大腸桿菌與哺乳仔豬關(guān)系的定性研究

廖生錢

福建省南靖縣山城畜牧獸醫(yī)站 福建南靖 363600

仔豬大腸桿菌病是規(guī)?；B(yǎng)豬場普遍而又危害較嚴(yán)重的傳染病之一[1]。仔豬黃白痢病死率雖然不高，但嚴(yán)重影響仔豬生長發(fā)育，導(dǎo)致飼養(yǎng)成本增高，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大經(jīng)濟損失。目前，關(guān)于豬大腸桿菌病的流行病學(xué)以及預(yù)防和治療已受到普遍的認(rèn)識，但關(guān)于大腸桿菌在養(yǎng)豬場3日齡內(nèi)仔豬中的實際分布及其規(guī)律的研究卻鮮有人知。筆者在工作期間，利用一存欄6 000頭的規(guī)模豬場和南靖縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局實驗室的條件，結(jié)合豬場的生產(chǎn)實際，采用定性方法檢測大腸桿菌在3日齡內(nèi)仔豬不同部位不同時間段出現(xiàn)的情況，以探討大腸桿菌在試驗豬中的實際分布和規(guī)律，分析微生物與豬的相互關(guān)系，為現(xiàn)代養(yǎng)豬場環(huán)境監(jiān)控及生物安全提供科學(xué)的參考資料。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 直徑9 cm培養(yǎng)皿，麥康凱培養(yǎng)基；恒溫箱（國產(chǎn)）；冰箱（國產(chǎn)）；滅菌高壓鍋（國產(chǎn)）；溫度計，鑷子，酒精燈，彩色記號筆，滅菌棉簽，滅菌水，手術(shù)刀等。

1.2 試驗動物 不同產(chǎn)房3日齡以內(nèi)的初生哺乳仔豬3頭，以色筆為記；分娩過程悶死的仔豬3頭。

1.3 試驗方法

1.3.1 大腸桿菌定性監(jiān)測點的確定 通過考察大腸桿菌可能分布的位置，進行實地檢測，考察大腸桿菌實際分布及其疏密程度。

1.3.1.1 初生至3日齡內(nèi)仔豬 對仔豬從初生即開始檢測其口腔、腹部、肛門、肛門深部（黏膜）等部位的大腸桿菌，按以下時間點進行檢測：0 min、5 min、15 min、30 min、60 min、120 min、3 h、5 h、7 h、2 d、3 d。

1.3.1.2 分娩過程悶死的仔豬 發(fā)現(xiàn)因悶死的仔豬，立即按無菌要求剖開并檢測口腔、胃、十二指腸、大腸。

1.3.2 大腸桿菌定性測定結(jié)果判定依據(jù) 接種后的麥康凱培養(yǎng)基立即置37℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，根據(jù)培養(yǎng)皿上紅色菌落的多少及其紅色菌落疏密程度（以下稱疏密度），判定如下：－：不見紅色菌落；＋：紅色菌落數(shù)少，不相連；＋＋：紅色菌落多，有相連；＋＋＋：紅色菌落有相連，有單個；＃：紅色菌落成片。

1.3.3 試驗過程

1.3.3.1 試驗準(zhǔn)備 把麥康凱培養(yǎng)基從冰箱中取出，待晾干后用彩色筆在培養(yǎng)皿背面劃六等分、四等分若干個分區(qū)，并對其進行編號，分別為①～⑥、①～④，各對應(yīng)培養(yǎng)皿分別用阿拉伯?dāng)?shù)字（1、2、3---）編號標(biāo)記。

試驗?zāi)肛i分娩的仔豬編號（4997a、4602a、5625a） 在 0 min、5 min、15 min、30 min、60 min、120 min、3 h、5 h、7 h、2 d、3 d 十一個檢測時間點分別依次對應(yīng)培養(yǎng)皿編號（1、2、3、---31、32、33）。

悶死的仔豬（死胎一、死胎二、死胎三）分別對應(yīng)培養(yǎng)皿（34、35、36）編號。

1.3.3.2 檢測點大腸桿菌的分離接種 按照試驗設(shè)計，分別對選定的各檢測點，用滅菌棉簽在滅菌水中蘸濕后，逐一做同心圓涂擦約1 min，無菌條件下操作，立即在培養(yǎng)基規(guī)定的區(qū)內(nèi)劃線分離接種。并注意劃線時不要劃破培養(yǎng)基[2]，盡可能密些，同一培養(yǎng)皿上的不同區(qū)注意不可互相連接。劃線接種后立即將培養(yǎng)皿放入恒溫箱37℃培養(yǎng)24 h，觀察有無細(xì)菌生長及其菌落疏密度。

