參芪養(yǎng)心顆粒對冠脈結(jié)扎致犬急性心肌缺血影響的實驗研究*

韓曉江 ，杜錦輝 ，關(guān)敬之 ，畢連寶 ，劉雁飛 ，呼格吉樂

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院中醫(yī)科，呼和浩特 010059；2.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬蒙醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，呼和浩特 010065；3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院影像科，呼和浩特 010059；4.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗科，呼和浩特 010059）

參芪養(yǎng)心顆粒為臨床經(jīng)驗方，由黃芪、黨參、丹參、沙參等中藥組成，其功效為益氣養(yǎng)心、活血化瘀，臨床用于治療心肌缺血。以胸部疼痛、憋悶，甚則短氣，胸痛徹背，喘息不得臥等為主要表現(xiàn)的病證，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的心絞痛、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病等疾病引起的以胸痛為主癥的疾病相類似。臨床人擬用量為每天40 g生藥（每日0.57 g生藥/kg，按70 kg質(zhì)量計）。筆者對參芪養(yǎng)心顆粒對冠脈結(jié)扎致犬急性心肌缺血影響藥效學(xué)實驗。

1 實驗材料與儀器

1.1 實驗動物和藥品 Beagle犬，8.00～12.00 kg，雌雄各半，由北京沙河通利實驗動物養(yǎng)殖場提供，許可證號：SCXK（京）2013-0007，適應(yīng)性飼養(yǎng) 2周后使用。犬飼料，購于北京科澳協(xié)力飼料有限公司，許可證號：SCXK（京）2014-0010。

參芪養(yǎng)心顆粒，用法用量：口服，一次1袋，每日2次，規(guī)格：5g/袋，1g顆粒含4 g生藥，由深圳市龍華區(qū)人民醫(yī)院提供，批號：20150716。硝酸異山梨酯片，用法用量：口服：每日 1～2 片，每日 2～3 次，規(guī)格：5 mg，北京恒生藥業(yè)有限公司，國藥準字：H11021331，批號：170803。

1.2 試劑和儀器 磷酸鹽緩沖液（PBS），上海澤葉生物科技有限公司，批號：20161223。氨基甲酸乙酯，國藥集團上?；瘜W(xué)試劑公司，批號：20120316。氯化鈉注射液，四川科倫藥業(yè)股份有限公司，國藥準字H20056626，批號：1509130223。四唑紅，北京索萊寶科技有限公司。

SKP-03電熱恒溫培養(yǎng)箱，黃石市恒豐醫(yī)療器械有限公司。生物機能實驗系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司。BW-BM1103小動物呼吸機，上海軟隆科技發(fā)展有限公司。PL2200血氣分析儀，南京普朗醫(yī)用設(shè)備有限公司。Transonic T400超聲血流儀，美國。多導(dǎo)生理記錄儀，澳大利亞AD公司生產(chǎn)。

2 實驗方法

2.1 實驗分組及造模 取Beagle犬36只，雌雄各半，分6組，每組6只，分別為假手術(shù)組、模型對照組、參芪養(yǎng)心顆粒低劑量組（2.73 g生藥/kg）、參芪養(yǎng)心顆粒中劑量組（5.46 g生藥/kg）、參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組（10.92 g生藥/kg）及硝酸異山梨酯片組（0.8 mg/kg）。灌胃給藥，假手術(shù)組、模型對照組給予等量蒸餾水，每日1次，連續(xù)給藥5 d，于第5天，氨基甲酸乙酯（1.00 g/kg）腹腔麻醉后，氣管插管接呼吸機，潮氣量：130～160 mL，頻率：20 次/min，呼吸比2∶1。分離右側(cè)頸總動脈，插入導(dǎo)管至左心室測心室內(nèi)壓，分離股動脈，檢測動脈壓。在第4、5肋間處開胸，暴露心臟。于左冠狀動脈前降支上中1/3處埋線以備結(jié)扎[1]。縫30點式心外膜電極，測心外膜電圖變化。結(jié)扎左冠狀動脈，假手術(shù)組埋線不結(jié)扎，結(jié)扎前、結(jié)扎15 min時，記錄給藥前心外膜電圖。十二指腸注射給藥，記錄給藥后60、120、180 min心外膜電圖，統(tǒng)計ST段升高＞2 mV位點數(shù)心肌缺血區(qū)心外膜電圖（N-ST，ST個數(shù)）[2]。分離主動脈和冠狀動脈并用超聲血流儀分別測心輸出量和冠狀動脈血流量，結(jié)扎15 min時記錄給藥前生理指標，即心電、平均動脈壓。十二指腸給藥，記錄給藥后60、120、180 min各項指標。

