李婉平,劉敏,王皆行,姚衡,成正龍,竇俊霞,周曉明,房玉林,孫翔宇
炎熱氣候條件下抗蒸騰劑對(duì)釀酒葡萄光合特性與葡萄酒品質(zhì)的影響
李婉平1,劉敏1,王皆行1,姚衡1,成正龍2,竇俊霞2,周曉明3,房玉林1,孫翔宇1
(1西北農(nóng)林科技大學(xué)葡萄酒學(xué)院/陜西省葡萄與葡萄酒工程技術(shù)研究中心,陜西楊凌 712100;2新疆瑞泰青林酒業(yè)有限公司,新疆和碩 841200;3新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院,烏魯木齊 830091)
針對(duì)氣候炎熱葡萄產(chǎn)區(qū)夏季高溫導(dǎo)致的高溫脅迫、果實(shí)成熟過快、糖高酸低,進(jìn)而影響葡萄酒品質(zhì)等現(xiàn)狀,探討炎熱氣候條件下噴施抗蒸騰劑(Anti-transpirant)對(duì)釀酒葡萄光合特性、生理指標(biāo)、果實(shí)與葡萄酒相關(guān)品質(zhì)的綜合影響,旨在為改善炎熱氣候產(chǎn)區(qū)釀酒葡萄與葡萄酒綜合品質(zhì)提供理論依據(jù)。試驗(yàn)于2017年在新疆和碩縣開展,以釀酒葡萄‘赤霞珠’(L. cv. Cabernet Sauvignon,CS)和‘雷司令’(L.cv. Riesling)為材料,于2017年7月26日、8月9日兩次噴施抗蒸騰劑后,對(duì)葉片采樣并測(cè)定光合指標(biāo)、氣孔特性、生理指標(biāo),在果實(shí)成熟過程中監(jiān)測(cè)成熟度變化;并利用超高效液相色譜法(ultra performance liquid chromatography,UPLC)對(duì)成熟期果實(shí)中葡萄糖與果糖含量進(jìn)行測(cè)定;采收后(‘雷司令’:8月16日;‘赤霞珠’:9月8日)采用小容器釀造法釀造赤霞珠干紅與‘雷司令’干白葡萄酒,終止發(fā)酵后測(cè)定葡萄酒的基本理化指標(biāo)??拐趄v劑顯著降低了釀酒葡萄的凈光合速率與氣孔導(dǎo)度,但胞間CO2濃度、蒸騰速率在兩個(gè)品種中表現(xiàn)不一致;利用掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn),抗蒸騰劑處理顯著減小了‘赤霞珠’和‘雷司令’的未成熟葉片氣孔寬度(41.02%、46.94%)、開張程度(59.59%、67.43%)及分布密度(13.84%、4.97%),從而在炎熱氣候條件下降低水分散失;抗蒸騰劑處理顯著降低了葉片中丙二醛、游離脯氨酸含量,并降低了‘雷司令’的可溶性蛋白含量,對(duì)葉綠素含量無顯著影響,有利于植株減輕高溫脅迫;抗蒸騰劑處理后,能夠顯著延緩果實(shí)還原糖含量積累和有機(jī)酸的降解,成熟期‘赤霞珠’與‘雷司令’果實(shí)中總還原糖含量分別降低6.6 g·L-1、11.7 g·L-1,總酸含量分別增加0.57 g·L-1、0.76 g·L-1,葡萄糖和果糖含量均顯著降低,‘赤霞珠’和‘雷司令’葡萄酒的酒精度分別降低了0.71%、0.39%。抗蒸騰劑具有調(diào)節(jié)光合特性、減少水分蒸發(fā)、提高抗高溫能力、降糖增酸、降低酒精度的作用,具有易操作、低成本、綜合效果好等優(yōu)勢(shì)。
抗蒸騰劑;釀酒葡萄;光合特性;氣孔特性;生理指標(biāo);酒精度
【研究意義】釀酒葡萄的品質(zhì)主要取決于其自身的遺傳特性和環(huán)境條件,適宜的生態(tài)條件是保證釀酒葡萄優(yōu)良品質(zhì)的重要因素,而氣候條件具有決定生產(chǎn)方向(酒型、酒質(zhì))的主導(dǎo)作用[1]。全球氣候正在發(fā)生變化,平均氣溫顯著上升[2]。炎熱氣候條件對(duì)釀酒葡萄與葡萄酒品質(zhì)產(chǎn)生不利影響的現(xiàn)象普遍發(fā)生。氣孔能控制植物光合作用、CO2氣體交換和蒸騰作用水分的散失,是連接光合作用、蒸騰作用的重要樞紐。因此,從農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的角度出發(fā),使用抗蒸騰劑(Anti-transpirant)控制釀酒葡萄氣孔的運(yùn)動(dòng)從而減少植株蒸騰,并起到緩解高溫脅迫、調(diào)節(jié)成熟度的作用,對(duì)提高炎熱氣候產(chǎn)區(qū)葡萄與葡萄酒品質(zhì)具有重要意義?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】抗蒸騰劑是作用于植物表面,能夠調(diào)節(jié)植物蒸騰作用,減少水分損失的一類物質(zhì)的總稱[3]??拐趄v劑的應(yīng)用自20世紀(jì)60—70年代受到了很多關(guān)注,因?yàn)槠溆锌赡芄?jié)約大量水,從而減輕因缺水而造成的植物損害[4]。目前,不同類型的抗蒸騰劑已被成功應(yīng)用在多種園藝作物上,如在對(duì)玉米[5]、大豆[6]、小麥[7]、番茄[8]等開展的機(jī)理研究中,普遍認(rèn)為在一定條件下使用抗蒸騰劑,可適當(dāng)減少氣孔開張度或關(guān)閉部分氣孔從而降低植物的蒸騰作用,具有顯著提高植物抗旱能力、減少水分散失、改善果實(shí)品質(zhì)及增產(chǎn)的作用,而對(duì)光合作用、呼吸作用及其他生理代謝活動(dòng)沒有明顯的不利影響。除此之外,抗蒸騰劑在延長(zhǎng)果實(shí)保質(zhì)期、防治病蟲害、花卉保鮮和提高移栽幼苗的成活率等方面也有廣泛應(yīng)用。代謝型抗蒸騰劑是抗蒸騰劑的一種代表類型,能夠通過影響氣孔周圍的保衛(wèi)細(xì)胞來阻止氣孔完全打開,從而抑制蒸騰,但不影響角質(zhì)蒸騰阻力和界層水分?jǐn)U散阻力[9]。