1.4 數(shù)據(jù)整理和分析 詳細(xì)記錄試驗結(jié)果，并以圖表法整理，便于分析和對比。

2 結(jié) 果

2.1 初生仔豬不同部位大腸桿菌分布及疏密度

2.1.1 仔豬口腔 從圖1可看出，在出生0.5～2 h，初生仔豬口腔中基本檢測不到大腸桿菌，之后呈現(xiàn)較高程度檢出。但是與編號4602及5625母豬所生的仔豬相比，編號4997母豬所生仔豬的大腸桿菌檢出程度低得多。

2.1.2 仔豬腹部 編號4997母豬所生的仔豬腹部，出生7 h后仍呈現(xiàn)無大腸桿菌分布狀態(tài)，而編號4602母豬所生的仔豬無大腸桿菌狀態(tài)只維持60 min，編號5625母豬所生的仔豬維持0 min，見圖2。

2.1.3 仔豬肛門 從圖3可看出，初生仔豬肛門周圍檢測不到大腸桿菌的狀態(tài)可以維持1～3 h，之后分布程度逐漸加大。

2.1.4 仔豬肛門深部黏膜 從圖4可看出，初生仔豬肛門深部黏膜的大腸桿菌在出生后的第1 d呈現(xiàn)不同程度分布，但是在第2 d均有高的檢出。

2.2 分娩過程悶死仔豬消化道大腸桿菌分布及疏密度 分娩過程悶死仔豬消化道大腸桿菌分布及疏密度見圖5。分娩過程悶死仔豬消化道中基本檢測不到大腸桿菌的存在。

3 討 論

圖1 初生仔豬口腔的大腸桿菌疏密度

圖2 初生仔豬腹部的大腸桿菌疏密度

圖3 仔豬肛門周圍的大腸桿菌疏密度

試驗結(jié)果顯示，初生仔豬大腸桿菌檢出的最早時間是出生后的5 min，遲的可達3 h，之間的主要差別在于產(chǎn)房環(huán)境中大腸桿菌疏密度的高低。仔豬體內(nèi)的大腸桿菌主要是由口腔進入，而口腔的大腸桿菌主要來自于仔豬生存的環(huán)境。隨著仔豬的活動及時間的延長，口腔及其他檢測點的大腸桿菌在不斷增多。仔豬有很強的探究性，如果仔豬周圍環(huán)境不夠清潔，也就很容易導(dǎo)致微生物進入口腔，因此，控制產(chǎn)房環(huán)境的衛(wèi)生質(zhì)量，尤其是對分娩母豬的外陰和乳頭進行清潔和消毒，對仔豬微生物感染程度有著很大的重要性，是減少大腸桿菌進入仔豬體內(nèi)的有效方法。

圖4 初生仔豬肛門深部黏膜的大腸桿菌疏密度

圖5 分娩過程悶死仔豬消化道大腸桿菌分布及疏密度

大腸桿菌無處不在，動物一旦出生，就與大腸桿菌終生相伴[3]。同其他動物一樣，微生物與豬群之間有著密切關(guān)系。除了少數(shù)的微生物可能是豬的病原體外，許多微生物還有益于機體的健康。由致病性大腸桿菌引起的仔豬大腸桿菌病，一直困擾著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。仔豬培育階段是養(yǎng)豬生產(chǎn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，大腸桿菌的感染所造成的損失，除了直接引起仔豬消化道疾病，還導(dǎo)致仔豬生長不良、養(yǎng)殖成本提高等[4]。在條件好的養(yǎng)豬場，對母豬產(chǎn)房和待產(chǎn)母豬體表的嚴(yán)格清潔和消毒采取了積極的措施，然而，對消毒后的效果很少去“追究”，因而相關(guān)研究資料也少見。實際上，我們對大腸桿菌的了解還是很有限，“有關(guān)大腸桿菌傳播途徑知道得還很少，許多地方還不了解，如仔豬疾病的發(fā)生，到底與感染的程度還是因為仔豬對感染抵抗力的強弱有關(guān)，目前尚未清楚”[5]。

在規(guī)?；B(yǎng)豬場，豬群所有的生長條件都依靠人為提供。如果對豬群尤其是仔豬出生初期，對大腸桿菌的實際分布有進一步的了解，則有利于生產(chǎn)過程的環(huán)境質(zhì)量控制，有利于對現(xiàn)代養(yǎng)豬場生物安全措施的科學(xué)制定。本試驗研究的結(jié)果，在一定程度上彌補了規(guī)?；B(yǎng)豬場初生仔豬與大腸桿菌實際分布資料和科學(xué)數(shù)據(jù)的空缺。