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    金花葵花總黃酮的微膠囊條件優(yōu)化及其對(duì)冷鮮肉保鮮作用的研究

    2019-09-24 09:07:22王菲于蘇琦宋力侯雨歌
    應(yīng)用化工 2019年9期
    關(guān)鍵詞:芯壁汁液葵花

    王菲,于蘇琦,宋力,侯雨歌

    (遼寧石油化工大學(xué) 化學(xué)化工與環(huán)境學(xué)部,遼寧 撫順 113001)

    金花葵花黃酮是一種安全、無(wú)毒、易制備的生物活性物質(zhì),具有較好的抗氧化和抗菌等活性[1]。但若直接作為生物保鮮劑使用,其穩(wěn)定性稍差,且保鮮時(shí)間較短,實(shí)際應(yīng)用受到極大限制。

    冷鮮肉含豐富營(yíng)養(yǎng),但冷鮮肉如何保鮮成為業(yè)界面臨的難題[2]。冷鮮肉富有水分,長(zhǎng)時(shí)間、無(wú)任何措施的放置會(huì)出現(xiàn)干癟、腐爛等狀況,造成嚴(yán)重浪費(fèi)。通過(guò)微膠囊技術(shù)可以在一定程度上保護(hù)活性物質(zhì)不受外界不良因素(如光、熱等)的影響[3-4],穩(wěn)定性高、緩釋性好、產(chǎn)率高、保鮮效果理想,可控制水分流失,抑制微生物生長(zhǎng)與繁殖,延緩冷鮮肉發(fā)生腐敗變質(zhì)。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 試劑與儀器

    金花葵花,由遼寧恒生實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司提供;新鮮豬后腿肉,市售;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品,色譜純;無(wú)水乙醇、鹽酸、硝酸鋁、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、氯化鈉、硼酸、氧化鎂、溴甲酚綠、甲基紅、殼聚糖均為分析純;安琪酵母,購(gòu)自超市;酵母提取物、葡萄糖、蛋白胨、瓊脂粉均為生物試劑;去離子水,實(shí)驗(yàn)室自制。

    AR124CN電子天平;ALC-1100.2電子天平;UV-2600可見(jiàn)分光光度計(jì);LGJ-10型冷凍干燥機(jī);RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器;SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵。

    1.2 金花葵花黃酮酵母微膠囊制備

    1.2.1 金花葵花總黃酮的提取 準(zhǔn)確稱取一定量金花葵花粉末,按料液比1∶30 g/mL加入體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇溶液,在60 ℃水浴提取2.5 h,離心,取上清液,濃縮,冷凍干燥后備用。

    1.2.2 酵母細(xì)胞制備 稱取一定量安琪干酵母,按1∶20 g/mL加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)5% NaCl,在54 ℃水浴振蕩5 h,離心后水洗2次。冷凍干燥,得到酵母細(xì)胞。

    1.2.3 金花葵花總黃酮酵母微膠囊制備 稱取一定量酵母細(xì)胞,加入10 mL金花葵花總黃酮濃縮液,水浴振蕩6 h,離心,水洗3次。冷凍干燥,得到金花葵花總黃酮酵母微膠囊[5]。

    1.3 保鮮冷鮮肉

    1.3.1 冷鮮肉的處理 在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前,先用75%酒精進(jìn)行相應(yīng)實(shí)驗(yàn)用具的消毒滅菌工作,再經(jīng)20 min紫外照射滅菌處理。在無(wú)菌操作下,清理掉豬后腿冷鮮肉的筋、膜及脂肪,切成140 g/塊。實(shí)驗(yàn)分為4個(gè)實(shí)驗(yàn)組,即空白組、2%黃酮粗提液組、2%黃酮酵母微膠囊組(以黃酮含量計(jì))和2%殼聚糖組。在這3種不同保鮮液中進(jìn)行浸泡30 min,夾出并晾干,置于自封袋中排氣封口。與空白組一同放入4 ℃冰箱冷藏[6]。于第0,1,3,5,7,9 d取出,測(cè)定并計(jì)算各實(shí)驗(yàn)組中相關(guān)的微生物指標(biāo)和理化指標(biāo)。