以黃腐酸(fulvicacid,F(xiàn)A)為主要成分的FA抗蒸騰,是代謝型抗蒸騰劑的典型代表,其具有代謝與成膜的特點(diǎn)。20世紀(jì)80—90年代,河南省科學(xué)院化學(xué)研究所依次開發(fā)研制了“抗旱劑一號(hào)”“FA旱地龍”“農(nóng)氣一號(hào)”等以黃腐酸為主要成分的抗蒸騰劑,經(jīng)過逐漸轉(zhuǎn)變名稱和劑型后,研究成果及生產(chǎn)應(yīng)用規(guī)模與當(dāng)時(shí)國(guó)外同類研究相比均位于國(guó)際領(lǐng)先[10]。目前,F(xiàn)A抗蒸騰劑已被廣泛應(yīng)用于小麥、玉米、水稻、棉化、花生、甘薯、煙草及蔬菜的抗旱生產(chǎn)與品質(zhì)提升中,取得了明顯的作用效果?!颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】炎熱干旱氣候條件下,葡萄葉片易枯黃脫落,或在枝梢葉片局部呈灼傷枯焦斑,嚴(yán)重影響葡萄植株的正常生長(zhǎng)。同時(shí),葡萄植株在炎熱氣候條件下為了防止灼傷并降低葉溫,其葉片蒸騰散失大量水分,造成耗水。隨之而來的問題還有由于氣候炎熱使葡萄果實(shí)的糖分快速積累而過早成熟,從而導(dǎo)致最終釀造的葡萄酒酒精度過高[11-13]、低酸、顏色欠佳[14]、微生物穩(wěn)定性降低及非典型香氣的產(chǎn)生[15-16]。新疆是我國(guó)重要的釀酒葡萄和鮮食葡萄產(chǎn)區(qū),夏季頻發(fā)高溫天氣,急需一種合適的栽培管理方法來解決高溫帶來的不良影響。目前,F(xiàn)A已被廣泛應(yīng)用于林業(yè)、農(nóng)業(yè)、草業(yè)的相關(guān)研究領(lǐng)域中,但關(guān)于炎熱氣候條件下抗蒸騰劑對(duì)釀酒葡萄的應(yīng)用效果的相關(guān)研究較少,抗蒸騰劑對(duì)釀酒葡萄品質(zhì)的綜合影響也還不夠清楚?!緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究在具有典型炎熱氣候條件的新疆產(chǎn)區(qū),以釀酒葡萄‘赤霞珠’和‘雷司令’為試驗(yàn)材料開展FA抗蒸騰劑噴施試驗(yàn),探究抗蒸騰劑對(duì)炎熱氣候條件下釀酒葡萄植株光合、生理、果實(shí)及葡萄酒品質(zhì)的綜合影響,為研究新疆釀酒葡萄在炎熱氣候條件下增強(qiáng)植株抗炎熱氣候能力、調(diào)控果實(shí)成熟度、改善葡萄與葡萄酒綜合品質(zhì)等提供理論依據(jù)。
試驗(yàn)地點(diǎn)位于新疆和碩縣國(guó)菲酒莊葡萄園(42°2′ N,87°3′ E)。試驗(yàn)品種為釀酒葡萄‘赤霞珠’(L. cv. Cabernet Sauvignon,CS)和‘雷司令’(L. cv. Riesling)。5年生自根苗,單籬架式,龍干樹形,株行距0.5 m×4.0 m,南北行向,規(guī)范化田間管理。試驗(yàn)所用抗蒸騰劑為FA“旱地龍”新型植物抗蒸騰劑,新疆匯通旱地龍腐植酸有限責(zé)任公司產(chǎn)品(黃腐酸≥30%)。
LI-6400型光合儀(美國(guó)LI-COR公司),S-4800型冷場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡(日本日立公司),UV-1700紫外分光光度計(jì)(日本島津公司),LC-30A超高效液相色譜儀(日本島津公司),CentriVap型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(美國(guó)LABCONCO公司),RC-5C-PLUS型高速冷凍臺(tái)式離心機(jī)(美國(guó)Kendro公司),PB-10標(biāo)準(zhǔn)型pH計(jì)(德國(guó)Sartorius)。
分別在‘赤霞珠’與‘雷司令’試驗(yàn)田選取兩個(gè)相鄰行作為試驗(yàn)小區(qū),每個(gè)小區(qū)除去地頭兩個(gè)水泥柱距離,向后選擇5個(gè)水泥柱中葡萄植株作為試驗(yàn)材料(每個(gè)水泥柱間隔中栽植6—8株)。兩個(gè)品種的處理時(shí)間均為2017年7月26日、8月9日兩次(處于‘赤霞珠’果實(shí)轉(zhuǎn)色前、后期)?!嘞贾椤c‘雷司令’對(duì)照組噴蒸餾水,試驗(yàn)組噴施稀釋600倍的FA“旱地龍”。噴施時(shí)選取在19:00之后(傍晚),葉片正、反兩面噴施,為了確??拐趄v劑的持久性和效果發(fā)揮,每次重復(fù)噴施兩次以充分覆蓋于葉片表面?!姿玖睢墒諘r(shí)間為8月16日,‘赤霞珠’為9月8日。
光合測(cè)定、生理指標(biāo)測(cè)定與氣孔電鏡掃描的日期標(biāo)注及田間溫、濕度測(cè)定情況如圖1所示。
葉片采樣:首次噴施后次日開始的第2、5、8、11和14天,各處理的水泥柱間選擇3株葡萄(共15株),選擇每個(gè)植株結(jié)果母枝基部向上的第5片平整光潔、長(zhǎng)勢(shì)良好、大小一致的葉片作為光合指標(biāo)測(cè)定對(duì)象,并做標(biāo)記;首次噴施后次日開始的第1、2、4、6、8、11和14天,采相同位置的葉片用于生理指標(biāo)測(cè)定;噴施后第7天,用相同的方法選取每個(gè)植株長(zhǎng)度生長(zhǎng)一致的3個(gè)新梢,每個(gè)新梢選取頂端向下的第5片葉(為未成熟葉)用于電鏡掃描觀察。
