高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定紡織品中孔雀石綠

薛建平,林麗云,裴德君,劉 貴

（1 福建省纖維檢驗(yàn)局，福建 福州 350026）

（2 福建省紡織產(chǎn)品檢測(cè)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350026）

孔雀石綠又叫堿性綠4、苯胺綠，屬于三苯甲烷型的綠色染料。在紡織行業(yè)中，孔雀石綠主要用于絲綢、羊毛等紡織產(chǎn)品的染色[1]。但研究表明，孔雀石綠會(huì)引起動(dòng)物肝、腎、心臟等器官中毒。此外，孔雀石綠還會(huì)進(jìn)入人體轉(zhuǎn)化生成脂溶性的隱形孔雀石綠，該化合物已被證實(shí)具有高毒素和三致的作用[2]。目前，OEKO-TEX Standard 100已經(jīng)將孔雀石綠列入生態(tài)紡織品的禁用致癌染料行列中。

關(guān)于孔雀石綠定性定量方法的研究，目前多集中于蝦、魚(yú)等水產(chǎn)類領(lǐng)域。這些文獻(xiàn)主要采用高效液相色譜法[3-5]和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[6-7]進(jìn)行檢測(cè)，而對(duì)于紡織品中的孔雀石綠的檢測(cè)方法，僅見(jiàn)筆者此前報(bào)道的采用高效液相色譜法測(cè)定紡織品中的孔雀石綠[8]。相較于高效液相色譜法，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有更強(qiáng)的排除基質(zhì)干擾和定性定量能力。目前尚未有利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定紡織品中孔雀石綠的相關(guān)研究報(bào)道。本研究采用超聲波萃取法進(jìn)行前處理，并結(jié)合高效液相色譜——串聯(lián)質(zhì)譜的手段對(duì)紡織品中的孔雀石綠的含量進(jìn)行分析，建立快速可靠的檢測(cè)方法。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 儀器設(shè)備

Agilent 1290-6410高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)安捷倫科技公司）；KQ2200型超聲波發(fā)生器（昆山市超聲儀器有限公司）；0.22 μm聚四氟乙烯針頭式過(guò)濾膜（天津博納艾杰爾公司）。

1.2 試劑

乙腈、甲醇、二氯甲烷、甲酸（色譜純，德國(guó)默克公司）；乙酸銨（純度≥99%，CNW公司）；試驗(yàn)用水（超純水，實(shí)驗(yàn)室自制）；孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品（純度為97%，Dr.Ehrenstorfer公司）。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取上述孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品適量，用含1%甲酸的乙腈配制成濃度為1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：移取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用含1%甲酸的乙腈稀釋配制成 0.2μg/L，1μg/L，5μg/L，10μg/L，25μg/L，50μg/L 系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3 樣品前處理

取代表性的紡織品試樣，剪成5mm×5mm左右的小片，混勻后，稱取1.0g（精確至0.01g），置于50mL反應(yīng)器中。往反應(yīng)器中準(zhǔn)確加入10mL的含1%甲酸的乙腈溶液，置于超聲波發(fā)生器中在常溫條件下萃取20min，取上清液用濾膜過(guò)濾后供儀器檢測(cè)。

1.4 儀器分析條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18柱（2.1mm×150mm，3.5μm）；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：10μL；流動(dòng)相：流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為5mmol/L乙酸銨+0.1%甲酸的緩沖液，流動(dòng)相A：流動(dòng)相B=70：30；流速：0.35mL/min；質(zhì)譜電離方式：電噴霧ESI；掃描方式：正離子；離子噴霧電壓：4000V；干燥氣溫度：350℃；干燥氣流速：10L/min；霧化器壓力：35psi；采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；定量離子對(duì)：m/z329.3＞313.2；定性離子對(duì)：m/z329.3＞208.2；碎裂電壓：120V；碰撞能量：42eV，50eV。

2 結(jié)果與討論

2.1 萃取劑的選擇

在固體樣品中孔雀石綠的提取，常用的萃取溶劑有乙腈、甲醇、二氯甲烷等。因此本試驗(yàn)分別考察了三種萃取溶劑對(duì)紡織品基質(zhì)中孔雀石綠的提取效果，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在本試驗(yàn)的考察范圍內(nèi)，三種萃取溶劑對(duì)孔雀石綠的提取回收率僅為59.3%～75.8%。有研究[6]發(fā)現(xiàn)孔雀石綠在酸性環(huán)境下比較穩(wěn)定，使用酸性溶劑提取有利于得到較高的回收率。因此，本試驗(yàn)嘗試往萃取溶劑乙腈中加入甲酸，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，使用含1%甲酸的乙腈溶液作為萃取劑，孔雀石綠的回收率可提高至97.5%。故文中將含1%甲酸的乙腈溶液作為孔雀石綠的萃取劑。