    1.3.2 測(cè)定指標(biāo)

    1.3.2.1 汁液損失率 原料肉中汁液損失的質(zhì)量占原料肉的質(zhì)量百分比即為汁液損失率。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天稱取每塊冷鮮肉初始質(zhì)量(M)和托盤質(zhì)量(m)。于第1,3,5,7,9 d取出肉樣,將汁液倒盡,瀝干水分,再次稱取肉塊與托盤的總質(zhì)量(W),計(jì)算各實(shí)驗(yàn)組的汁液損失率(X,%)。

    1.3.2.2 揮發(fā)性鹽基氮(TVB-N) 參照GB/T 5009.228—2016,從各實(shí)驗(yàn)組稱取10.00 g肉樣,剪碎,放在三角瓶中,加入100 mL水,搖勻,浸泡0.5 h,過(guò)濾,留濾液。實(shí)驗(yàn)時(shí),事先在三角瓶中裝好已加入5~6滴混合指示液的2%硼酸吸收液10 mL,注意將蒸餾器的冷凝管下部插至三角瓶?jī)?nèi)液面下,以防漏氣。準(zhǔn)確吸取各實(shí)驗(yàn)組樣品濾液10 mL,加入蒸餾器反應(yīng)室中,加入5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù) 1% MgO混懸液,立即蓋塞,做好水封。通入加熱蒸汽發(fā)生器,當(dāng)蒸餾裝置中充滿蒸汽時(shí),立即關(guān)閉蒸汽出口管,從第1滴冷凝水產(chǎn)生時(shí)開始計(jì)時(shí),5 min后停止蒸餾。移走吸收液,用0.01 mol/L HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定,滴定終點(diǎn)為藍(lán)紫色[7]。同時(shí)做試劑空白。

    1.3.2.3 pH值 從各實(shí)驗(yàn)組稱取10.00 g樣品,剪碎,加入蒸餾水90 mL,振蕩0.5 h,過(guò)濾、取濾液,測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組的pH值。

    1.3.2.4 菌落總數(shù) 參照GB 4789.2—2010,在無(wú)菌條件下,從各實(shí)驗(yàn)組稱取10.00 g樣品,剪碎,置于事先盛有90 mL 0.85%無(wú)菌生理鹽水的三角瓶中,封口,于搖床中充分振搖3 min。吸取1 mL上清液,并進(jìn)行10倍遞增稀釋,從中挑選適當(dāng)稀釋度的樣液倒入,再慢慢倒入PCA培養(yǎng)基,于37 ℃恒溫培養(yǎng),于第1,3,5,7,9 d對(duì)各實(shí)驗(yàn)組分別進(jìn)行菌落總數(shù)的計(jì)數(shù)[7]。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 金花葵花總黃酮微膠囊制備條件優(yōu)化

    主要考察芯壁比(黃酮含量與預(yù)處理酵母細(xì)胞質(zhì)量之比)、振蕩溫度和振蕩時(shí)間對(duì)金花葵花總黃酮微膠囊包埋效果(包埋率)的影響。

    2.1.1 芯壁比對(duì)包埋率的影響 稱取一定量預(yù)處理過(guò)的酵母細(xì)胞6份,分別按芯壁比4∶1,2∶1,1∶1,1∶2,1∶3,1∶4加入10 mL總黃酮濃縮液,于60 ℃下恒溫水浴中振蕩6 h,離心、冷凍干燥,計(jì)算各實(shí)驗(yàn)組的包埋率,結(jié)果見(jiàn)圖1。