果實(shí)采樣:果實(shí)成熟度監(jiān)測(cè)為每隔10 d左右進(jìn)行一次采樣,待葡萄成熟時(shí)采樣間隔時(shí)間縮短至3—5 d。采樣時(shí),每個(gè)處理隨機(jī)抽取5株葡萄,分別采陰、陽(yáng)面的上、中、下各1穗葡萄,每穗分別采陰、陽(yáng)面上、中、下各2粒葡萄(每個(gè)處理共計(jì)采取180粒)。待葡萄完全成熟后每處理采樣6—7 kg,測(cè)定還原糖、總酸及可溶性單糖含量,其余樣品按照干紅、干白葡萄酒標(biāo)準(zhǔn)工藝釀制,葡萄酒釀造完成后測(cè)定其基本理化指標(biāo)。
1.5.1 光合特性 每次噴施后次日開始的第2、5、8、11、14天,于晴天上午09:00—11:00采用LI-6400型光合儀測(cè)定蒸騰速率(transpiration rate,Tr)、凈光合速率(net photosynthetic rate,Pn)、氣孔導(dǎo)度(stomatal conductance,Gs)、胞間二氧化碳濃度(intercellular CO2concentration,Ci),設(shè)定光強(qiáng)為1 800 μmol?m-2?s-1。每處理重復(fù)測(cè)定3次,取平均值。
圖1 果實(shí)周圍日平均溫度、平均濕度的變化情況及采樣日期
1.5.2 葉綠素含量 葉綠素含量的測(cè)定采用丙酮浸提法[17]。
1.5.3 滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量 丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的測(cè)定采用硫代巴比妥酸法[17];游離脯氨酸含量采用磺基水楊酸提取,茚三酮比色方法測(cè)定[18];可溶性蛋白含量的測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法[17]。
1.5.4 掃描電鏡觀察 蒸餾水清洗噴施抗蒸騰劑7 d的葉片,取主葉脈兩側(cè)的部分,用刀片切成5 mm×5 mm的小方塊,將其于2 mL離心管中,用pH 6.8、4%戊二醛固定。用0.1 mol?L-1、pH 6.8的PBS緩沖液清洗4次,每次10 min。用30%、50%、70%、90%乙醇脫水各一次,每次20 min,再用100%乙醇脫水3次,每次30 min,然后用乙酸異戊酯置換。用英國(guó)Quorum K850臨界點(diǎn)干燥儀干燥樣品,用日本日立E-1045離子濺射儀進(jìn)行噴金,在日本日立S-4800冷場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡下進(jìn)行觀察和拍照。
1.5.5 葡萄酒釀造工藝 將葡萄采收后,除梗破碎,采用小容器釀造法進(jìn)行發(fā)酵,溫度控制在25—28℃,當(dāng)還原糖小于2 g?L-1時(shí)終止發(fā)酵,過濾裝瓶[19]。
1.5.6 葡萄與葡萄酒基本理化指標(biāo) 還原糖(reducing sugar,RS)含量采用斐林試劑滴定法測(cè)定,以葡萄糖計(jì);總酸(titrable acidity,TAC)含量采用NaOH滴定法測(cè)定,以酒石酸計(jì);pH用pH計(jì)測(cè)定;揮發(fā)酸用水蒸汽蒸餾法(醋酸計(jì));酒精度用密度瓶法測(cè)定;葡萄糖、果糖樣品采用UPLC測(cè)定,具體方法如下。
標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:稱取葡萄糖、果糖各1.00 g于10 mL容量瓶,定容得到100 g?L-1混合標(biāo)液,純水依次配制為100、50、40、30、20、10、5和2.5 g?L-1標(biāo)液,0.45 μm濾膜過濾,保存于-20℃冰箱。
樣品提?。汗麑?shí)去掉籽、皮后液氮研磨,稱取3.00 g于15 mL離心管,80%乙醇溶液加6 mL,超聲20 min(35℃),離心10 min(8 000 r/min、20℃),重復(fù)3次提取步驟,合并上清液后減壓濃縮(35℃),定容至10 mL,0.45 μm濾膜過濾。
色譜條件:ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)色譜柱;流動(dòng)相為乙腈-水(80﹕20,v/v);柱溫:40℃;進(jìn)樣量:20 μL;流速:1.2 mL?min-1;檢測(cè)器:示差檢測(cè)器;分析時(shí)間:15 min。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量計(jì)算。
采用Microsoft Office 2007處理數(shù)據(jù);SPSS20.0進(jìn)行單因素方差分析(<0.05,Duncan)、檢驗(yàn);GraphPad Prisim 6.0繪圖。
圖2-A表示植株凈光合速率變化情況。噴施抗蒸騰劑后次日開始的第2天,抗蒸騰劑較對(duì)照組就表現(xiàn)出了顯著差異,在隨后的2—14 d內(nèi),除第5天,Ri-CK(‘雷司令’-對(duì)照組,下同)與Ri-AT(雷司令-抗蒸騰劑處理組,下同)間無顯著差異外,其余CS-AT(‘赤霞珠’-抗蒸騰劑處理組,下同)和Ri-AT處理均始終顯著降低了葡萄的凈光合速率。整體分析,相比CS-CK(‘赤霞珠’-對(duì)照組,下同)、Ri-CK分別平均顯著降低光合速率1.09和1.62 μmol?m-2?s-1,降幅分別為11.25%、17.66%,對(duì)‘赤霞珠’與‘雷司令’葡萄凈光合速率的影響均達(dá)到顯著水平(<0.05)。