表1 萃取溶劑對(duì)孔雀石綠提取回收率的影響

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

試驗(yàn)分別采用ESI源中的正、負(fù)離子掃描模式對(duì)孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)孔雀石綠在正離子掃描模式下才能出峰。隨后，通過(guò)采用一級(jí)全掃描方式得到孔雀石綠質(zhì)譜圖來(lái)確定其準(zhǔn)分子離子即母離子為[M+H]+（m/z329.3）。再將母離子進(jìn)行子離子掃描，在所得的碎片離子中選擇兩個(gè)特征性較強(qiáng)且豐度較高的子離子即m/z313.2和m/z208.2。因此，試驗(yàn)最終確定m/z329.3＞313.2和m/z329.3＞208.2為定性離子對(duì)，其中m/z329.3＞313.2為定量離子對(duì)。進(jìn)一步優(yōu)化碎裂電壓和碰撞能量，當(dāng)碎裂電壓為120V，定量和定性離子對(duì)的碰撞能量分別為42V和50V時(shí)，離子的質(zhì)譜響應(yīng)最高。

2.3 色譜條件的優(yōu)化

使用液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)孔雀石綠常用乙腈-5mmol/L乙酸銨或乙腈-5mmol/L含0.1%甲酸的乙酸銨作為流動(dòng)相。本試驗(yàn)比較了兩種流動(dòng)相條件下孔雀石綠的分析效果，結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。結(jié)果可知：乙腈-5mmol/L乙酸銨為流動(dòng)相時(shí)，孔雀石綠的峰形峰寬較大；乙腈-5mmol/L含0.1%甲酸的乙酸銨作為流動(dòng)相時(shí)，孔雀石綠的峰寬大大減小，峰形非常尖銳且對(duì)稱，保留時(shí)間也有一定程度地縮短。因此，試驗(yàn)最終選用乙腈-5mmol/L含0.1%甲酸的乙酸銨作為流動(dòng)相。

圖1 乙腈-5mmol/L乙酸銨為流動(dòng)相的目標(biāo)物色譜圖

圖2 乙腈-5mmol/L乙酸銨（含0.1%甲酸）緩沖液為流動(dòng)相的目標(biāo)物色譜圖

進(jìn)一步考察乙腈-5mmol/L含0.1%甲酸的乙酸銨流動(dòng)相體系中乙腈的體積分?jǐn)?shù)對(duì)目標(biāo)物的洗脫效果的影響。該試驗(yàn)表明，乙腈的體積分?jǐn)?shù)在40%～100%范圍內(nèi)，隨著流動(dòng)相中乙腈的體積比例增大，分析物的保留時(shí)間逐漸縮短，峰寬逐漸變窄；當(dāng)乙腈體積比為40%～70%時(shí)，孔雀石綠的質(zhì)譜響應(yīng)隨著乙腈體積比增加而增高，乙腈體積比為70%時(shí)，孔雀石綠的質(zhì)譜響應(yīng)最強(qiáng)，之后隨著乙腈體積比的增加，其響應(yīng)反而逐漸減弱。綜合考慮目標(biāo)物的保留時(shí)間、峰形和質(zhì)譜響應(yīng)，本試驗(yàn)選擇體積比例為70%乙腈作為分析流動(dòng)相。

2.4 線性關(guān)系與定量限

按優(yōu)化的試驗(yàn)條件，對(duì)孔雀石綠的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（見(jiàn)1.2節(jié)）進(jìn)樣測(cè)定，得到線性方程、相關(guān)系數(shù)和定量限。結(jié)果表明，在本試驗(yàn)確定的0.2μg/L～50μg/L濃度范圍內(nèi)，目標(biāo)分析物的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)可達(dá)0.9996。以信噪比S/N≥10，該方法對(duì)孔雀石綠的定量限為2μg/kg。

2.5 方法的回收率和精密度

在空白紡織貼襯布中分別添加2μg/kg、50μg/kg、500μg/kg三個(gè)水平含量的目標(biāo)物，按優(yōu)化的試驗(yàn)進(jìn)行回收率試驗(yàn)，每個(gè)水平試驗(yàn)做7次平行，結(jié)果見(jiàn)表2，孔雀石綠的平均回收率為97.8%～100.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.1%～3.6%。

表2 方法的回收率和精密度結(jié)果（n=7）

3 結(jié)論

以含1%甲酸-乙腈為溶劑，超聲提取紡織品中的孔雀石綠，提取液經(jīng)過(guò)濾后注入高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中，以乙腈/5mmol/L乙酸銨（含0.1%甲酸）緩沖液（70/30，v/v）為流動(dòng)相，在正離子掃描和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的模式下進(jìn)行檢測(cè)。方法的平均回收率為97.8%～100.9%，RSD為2.1%～3.6%，定量限為2μg/kg。所建立的方法前處理簡(jiǎn)便，定量限低，準(zhǔn)確度和精密度高，可滿足紡織品中孔雀石綠的檢測(cè)要求。