    圖1 芯壁比對(duì)包埋率的影響Fig.1 Effect of core wall

    由圖1可知,芯壁比增大時(shí),包埋率先緩慢增長(zhǎng),隨后快速上升,芯壁比1∶3時(shí)包埋率達(dá)到最大,隨后包埋率逐漸減小。這是因?yàn)榻湍讣?xì)胞對(duì)黃酮的包埋有一定的承載能力,因此隨芯壁比增加,酵母細(xì)胞對(duì)黃酮的包埋能力逐漸增強(qiáng),而當(dāng)芯壁比達(dá)到 1∶3 時(shí),酵母細(xì)胞對(duì)黃酮的包埋能力已經(jīng)飽和,若再繼續(xù)增加壁材用量,會(huì)出現(xiàn)包埋量超載的問(wèn)題,影響包埋率[6]。

    2.1.2 振蕩溫度對(duì)包埋率的影響 稱取一定量預(yù)處理過(guò)的酵母細(xì)胞5份,各按芯壁比1∶1加入10 mL總黃酮濃縮液,分別在30,40,50,60,70 ℃的恒溫水浴振蕩6 h,離心、冷凍干燥,計(jì)算各實(shí)驗(yàn)組的包埋率,結(jié)果見(jiàn)圖2。

    圖2 振蕩溫度對(duì)包埋率的影響Fig.2 Effect of vibration temperature

    由圖2可知,隨著振蕩溫度增加,包埋率先增大后逐漸減小。振蕩溫度為40 ℃時(shí)包埋率最大。主要是由于在一定振蕩溫度范圍內(nèi),溫度逐漸升高時(shí),黃酮分子熱運(yùn)動(dòng)加劇,有助于酵母細(xì)胞包埋黃酮。但當(dāng)溫度>40 ℃時(shí),分子熱運(yùn)動(dòng)過(guò)于劇烈,反而破壞包埋效果,包埋率顯著減小[8]。故振蕩的適宜溫度為40 ℃。

    2.1.3 振蕩時(shí)間對(duì)包埋率的影響 稱取一定量預(yù)處理過(guò)的酵母細(xì)胞5份,各按芯壁比1∶1加入10 mL總黃酮濃縮液,于60 ℃水浴中分別振蕩2,4,6,8,10 h后,離心、冷凍干燥,計(jì)算各實(shí)驗(yàn)組的包埋率,結(jié)果見(jiàn)圖3。

    圖3 振蕩時(shí)間對(duì)包埋率的影響Fig.3 Effect of vibration time

    由圖3可知,隨振蕩時(shí)間延長(zhǎng),包埋率先增大后逐漸減小,在振蕩7 h時(shí)包埋率達(dá)到最大值。這是因?yàn)榻湍讣?xì)胞主要是借助由細(xì)胞內(nèi)外濃度差而產(chǎn)生的擴(kuò)散作用進(jìn)行黃酮包埋[9]。振蕩初期,隨著時(shí)間延長(zhǎng),黃酮的擴(kuò)散作用加快,被酵母細(xì)胞很好地包埋,包埋率不斷增大。但繼續(xù)增加振蕩時(shí)間,反而導(dǎo)致已經(jīng)被包埋的黃酮從酵母細(xì)胞中擴(kuò)散出來(lái),使得包埋率驟降。故振蕩時(shí)間宜為7 h。

    2.1.4 正交實(shí)驗(yàn) 根據(jù)單因素的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,考察芯壁比、振蕩溫度和振蕩時(shí)間對(duì)微膠囊包埋率的影響,確定制備金花葵花總黃酮微膠囊化最適條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1,方差分析見(jiàn)表2。

    表1 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 1 The resalt of orthogonal test

    表2 方差分析結(jié)果Table 2 The result of variance analysis

    由表1可知,最佳因素水平組合為A2B2C1,即芯壁比為1∶3,振蕩溫度為30 ℃,振蕩時(shí)間為7 h。按此條件進(jìn)行3組平行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),測(cè)得包埋率分別為55.16%,50.33%,56.09%,平均包埋率為53.86%,大于表1中所有實(shí)驗(yàn)組的最大包埋值(52.3%),故此因素水平組合即為金花葵花總黃酮酵母微膠囊化的最適條件。將3組驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)所制備的微膠囊進(jìn)行混合,測(cè)定并計(jì)算得到其中黃酮含量為55.19 mg/g。