圖2-B表示蒸騰速率變化情況。炎熱氣候條件下,噴施抗蒸騰劑后的2—14 d內(nèi),由于測(cè)定日期的氣溫呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì),因此,測(cè)定結(jié)果顯示各對(duì)照組和處理組的蒸騰速率逐漸下降。但整體分析,抗蒸騰劑分別平均降低‘赤霞珠’和‘雷司令’蒸騰速率0.70和1.37 mmol?m-2?s-1,降幅分別為7.23%、15.45%,對(duì)‘雷司令’蒸騰速率的降低作用達(dá)到顯著水平(<0.05)。
圖2-C表示氣孔導(dǎo)度變化情況。噴施抗蒸騰劑后,‘赤霞珠’氣孔導(dǎo)度持續(xù)下降,而‘雷司令’在噴施后2—5 d中略有提高后逐漸下降,可能與當(dāng)?shù)爻霈F(xiàn)的短暫氣候田間變化情況有關(guān)(期間溫度不斷降低,濕度先升高后下降)。整體分析,抗蒸騰劑分別平均降低‘赤霞珠’和‘雷司令’氣孔導(dǎo)度60.82 mmol?m-2?s-1、50.50 mmol?m-2?s-1,降幅分別為16.55%、18.35%,對(duì)兩個(gè)品種氣孔導(dǎo)度的降低作用均達(dá)到顯著水平(<0.05)。
圖2-D表示胞間CO2濃度變化情況。各處理的胞間CO2濃度測(cè)定時(shí)大體趨勢(shì)表現(xiàn)略有提高后逐漸降低,在第5天時(shí)濃度最高,濃度分別為166.14和159.13 μmol?m-2?s-1,這可能是由于第5天在所有測(cè)定日期內(nèi)氣溫最高(30.6℃),濕度最低(42.2% RH),短暫的氣候原因提高了各處理光合作用。但整體分析可知,抗蒸騰劑分別平均降低‘赤霞珠’和‘雷司令’氣孔導(dǎo)度4.60和1.82 μmol?m-2?s-1,降幅分別為2.90%、1.20%,對(duì)‘赤霞珠’葡萄胞間CO2濃度的降低作用達(dá)到顯著水平(<0.05)。
綜上,抗蒸騰劑在處理后第2天即對(duì)‘赤霞珠’與‘雷司令’各光合指標(biāo)形成顯著影響。顯著降低了‘赤霞珠’葡萄的凈光合速率、氣孔導(dǎo)度、胞間CO2濃度;對(duì)于‘雷司令’,顯著降低了該品種的凈光合速率、氣孔導(dǎo)度與蒸騰速率。
不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下同 Different lowercase letters indicate significant differences (P<0.05). The same as below
從圖3可以看出,由300倍放大圖可見抗蒸騰劑處理使葉片表面氣孔變得稀疏,3 000倍放大后清晰可見氣孔開張度明顯減小,出現(xiàn)閉合趨勢(shì)。由表1可知,相比對(duì)照組,抗蒸騰劑處理顯著減小‘雷司令’葉片氣孔各項(xiàng)特性指標(biāo):氣孔長(zhǎng)度減小5.14 μm(25.21%)、氣孔寬度減小4.01 μm(46.94%)、氣孔開張程度減小2.42 μm(67.43%)、氣孔密度減少33.49個(gè)/mm2(4.97%)。抗蒸騰劑可以減小‘赤霞珠’葉片的氣孔長(zhǎng)度1.76 μm,未達(dá)到顯著水平,但顯著減小氣孔寬度3.10 μm(41.02%)、氣孔開張程度2.47 μm(59.59%)、氣孔密度26.4個(gè)/mm2(13.84%)。說明抗蒸騰劑可以顯著影響葡萄葉片表面氣孔分布及開張情況,可降低水分大量散失,在炎熱氣候條件下對(duì)植株內(nèi)部生理起到保持水分的作用。
A: CS-CK(×300); B: CS-AT(×300); C: Ri-CK(×300); D: Ri-AT(×300); E: CS-CK(×3000); F: CS-AT(×3000); G: Ri-CK(×3000); H: Ri-AT(×3000)
表1 抗蒸騰劑對(duì)炎熱氣候條件下葡萄葉片表皮氣孔特性的影響
指標(biāo)重復(fù)測(cè)定3次,結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示;同列不同字母表示處理間在0.05水平存在顯著性差異。下同
The indicator was repeatedly measured 3 times and the results were expressed as mean ± standard deviation; Different letters inthe same column indicate significant difference among treatment at 0.05 level. The same as below
圖4-A表示MDA含量變化。‘雷司令’MDA含量全程(1—14 d)顯著高于‘赤霞珠’,在測(cè)定日期內(nèi)由于高溫作用下MDA含量逐漸升高,但在第14天,CS-AT、Ri-AT的MDA含量相比于對(duì)照分別降低了3.12和1.66 μmol?g-1FW,且抗蒸騰劑分別平均降低‘赤霞珠’和‘雷司令’MDA含量3.04和2.67 μmol?g-1FW,降幅分別為12.22%、7.98%,均達(dá)到顯著水平(<0.05)。
圖4-B表示游離脯氨酸含量變化。高溫氣候條件下,處理后第2天各處理游離脯氨酸濃度達(dá)到峰值,隨著抗蒸騰劑作用效果的發(fā)揮,之后各處理植株游離脯氨酸含量趨于平穩(wěn)。抗蒸騰劑處理后,全程分別平均降低‘赤霞珠’和‘雷司令’游離脯氨酸含量4.32和3.17 μg?g-1,降幅分別為18.82%、17.57%,均達(dá)到顯著水平(<0.05)。
