實驗室檢測在規(guī)模化豬場偽狂犬病免疫程序調(diào)整中的應(yīng)用

艾啟青 劉 燕 林 琳

福州科免生物科技有限公司 福州 350022

偽狂犬?。≒seudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies Virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病，在豬群中主要引發(fā)母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道綜合征等。目前，雖然我國使用PRV基因工程缺失疫苗對該病進行防控，但該病毒隱性感染情況還是十分普遍。在隱性感染情況下，病毒會引起豬免疫抑制、生長速度和繁殖性能下降等，嚴(yán)重危害豬群健康，并造成巨大經(jīng)濟損失?，F(xiàn)在對于偽狂犬病實驗室檢測已經(jīng)有了比較成熟的方法，通過實驗室檢測可對豬群偽狂犬病免疫進行指導(dǎo)，最終達到偽狂犬病凈化的目的。

1 材料與方法

1.1 血清來源 血清全部來源于福建寧德某存欄2 000頭母豬的規(guī)模化豬場，被檢血清均為隨機采集，待配后備母豬（250日齡左右）采血20份、繁殖母豬（懷孕40 d母豬、懷孕70 d母豬、哺乳母豬）采血15份、公豬采血20份。育肥豬為 60日齡、90日齡、120日齡和160日齡，每組采血20份。

1.2 免疫程序 該豬場豬群均免疫過PRV-gE基因缺失疫苗。免疫程序調(diào)整前，種豬用某國產(chǎn)C株偽狂犬病疫苗每年免疫4次，每次肌注1頭份/頭。商品豬出生后噴鼻免疫1頭份/頭，60日齡和90日齡各肌注1頭份/頭。待配后備母豬120日齡前按照育肥豬的免疫程序，轉(zhuǎn)為后備欄后分別在160日齡和220日齡各肌注1頭份/頭。檢測后的偽狂犬病疫苗免疫程序調(diào)整為：每年免疫4次不變，肌注改為1.5頭份/頭，商品豬出生后噴鼻1頭份/頭，60日齡和110日齡各肌注1頭份/頭。待配后備母豬120日齡前按照商品豬的免疫程序不變，轉(zhuǎn)到后備欄后160日齡和220日齡各肌注1.5頭份/頭。

1.3 豬偽狂犬病抗體檢測試劑盒 PRV-gE抗體檢測試劑盒由西班牙海博萊生物大藥廠生產(chǎn)，PRV-gB抗體檢測試劑盒由Biocheck英國分公司生產(chǎn)。

1.4 主要器材 酶標(biāo)儀，購自BioTek公司；單道移液器（100～1 000 μL)、多通道移液器(5～10 μL、30～300 μL)等，購自 eppendorf公司；Micro CL 17R 離心機購自Thermo公司。

1.5 檢測方法 豬偽狂犬病PRV-gE和PRV-gB抗體檢測的具體操作步驟參照試劑盒說明書進行。1.6 結(jié)果判定 gE抗體結(jié)果判定：如果樣品孔的IN%小于40.0，則判為陰性；如果IN%大于或等于40.0，且小于或等于45.0，則判為可疑；如果IN%大于45.0，則判為陽性。gB抗體結(jié)果判定：S/P≤0.499，即抗體效價≤1070，判定為陰性；S/P≥0.500，即抗體效價≥1071，判定為陽性。

2 結(jié)果與分析

2.1 偽狂犬病免疫程序調(diào)整前抗體檢測結(jié)果

2.1.1 gE抗體檢測結(jié)果 不同日齡商品豬偽狂犬病gE抗體數(shù)據(jù)見表1。60日齡、90日齡、120日齡和160日齡商品豬偽狂犬病gE抗體陽性率分別為55%、15%、10%和100%。待配后備母豬、懷孕40d母豬、懷孕70d母豬、哺乳母豬和公豬的陽性率分別為15%、87%、73%、93%和10%。繁殖母豬gE抗體平均陽性率為81%。60～160日齡商品豬的gE抗體陽性率出現(xiàn)先下降后上升的趨勢（見圖1）。

表1 免疫程序調(diào)整前不同階段豬群gE抗體檢測結(jié)果

圖1 免疫程序調(diào)整前不同階段豬群偽狂犬病gE抗體陽性率

2.1.2 gB抗體檢測結(jié)果 不同階段豬群gB抗體檢測結(jié)果見表2。除60日齡商品豬和待配后備母豬的gB抗體陽性率分別為85%和95%外，其他各組均為100%。商品豬gB抗體陽性率變化不明顯（見圖2）。

2.2 偽狂犬病免疫程序調(diào)整后抗體檢測結(jié)果

2.2.1 gE抗體檢測結(jié)果 不同階段豬群偽狂犬病gE抗體數(shù)據(jù)見表3。60日齡、90日齡120日齡和160日齡商品豬的偽狂犬病gE抗體陽性率分別為50%、25%、5%和0%；待配后備母豬gE抗體陽性率為0%；懷孕40d母豬、懷孕70d母豬、哺乳母豬和公豬的 gE抗體陽性率分別為 73%、80%、80%和15%。繁殖母豬gE平均陽性率為78%，60～160日齡商品豬gE抗體陽性率隨日齡增加逐漸消失（見圖3）。