    由表1可知,各因素對(duì)包埋效果的影響程度為:A>C>B,即芯壁比>振蕩溫度>振蕩時(shí)間,其中,芯壁比對(duì)包埋率影響最大。

    對(duì)于表2,查F分布臨界表,F(xiàn)0.01(2,2)=99,F(xiàn)0.05(2,2)=19,F(xiàn)0.1(2,2)=9;當(dāng)F(2,2)>F0.01(2,2)時(shí)顯著記為**,當(dāng)F(2,2)值介于F0.05(2,2)~F0.01(2,2)之間時(shí)顯著記為*,當(dāng)F(2,2)

    2.2 冷鮮肉保鮮效果

    2.2.1 汁液損失率 在實(shí)際的加工生產(chǎn)和貯存中,冷鮮肉常常會(huì)發(fā)生揮發(fā)、汁液流失等現(xiàn)象,會(huì)嚴(yán)重影響其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、感官價(jià)值和銷售價(jià)值,故可用汁液損失率來(lái)衡量肉質(zhì)持水力[10]。各實(shí)驗(yàn)組中汁液損失率見(jiàn)圖4。

    圖4 各實(shí)驗(yàn)組中汁液損失率的變化Fig.4 Changes of the juice loss rate in each experimental group

    由圖4可知,冷鮮肉保藏時(shí)間越長(zhǎng),其汁液損失率越大。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,黃酮粗提液組汁液損失率變化幅度最大,酵母微膠囊組和空白組次之,而殼聚糖組汁液損失率變化幅度最小。在實(shí)驗(yàn)的前5 d 里,酵母微膠囊組的汁液損失率變化最小,這是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)初期,即前5 d的時(shí)間里,微膠囊組冷鮮肉的表面黃酮濃度較低,故與黃酮粗提液組相比,滲透到肉內(nèi)部的黃酮量更少,故持水力與空白組接近,且好于黃酮粗提液組;但隨保存時(shí)間延長(zhǎng),第5 d以后,微膠囊組中的黃酮不斷被釋放出來(lái),造成冷鮮肉表面不斷滲透進(jìn)黃酮,形成濃度差,從而導(dǎo)致冷鮮肉失水加劇。綜上分析可知,酵母微膠囊及殼聚糖都有一定的持水作用。

    2.2.2 揮發(fā)性鹽基氮(TVB-N) 由于冷鮮肉自身含有酶類及微生物,此外還受到來(lái)自于環(huán)境中微生物的污染,故在貯存期間,其所含蛋白質(zhì)會(huì)被酶及微生物分解,從而產(chǎn)生具有揮發(fā)性的堿性含氮物質(zhì),如氨及胺類等。變質(zhì)肉中揮發(fā)性鹽基氮含量高(TVB-N),大于20 mg/100 g[5]。不同實(shí)驗(yàn)組的TVB-N含量見(jiàn)圖5。

    由圖5可知,不同實(shí)驗(yàn)組的TVB-N含量不同,但變化規(guī)律一致。酵母微膠囊處理、黃酮粗提液組以及殼聚糖組在第9 d時(shí),其所含TVB-N含量均低于20 mg/100 g,均未超標(biāo)。但空白組TVB-N含量一直高于其他三組,且在第7 d時(shí)數(shù)值高于20 mg/100 g,說(shuō)明此時(shí)肉質(zhì)已經(jīng)變質(zhì)。結(jié)果表明,酵母微膠囊組TVB-N明顯小于空白組,其能有效抑制微生物的生長(zhǎng)繁殖,延長(zhǎng)貨架期。

    圖5 各實(shí)驗(yàn)組中揮發(fā)性鹽基氮的變化Fig.5 Changes of TVB-N in each experimental group

    2.2.3 pH值 冷鮮肉在貯存過(guò)程中pH值會(huì)逐漸增大,肉質(zhì)變差,這主要是因?yàn)槔漉r肉中蛋白質(zhì)會(huì)被其所含酶和微生物分解而產(chǎn)生氨及胺類等堿性化合物[10]。各實(shí)驗(yàn)組中冷鮮肉pH值見(jiàn)圖6。