圖4-C表示可溶性蛋白含量。隨著處理天數(shù)的延長(zhǎng),各處理可溶性蛋白含量有逐漸升高的趨勢(shì),但相同測(cè)定日期內(nèi),抗蒸騰劑對(duì)‘雷司令’的可溶性蛋白含量均有顯著降低作用。整體分析,抗蒸騰劑分別平均降低‘赤霞珠’和‘雷司令’可溶性蛋白含量0.53和4.92 mg?g-1FW,降幅分別為5.06%、30.48%,對(duì)‘雷司令’可溶性蛋白含量的降低作用達(dá)到顯著水平(<0.05)。
圖4-D表示葉綠素含量變化。CS-CK、CS-AT、Ri-CK、Ri-AT全程平均葉綠素含量分別為2.49、2.55、3.05和3.20mg?g-1,‘雷司令’各處理葉綠素含量明顯高于‘赤霞珠’??拐趄v劑處理后,對(duì)‘赤霞珠’與‘雷司令’葉綠素的影響未達(dá)到顯著水平(>0.05)。
綜上,抗蒸騰劑處理降低了‘赤霞珠’和‘雷司令’的MDA、游離脯氨酸含量,此外,降低了‘雷司令’的可溶性蛋白含量,且對(duì)兩個(gè)品種葉綠素含量均無顯著影響。說明炎熱氣候條件下,抗蒸騰劑對(duì)緩解‘赤霞珠’與‘雷司令’植株生理有較明顯效果,對(duì)提高抵御高溫能力有顯著作用。
圖4 抗蒸騰劑對(duì)葉片MDA(A)、游離脯氨酸(B)、可溶性蛋白(C)、葉綠素含量(D)的影響
2.4.1 對(duì)果實(shí)中總還原糖、總酸、葡萄糖及果糖的影響 由圖5可知,對(duì)于‘雷司令’與‘赤霞珠’,噴水對(duì)照和抗蒸騰劑處理的果實(shí)還原糖含量與總酸的變化趨勢(shì)基本同步,進(jìn)入‘赤霞珠’轉(zhuǎn)色期后,還原糖含量總體呈現(xiàn)上升趨勢(shì),且增長(zhǎng)速度較快,進(jìn)入成熟期后還原糖增長(zhǎng)速度變緩,而總酸含量總體呈現(xiàn)下降趨勢(shì),但各處理在含量上有所不同;抗蒸騰劑處理的‘赤霞珠’‘雷司令’果實(shí)中總酸含量顯著高于對(duì)照(<0.05),而其還原糖含量顯著低于對(duì)照(<0.05),表明抗蒸騰劑處理具有顯著的降糖增酸的作用。
具體分析,隨著果實(shí)的成熟,還原糖含量不斷升高,且伴隨著總酸逐漸下降?!嘞贾椤?月23日還原糖積累迅速,到9月5日之后升高速度減慢,采收時(shí)(9月8日)抗蒸騰劑處理和對(duì)照的‘赤霞珠’果實(shí)中總還原糖含量分別為250.4和257.0 g?L-1,總酸含量分別為8.52和7.95 g?L-1,抗蒸騰劑降低了‘赤霞珠’總還原糖含量6.6 g?L-1,提高總酸含量0.57 g?L-1(圖5-A)?!姿玖睢?月23日還原糖快速積累,到8月14日之后升高緩慢,采收時(shí)(8月16日)抗蒸騰劑處理和對(duì)照組‘雷司令’的果實(shí)中總還原糖含量分別為225.4和237.1 g?L-1,總酸含量分別為8.63和7.87 g?L-1,抗蒸騰劑分別降低了‘雷司令’總還原糖11.7 g?L-1,提高了總酸含量0.76 g?L-1(圖5-B)。
為研究抗蒸騰劑對(duì)葡萄果實(shí)中糖分積累的具體影響,試驗(yàn)利用UPLC測(cè)定了各處理采收時(shí)可溶性單體糖的含量。由表2可知,抗蒸騰劑處理后,采收期‘赤霞珠’果實(shí)中葡萄糖與果糖含量分別顯著降低了8.89%、10.81%,‘雷司令’果實(shí)葡萄糖與果糖含量分別顯著降低了10.60%、9.42%。
圖5 抗蒸騰劑處理對(duì)果實(shí)總還原糖與總酸含量變化的影響
表2 抗蒸騰劑處理對(duì)果實(shí)中果糖與葡萄糖含量變化的影響
2.4.2 對(duì)葡萄酒基本理化指標(biāo)的影響 表3顯示,
‘赤霞珠’干紅葡萄酒的殘?zhí)恰H、揮發(fā)酸、酒精度及干浸出物濃度顯著高于‘雷司令’干白葡萄酒,而總酸含量顯著低于‘雷司令’葡萄酒,這符和干白、干紅葡萄酒的品種特點(diǎn)。與噴水對(duì)照相比,抗蒸騰劑分別提高了‘赤霞珠’與‘雷司令’葡萄酒中總酸含量0.66和0.57 g?L-1;抗蒸騰劑處理的‘赤霞珠’和‘雷司令’葡萄酒的pH分別降低了0.03和0.19,且酒精度分別降低了0.71%、0.39%。這初步說明在炎熱氣候產(chǎn)區(qū)噴施抗蒸騰劑來實(shí)現(xiàn)降糖增酸、降低酒精度的措施是可行的,這可為今后嘗試設(shè)計(jì)多種噴施濃度、使用其他類型抗蒸騰劑產(chǎn)品等措施來提高作用效果提供依據(jù)。
表3 抗蒸騰處理下葡萄酒基本理化指標(biāo)的變化
新疆是我國(guó)主要的鮮食、釀酒葡萄栽培區(qū),為干旱半干旱區(qū),夏季極端高溫天氣頻發(fā),常導(dǎo)致葡萄葉片水分蒸發(fā)強(qiáng)烈而枯黃灼傷、植株抗干旱脅迫能力弱,果實(shí)成熟過快、糖高酸低,進(jìn)而影響葡萄酒的品質(zhì),如酒精度過高、香氣欠缺、口感乏味、顏色不穩(wěn)定等。其中,成熟度過高常常是導(dǎo)致葡萄酒品質(zhì)下降的主要原因,而對(duì)于不同釀酒葡萄品種的成熟度調(diào)控是一項(xiàng)巨大挑戰(zhàn)。對(duì)于白色釀酒葡萄品種,研究者們主要關(guān)心的問題是在其成熟過程中如何避免蘋果酸過快消耗,同時(shí)保持新鮮的香氣物質(zhì)。最近,意大利通過提前采收白色品種‘奧圖戈’(Ortrugo)的方法來降低成熟度。然而,這種方法只有在適當(dāng)?shù)墓趯庸芾砬矣凶銐虻奶欠址e累情況下才可以進(jìn)行[20]。而對(duì)于紅色品種,氣候溫暖產(chǎn)區(qū)的種植者觀察到,盡管在8月中旬葡萄果實(shí)就已經(jīng)具備發(fā)酵為最適宜葡萄酒精度的潛力,但葡萄果實(shí)的色澤和理想的典型特性尚未達(dá)到。雖然推遲采收時(shí)間可以讓紅色品種的著色更好,但這種方法同樣對(duì)葡萄酒的品質(zhì)存在威脅,因?yàn)檫@可能會(huì)引起酒精度的進(jìn)一步升高[21-22],并且,這種延遲采收的辦法還會(huì)增加蘋果酸乳酸發(fā)酵過程不完全或發(fā)酵緩慢的風(fēng)險(xiǎn)[23]。
