| 超碰成人久久| 国产视频一区二区在线看| 18禁观看日本| 久久久欧美国产精品| 美女大奶头黄色视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美在线黄色| 精品久久蜜臀av无| 天天影视国产精品| 老司机午夜福利在线观看视频 | 91成人精品电影| 黄色片一级片一级黄色片| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲成人国产一区在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲精品第二区| 黄色视频不卡| 国产精品欧美亚洲77777| 12—13女人毛片做爰片一| 久久人妻熟女aⅴ| 久久影院123| 国产深夜福利视频在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 真人做人爱边吃奶动态| h视频一区二区三区| 成人黄色视频免费在线看| av不卡在线播放| 午夜福利,免费看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产成人精品在线电影| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲精品国产av蜜桃| 大型av网站在线播放| 日日爽夜夜爽网站| 午夜福利乱码中文字幕| 在线观看免费午夜福利视频| 老司机在亚洲福利影院| 91成年电影在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 97人妻天天添夜夜摸| 美女高潮到喷水免费观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲精品国产av蜜桃| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 美女扒开内裤让男人捅视频| 另类精品久久| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲中文字幕日韩| 久久99一区二区三区| 国产成人av激情在线播放| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 交换朋友夫妻互换小说| 9191精品国产免费久久| 在线精品无人区一区二区三| 国产亚洲欧美精品永久| 飞空精品影院首页| 1024视频免费在线观看| 国产亚洲精品一区二区www | 欧美成人午夜精品| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 91精品国产国语对白视频| 亚洲少妇的诱惑av| 在线观看免费日韩欧美大片| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲五月色婷婷综合| 日本a在线网址| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 99久久99久久久精品蜜桃| 欧美黑人精品巨大| 日韩制服骚丝袜av| 国产亚洲一区二区精品| 男女下面插进去视频免费观看| 国产成人a∨麻豆精品| 宅男免费午夜| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 不卡av一区二区三区| 美女中出高潮动态图| 热99re8久久精品国产| 大片免费播放器 马上看| 国产精品国产av在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 欧美日韩黄片免| 啪啪无遮挡十八禁网站| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 日日夜夜操网爽| 青春草视频在线免费观看| 视频区图区小说| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 精品免费久久久久久久清纯 | av网站免费在线观看视频| 丝袜美足系列| 国产精品二区激情视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产深夜福利视频在线观看| 两性夫妻黄色片| 曰老女人黄片| 大陆偷拍与自拍| av在线播放精品| kizo精华| 亚洲精品国产一区二区精华液| 老熟女久久久| 久久香蕉激情| 性色av一级| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 真人做人爱边吃奶动态| 国产在线观看jvid| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 另类精品久久| 欧美日韩成人在线一区二区| 老司机亚洲免费影院| 日韩电影二区| tocl精华| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产免费av片在线观看野外av| 久久久国产成人免费| 高潮久久久久久久久久久不卡| tube8黄色片| 亚洲黑人精品在线| 亚洲国产欧美网| 亚洲精品美女久久av网站| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 欧美日韩av久久| 视频区欧美日本亚洲| 精品国产乱码久久久久久小说| 麻豆乱淫一区二区| 色94色欧美一区二区| 久久久久国产一级毛片高清牌| 12—13女人毛片做爰片一| 香蕉丝袜av| 午夜福利视频精品| 老司机影院毛片| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产91精品成人一区二区三区 | 免费观看av网站的网址| 国产精品一区二区免费欧美 | 欧美中文综合在线视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 一区二区av电影网| 日本黄色日本黄色录像| 国产精品一区二区免费欧美 | 极品人妻少妇av视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 精品久久久久久电影网| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产亚洲av高清不卡| 久久久久久久久久久久大奶| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 一级片免费观看大全| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲九九香蕉| 中文字幕高清在线视频| 捣出白浆h1v1| 91大片在线观看| 久久久精品免费免费高清| 亚洲精品国产一区二区精华液| 宅男免费午夜| 午夜久久久在线观看| 欧美97在线视频| 午夜老司机福利片| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲精品乱久久久久久| 少妇粗大呻吟视频| 性少妇av在线| 午夜免费观看性视频| 午夜免费鲁丝| 老司机影院毛片| 手机成人av网站| 国产成人影院久久av| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 久久久久精品人妻al黑| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 91字幕亚洲| 婷婷丁香在线五月| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 人成视频在线观看免费观看| 不卡一级毛片| 成人国产av品久久久| 啦啦啦 在线观看视频| 午夜福利影视在线免费观看| 日韩大码丰满熟妇| 国产在线一区二区三区精| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产在线视频一区二区| av不卡在线播放| 免费人妻精品一区二区三区视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲国产中文字幕在线视频| 在线天堂中文资源库| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 美女福利国产在线| 男女免费视频国产| 婷婷成人精品国产| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 999久久久国产精品视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产91精品成人一区二区三区 | 精品人妻1区二区| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 美女福利国产在线| 伊人亚洲综合成人网| 久久久久久久大尺度免费视频| 老司机午夜福利在线观看视频 | 99精国产麻豆久久婷婷| 秋霞在线观看毛片| 午夜老司机福利片| av视频免费观看在线观看| 91精品国产国语对白视频| 国产精品av久久久久免费| 一级黄色大片毛片| 亚洲伊人久久精品综合| 国产不卡av网站在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 好男人电影高清在线观看| www.精华液| 亚洲中文av在线| 欧美日韩av久久| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 一区福利在线观看| 国精品久久久久久国模美| 欧美在线一区亚洲| 18禁观看日本| svipshipincom国产片| 成人免费观看视频高清| 国产精品一区二区精品视频观看| 热99re8久久精品国产| 国产av一区二区精品久久| 精品高清国产在线一区| 1024视频免费在线观看| 十八禁高潮呻吟视频| 国产精品一区二区在线不卡| 免费高清在线观看日韩| 亚洲欧美激情在线| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲久久久国产精品| 热99国产精品久久久久久7| 国产欧美日韩一区二区精品| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久99热这里只频精品6学生| 满18在线观看网站| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美少妇被猛烈插入视频| 老司机影院毛片| 亚洲熟女毛片儿| 女人精品久久久久毛片| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 老司机影院成人| 操出白浆在线播放| 国产免费av片在线观看野外av| 亚洲国产欧美网| 超色免费av| 波多野结衣av一区二区av| 高潮久久久久久久久久久不卡| 满18在线观看网站| 好男人电影高清在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久久久视频综合| 久久久水蜜桃国产精品网| 午夜激情av网站| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲男人天堂网一区| 女性被躁到高潮视频| 国产国语露脸激情在线看| av视频免费观看在线观看| 人妻人人澡人人爽人人| 成年人黄色毛片网站| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| av国产精品久久久久影院| 亚洲精华国产精华精| 男女午夜视频在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲黑人精品在线| 十八禁高潮呻吟视频| 国产成人av激情在线播放| cao死你这个sao货| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产一区二区 视频在线| 满18在线观看网站| 久久精品国产a三级三级三级| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 少妇粗大呻吟视频| 多毛熟女@视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 老汉色∧v一级毛片| 免费av中文字幕在线| 国产男女超爽视频在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 国产男女内射视频| 国产av精品麻豆| 老司机影院毛片| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 国产精品免费视频内射| 十分钟在线观看高清视频www| 人妻 亚洲 视频| 亚洲色图综合在线观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 12—13女人毛片做爰片一| 国产人伦9x9x在线观看|