    圖6 各實(shí)驗(yàn)組中pH的變化Fig.6 Changes of pH in each experimental group

    由圖6可知,各實(shí)驗(yàn)組中冷鮮肉pH值均隨時(shí)間延長(zhǎng)而不斷增大,但增長(zhǎng)幅度各不相同,即黃酮粗提液組<殼聚糖組<酵母微膠囊組<空白組,即黃酮粗提液組能較好地抑制pH增長(zhǎng)。這是黃酮粗提液組中黃酮含量很高,能效抑制微生物生長(zhǎng),延緩蛋白質(zhì)分解,使pH保持較低值。殼聚糖組中殼聚糖具有成膜性,能減小肉質(zhì)與氧氣的接觸,抑制微生物生長(zhǎng)繁殖以及對(duì)蛋白質(zhì)的分解作用。酵母微膠囊組pH值比前兩組稍高一些,主要是由于酵母微膠囊組具有緩慢釋放黃酮的作用,開始幾天黃酮濃度較低,抑菌作用較弱,隨時(shí)間延長(zhǎng),大量黃酮被釋放出來(lái),有效抑制微生物的生長(zhǎng),故第7 d以后,pH值激增的趨勢(shì)被抑制。綜上可知,3種保鮮液對(duì)冷鮮肉均具有一定的保鮮作用。

    2.2.4 菌落總數(shù) 隨保存時(shí)間延長(zhǎng),冷鮮肉中的菌落總數(shù)逐漸增多,當(dāng)達(dá)到6 lgcfu/g時(shí),說(shuō)明肉已經(jīng)腐敗變質(zhì)[3]。指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為:一級(jí)鮮肉菌落總數(shù)≤104cfu/g;二級(jí)鮮肉104cfu/g<菌落總數(shù)≤106cfu/g;腐敗肉菌落總數(shù)>106cfu/g[10-11]。各實(shí)驗(yàn)組冷鮮肉中的菌落總數(shù)見(jiàn)圖7。

    圖7 各實(shí)驗(yàn)組中菌落總數(shù)的變化Fig.7 Changes of colonies number in each experimental group

    由圖7可知,各實(shí)驗(yàn)組中保鮮劑的抑菌性能力不同,即酵母微膠囊組>殼聚糖組>黃酮粗提液組>空白組。經(jīng)過(guò)不同保鮮液處理的實(shí)驗(yàn)組,其菌落總數(shù)均明顯低于空白組。且空白組在第9 d時(shí)菌落總數(shù)為8.15 lgcfu/g,已達(dá)到腐敗肉的標(biāo)準(zhǔn)。而另外三組在實(shí)驗(yàn)的9 d內(nèi),仍處于二級(jí)鮮肉標(biāo)準(zhǔn)。其中,酵母微膠囊組表現(xiàn)的抑菌性最佳,這是由于黃酮較好的抑菌性以及微膠囊的緩釋作用而實(shí)現(xiàn)的,且在第9 d時(shí)菌落總數(shù)為6.51 lgcfu/g,為所有實(shí)驗(yàn)組中的最低值。表明酵母微膠囊組具有較好的抑菌效果。

    3 結(jié)論

    (1)金花葵花總黃酮的酵母微膠囊化最適條件:芯壁比1∶3,振蕩溫度30 ℃,振蕩時(shí)間7 h,此時(shí)微膠囊包埋率可達(dá)53.86%。

    (2)與空白組相比,各保鮮液對(duì)冷鮮肉都有一定保鮮作用,酵母微膠囊與殼聚糖的保鮮效果十分接近。金花葵花總黃酮酵母微膠囊在汁液損失率、揮發(fā)性鹽基氮和菌落總數(shù)實(shí)驗(yàn)中均表現(xiàn)出了較好的保鮮,可保鮮9 d左右。

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