在本研究中,抗蒸騰劑具有調(diào)節(jié)葡萄植株光合特性的功能。Palliotti等[24]使用抗蒸騰劑處理紅色品種‘桑喬維塞’(Sangiovese)和‘塞立吉洛’(Ciliegiolo),研究結(jié)果顯示葉片光合作用和蒸騰速率均降低約40%—70%。在本試驗(yàn)中,抗蒸騰劑處理后,‘赤霞珠’與‘雷司令’葉片的凈光合速率均顯著降低,與Brillante[25]、Tubajika[26]等的研究結(jié)果一致。此外,抗蒸騰劑對(duì)喜樹(Decne.)的研究結(jié)果顯示,抗蒸騰劑在使氣孔導(dǎo)度下降的同時(shí)通過降低蒸騰速率而減少水分損失[27],本試驗(yàn)中抗蒸騰劑也均降低了‘赤霞珠’和‘雷司令’氣孔導(dǎo)度,但對(duì)‘赤霞珠’蒸騰速率的影響未達(dá)到顯著水平,這主要是由于第一次測(cè)定其蒸騰速率的時(shí)間處于噴施后的第2天,抗蒸騰劑抑制蒸騰的作用可能在‘赤霞珠’葉片上還沒有完全發(fā)揮,即使在之后的測(cè)定期間內(nèi)抗蒸騰劑均顯著降低了其蒸騰速率,但最終配對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果仍為不顯著,這仍不可否定抗蒸騰劑降低蒸騰速率的作用,因?yàn)閲娛┛拐趄v劑后的測(cè)定期間全程顯著降低了‘雷司令’的蒸騰速率,說明抗蒸騰劑對(duì)‘雷司令’降低水分散失有更加積極的作用,與‘赤霞珠’的顯著性差異可能與品種響應(yīng)抗蒸騰劑的作用時(shí)間有關(guān)。
為了研究引起光合特性變化的生理結(jié)構(gòu)原因,利用掃描電鏡觀察葉片氣孔特性。馮建燦等[27]研究顯示,抗蒸騰劑可減小氣孔開張度而降低蒸騰速率,從而提高植物抵御干旱能力。本試驗(yàn)研究結(jié)果與其一致:抗蒸騰劑顯著減小了‘赤霞珠’與‘雷司令’的葉片氣孔寬度、開張程度及分布密度,從而在炎熱氣候條件下降低水分大量散失。
植物組織內(nèi)可溶性蛋白、MDA、游離脯氨酸的含量可以反映植株在抵抗不良條件下的自我保護(hù)能力,本試驗(yàn)中蒸騰劑處理顯著降低了‘赤霞珠’與‘雷司令’葉片中的MDA、游離脯氨酸含量,并降低了‘雷司令’的可溶性蛋白含量。植物組織中MDA為脂質(zhì)過氧化作用的產(chǎn)物,故過氧化作用的破壞程度越嚴(yán)重,MDA的含量越高。Anjum等[28]認(rèn)為黃腐酸可以提高干旱高溫脅迫下植物根部的細(xì)胞膜滲透勢(shì),提高吸收土壤中水分和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力,減少水分散失,根生長(zhǎng)加強(qiáng),提高葉片相對(duì)含水量,降低MDA含量,從而幫助植株抵御脅迫。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,主要成分為黃腐酸的FA抗蒸騰劑處理使葡萄MDA含量顯著降低,與前人研究結(jié)果一致。另外,植物在逆境條件下游離脯氨酸含量增加,可使其保持較高的滲透勢(shì)而適應(yīng)逆境[29]。試驗(yàn)顯示抗蒸騰劑顯著降低了釀酒葡萄‘赤霞珠’與‘雷司令’的游離脯氨酸含量,說明抗蒸騰劑減輕了高溫脅迫對(duì)植株造成的傷害,提高了葡萄植株的整體抗旱性。
抗蒸騰劑對(duì)于葡萄果實(shí)糖酸含量和酒精度有影響,主要?dú)w因于其對(duì)光合作用的影響。葡萄果實(shí)內(nèi)可溶性固形物成分以糖為主,葉片的光合產(chǎn)物則是可溶性固形物積累的最主要來源,抗蒸騰劑顯著降低了凈光合速率,則最終減少碳水化合物的合成,導(dǎo)致果實(shí)中還原糖積累較少,并減緩了有機(jī)酸的分解速度。Brillante等[25]研究成膜型抗蒸騰劑松脂二烯降低‘赤霞珠’果實(shí)TSS 2.09° Brix,處理組還原糖含量低于21 g?L-1,葡萄酒中乙醇含量降低1.06%(v/v);Palliotti等[30]報(bào)告了一項(xiàng)為期2年在‘桑嬌維賽’(Sangiovese)植株施用有機(jī)成膜抗蒸騰劑的研究結(jié)果顯示,葡萄果實(shí)平均TSS約為14°Brix,在不影響有機(jī)酸、pH和漿果酚類物質(zhì)合成的情況下,有效減少糖的積累;Abdallah等[31]在番茄上應(yīng)用0.15% FA抗蒸騰劑同樣顯著降低了果實(shí)含糖量。以上研究結(jié)果表明,如果想要達(dá)到調(diào)控果實(shí)成熟度、防止酒精度過高的效果,在糖快速積累的過程中及時(shí)施用抗蒸騰劑,從而對(duì)葉片光合作用施加明顯的限制是有重要作用的[32]。本試驗(yàn)中,抗蒸騰劑顯著降低了‘赤霞珠’‘雷司令’果實(shí)中總還原糖,提高了總酸含量,并最終避免在炎熱氣候產(chǎn)區(qū)生產(chǎn)出酒精度過高且品質(zhì)欠佳的葡萄酒,噴施抗蒸騰劑是實(shí)現(xiàn)控制果實(shí)糖高酸低問題的有效措施,與前人研究結(jié)果一致,對(duì)于解決新疆地區(qū)葡萄果實(shí)糖分積累過快,過高而引起的一系列葡萄酒品質(zhì)問題具有一定的指導(dǎo)意義。此外,采收期果實(shí)中葡萄糖與果糖含量顯著降低,目前鮮見報(bào)道外施抗蒸騰劑對(duì)葡萄果實(shí)可溶性單體糖的影響,具體機(jī)理有待進(jìn)一步研究。