2.2.2 gB抗體檢測結(jié)果 不同階段豬群偽狂犬病gE抗體數(shù)據(jù)見表4。60日齡、90日齡、120日齡和160日齡商品豬偽狂犬病gB抗體陽性率分別為75%、85%、30%和70%。待配后備母豬、繁殖母豬和公豬抗體gB抗體陽性率均為100%。60～160日齡商品豬gB抗體陽性率隨著免疫程序的調(diào)整而出現(xiàn)了先升高后下降然后再升高的過程（見圖4）。

表2 免疫程序調(diào)整前不同階段豬群gB抗體檢測結(jié)果

圖2 免疫程序調(diào)整前不同階段豬群gB抗體陽性率

表3 免疫程序調(diào)整后不同階段豬群gE抗體檢測結(jié)果

圖3 免疫程序調(diào)整后不同階段豬群gE抗體陽性率

表4 免疫程序調(diào)整后不同階段豬群gB抗體檢測結(jié)果

圖4 免疫程序調(diào)整后不同階段豬群gB抗體陽性率

3 結(jié)論與討論

1）目前，我國用于預(yù)防PR的疫苗主要是gE基因缺失的疫苗，這種疫苗的使用可以通過血清學(xué)方法區(qū)分免疫豬和自然感染豬[1]。配套使用PRV gE抗體檢測試劑盒能夠快速、方便、準(zhǔn)確檢測PR野毒抗體，從而評估豬群PR野毒感染狀況。Biocheck豬偽狂犬病gB抗體檢測試劑盒也是一種極其敏感的檢測方法，非常微量的抗體水平就能夠產(chǎn)生陽性結(jié)果。

2）gE抗體檢測結(jié)果表明，該豬場種豬野毒感染率高，繁殖母豬兩次gE抗體檢測感染率平均分別為81%和78%，屬于PR野毒高陽性場。由于豬群感染PR后終生帶毒，所以，免疫程序調(diào)整后母豬PR陽性率并無太大變化。但是通過增加免疫劑量，陰性繁殖母豬和公豬的偽狂犬病gB抗體比免疫程序調(diào)整前要高。免疫劑量的增加雖然不能清除已經(jīng)感染的母豬體內(nèi)的PRV，但是能大大減少感染豬排毒量和排毒時間。通過增加偽狂犬病疫苗的免疫劑量使待配后備母豬保持了PR野毒陰性狀態(tài)，gB抗體滴度也更高。

3）周緒斌等[2]報道，隨著日齡的增長，豬體內(nèi)母源抗體逐漸消失，120日齡時基本消失，保護力也消失。偽狂犬病免疫程序調(diào)整前，60～120日齡商品豬gE抗體是逐漸下降的，分析這些陽性豬中的gE抗體以母源抗體為主；160日齡豬的gE抗體主要為感染PRV后產(chǎn)生的抗體，所以商品豬群感染PRV的節(jié)點為120～160日齡。通過對90日齡商品豬gB抗體的檢測，可知該階段gB抗體滴度仍然較高，此時免疫對疫苗的免疫效果會有一定的影響。推遲偽狂犬病疫苗三免時間至110日齡后，160日齡時檢測gE抗體，也出現(xiàn)了陰性狀態(tài)。

4）對于偽狂犬病野毒感染率較高的豬場，合理的疫苗免疫程序和疫苗質(zhì)量只是改善豬群健康的方法之一。還應(yīng)做好以下方面：（1）公豬和后備母豬的凈化。偽狂犬病病毒可以通過精液進行傳播，公豬群的帶毒率直接影響整個豬群的偽狂犬病流行，通過監(jiān)測公豬群的感染與免疫狀態(tài)，淘汰感染公豬是控制偽狂犬病的有效途徑。后備母豬在入群前應(yīng)進行豬偽狂犬病gE抗體篩查，對抗體陽性者不予入群，保證入群后備母豬質(zhì)量，進而達到控制、凈化種豬群的目的。（2）商品豬后期gE轉(zhuǎn)陰。了解豬場仔豬偽狂犬病母源抗體的消長規(guī)律，制定有效、個性化的免疫程序。商品豬后期轉(zhuǎn)陰可以減少豬場內(nèi)病毒數(shù)量，更有利于豬場偽狂犬病的控制。（3）注重飼養(yǎng)管理。為了防止規(guī)模場豬感染偽狂犬病，并加強對高致病性藍耳病、圓環(huán)病毒病的預(yù)防工作，應(yīng)該對豬瘟、高致病性藍耳病進行免疫。規(guī)模場豬必須做到“全進全出”，避免在外地購買到帶毒豬和患豬，保證豬群的健康與安全。此外，還應(yīng)將防寒防暑工作做到位，時刻打掃豬舍，保持其清潔，認(rèn)真進行環(huán)境消毒滅源，不能讓犬、貓等進入豬場，這對于規(guī)模場豬偽狂犬病防控有積極作用。