溫度是植物形態(tài)、地緣分布的重要限制因素,它影響著植物生長(zhǎng)發(fā)育的全部過程。全球氣候變暖對(duì)炎熱氣候產(chǎn)區(qū)的釀酒葡萄與葡萄酒的生產(chǎn)帶來新的挑戰(zhàn)。White等[33]預(yù)測(cè)21世紀(jì)末美國(guó)適合栽培釀酒葡萄的地區(qū)會(huì)減少81%。Hall等[34]預(yù)測(cè)在2070年前,由于生長(zhǎng)期溫度過高的問題,澳大利亞1/3的葡萄酒產(chǎn)區(qū)將不再是優(yōu)質(zhì)釀酒葡萄產(chǎn)區(qū)。目前釀酒葡萄生產(chǎn)中主要有以下幾種降溫抗旱措施:(1)樹冠上方安裝彩色遮陽(yáng)網(wǎng)[35-36];(2)改變葡萄栽培架式或葉幕類型調(diào)控微氣候[37];(3)地表覆蓋(覆草、地膜、秸稈及砂土等)技術(shù)改善土壤水熱效應(yīng)[38];(4)適當(dāng)灌水(噴灌)。本研究中使用的FA新型植物抗蒸騰劑具有易操作、低成本、綜合效果好等特點(diǎn),并可通過調(diào)節(jié)噴施劑量、時(shí)間、頻率以及噴施位置(即整個(gè)葉幕層或特定部分)來靈活調(diào)節(jié)以達(dá)到所需的效果。未來有必要考慮噴施的時(shí)間和頻率、抗蒸騰劑的疏水性或親水性差異來研究如何優(yōu)化作用效果,并從分子水平開展更深度的機(jī)理研究。
本研究表明,炎熱氣候條件下抗蒸騰劑噴施可顯著降低釀酒葡萄植株凈光合速率與氣孔導(dǎo)度;通過顯著減小葉片氣孔寬度、開張程度及密度,從而減少水分大量散失;抗蒸騰劑可顯著降低釀酒葡萄植株丙二醛和游離脯氨酸含量,對(duì)‘雷司令’的可溶性蛋白含量也有降低作用,從而提高植株抵御高溫氣候;抗蒸騰劑能夠顯著抑制果實(shí)還原糖含量過高積累和有機(jī)酸的快速降解,從而降低葡萄酒的酒精度。
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Influence of Anti-transpirant on Photosynthesis Characteristic and Qualities of Wines in Hot Climate
LI WanPing1, LIU Min1, WANG JieXing1, YAO Heng1, CHENG ZhengLong2, DOU JunXia2, ZHOU XiaoMing3, FANG YuLin1, SUN XiangYu1
(1College of Enology, Northwest A&F University/Shaanxi Engineering Research Center for Viti-Viniculture, Yangling 712100, Shaanxi;2Xinjiang Ruitai Qinglin Wine Co., Ltd, Heshuo 841200, Xinjiang;3Xinjiang Academy of Agricultural Sciences, Urumqi 830091)
The experiment was aimed at the high temperature stress in vineyard caused by extreme weather duringsummer, which leads excess rates ofripening,high sugar with lowacidity ofberries, and thus, affecting the quality of wine.This study explored the effects of spraying anti-transpirant treatment on photosynthetic characteristics, physiological indexes, quality of grape berries and wine, in order toprovide a theoretical basis for improving quality of grape berries and wine in hot climate.Experimentswereconductedin Heshuo (Xinjiang) in 2017, usingL. cv. Cabernet Sauvignon (CS) andL. cv. Riesling as materials. The anti-transpirant was sprayed twice on July 26 and August 9, 2017. The grape leaves were sampled, while photosynthesis index, stomatal characteristics and physiological changes were measured; the relate index of ripening weremonitored during pre-harvest period, while the glucose and fructose of berries were determined by Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC). Berries were harvested at the same time as winery (Riesling: August 16; CS: September 8), and CS dry red and Riesling dry white wine were made in small containers under standard verification process, then the basic physical and chemical indexes of the wine were determined after the fermentation was terminated.Anti-transpirant significantly reduced the net photosynthetic rate and stomatal conductance, but the intercellular CO2concentration and transpiration rate were inconsistent in the two varieties. Scanning electron microscopy showed that the stomata width (41.02%, 46.94%), degree of opening (59.59%, 67.43%) and distribution density (13.84%, 4.97%) of CS and Riesling immature leaves were significantly reduced. In order to reduce the large amount of water loss in hot climate conditions; anti-transpirant treatment significantly reduced the content of malondialdehyde and free proline, and the soluble protein content of Riesling, and had no significant effect on chlorophyll content. The result showed that it provided a way to alleviate high temperature stress, and anti-transpirant could significantly inhibit the excessive accumulation of reducing sugar content and rapid degradation of organic acid. Compared to control group, anti-transpirant treatment reduced total sugar content in the CS and Riesling fruits by 6.6 g?L-1and 11.7 g?L-1with total acid content increased by 0.57 g?L-1and 0.76 g?L-1, respectively, , and the glucose and fructose contents were significantly reduced. The alcohol levels of CS and Riesling wines were reduced by 0.71% and 0.39%, compared to control group.The anti-transpirant had the functions of regulating photosynthetic characteristics, reducing water evaporation, improving high temperature resistance, reducing sugar andalcohol content, and increasing acidity, which provided easy operation with low cost and multiple effects. The research results had certain practical guiding significance for improving the comprehensive quality of wine grape berries and wine in hot climate producing areas.
anti-transpirant; wine grapes; photosyntheticcharacteristics; stomatalcharacteristics; physiological index; alcohol
10.3864/j.issn.0578-1752.2019.17.009
2019-01-25;
2019-06-04
國(guó)家“十三五”重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2017YFC1502806)、寧夏回族自治區(qū)科技重大專項(xiàng)(2016BZ0602)、國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(葡萄)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-29-zp-06)、陜西省葡萄產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系
李婉平,E-mail:liwanping@nwsuaf.edu.cn。通信作者房玉林,E-mail:fangyulin@nwsuaf.edu.cn。通信作者孫翔宇,E-mail:sunxiangyu@nwsuaf.edu.cn
(責(zé)任編輯 趙伶俐)