2.2 心功能指標的計算方法 計算心肌血流量（MBF，冠脈血流量×300÷心室質(zhì)量），以及冠脈血管阻力（CVR，平均動脈壓×0.018÷心肌血流量）。實驗結(jié)束后分別取動脈血、靜脈血各2 mL，測定血氧飽和度，按公式計算各組心肌耗氧量（MOC）：心肌耗氧量=冠狀動脈血流量（mL/min）×[動脈血氧（mL%）-靜脈血氧（mL%）]÷100 g心肌質(zhì)量[3]。

2.3 四唑紅（TTC）染色方法 處死動物，心臟稱重，于-20℃冰箱中冰凍30 min，在結(jié)扎線以下切除心房，稱心室質(zhì)量，平行冠狀溝將心室橫切成6片，每片約0.3～0.5 cm，心尖處用于蘇木精-伊紅（HE）染色法，剩余5片置于1%的四唑紅溶液中，在37℃恒溫水浴中染色15 min，缺血區(qū)不著色，非缺血區(qū)染為紅色[4]。稱未染色心肌質(zhì)量，計算缺血區(qū)質(zhì)量占左心室質(zhì)量百分比（%）=缺血區(qū)質(zhì)量/左心室質(zhì)量×100%[5]。

3 統(tǒng)計方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計處理，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，組間比較用單因素方差分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

4 結(jié)果

4.1 參芪養(yǎng)心顆粒對犬心肌缺血區(qū)ST段升高＞2 mV位點數(shù)N-ST的影響 由表1可見，與假手術(shù)組比較，模型對照組犬心肌缺血位點數(shù)從結(jié)扎15 min至給藥180 min明顯升高（P＜0.01）。與模型對照組比較，參芪養(yǎng)心顆粒中劑量組在給藥60 min能顯著降低缺血位點數(shù)N-ST（P＜0.05）。參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組在給藥60 min、120 min和180 min時能顯著降低缺血位點數(shù) N-ST（P＜0.01 或 P＜0.05）。硝酸異山梨醇組在結(jié)扎15 min、給藥60 min、120 min和180 min時能顯著降低缺血位點數(shù)N-ST（P＜0.01或P＜0.05）。

4.2 參芪養(yǎng)心顆粒對心肌缺血犬CVR的影響 由表2可見，與假手術(shù)組比較，模型對照組急性心肌缺血犬CVR從結(jié)扎15 min至給藥180 min均顯著增加（P＜0.01）。與模型對照組比較，參芪養(yǎng)心顆粒中劑量組在給藥60 min、180 min能顯著降低冠脈血管阻力（P＜0.05）。參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組在結(jié)扎給藥15 min，給藥60 min、120 min和180 min時能顯著降低 CVR（P＜0.01 或 P＜0.05）。硝酸異山梨醇組在結(jié)扎15 min、給藥60 min、120 min和180 min時能顯著降低 CVR（P＜0.01）。

4.3 參芪養(yǎng)心顆粒對急性心肌缺血犬MBF的影響由表3可見，與假手術(shù)組比較，模型對照組急性心肌缺血犬MBF從結(jié)扎15 min至給藥180 min均有顯著降低（P＜0.05）。與模型對照組比較，參芪養(yǎng)心顆粒中劑量組（5.46 g生藥/kg）和參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組在給藥 60 min、120 min、180 min能增加MBF（P＜0.05）。硝酸異山梨醇組在給藥 60 min、120 min、180 min 時能顯著增加 MBF（P＜0.05）。

表1 參芪養(yǎng)心顆粒對犬心肌缺血區(qū)ST段升高>2 mV位點數(shù)N-ST的影響（x±s）Tab.1 Effect of Shenqi Yangxin Granule on the number of ST segment rises>2 mV of dogs myocardial ischemia model（x±s）

4.4 參芪養(yǎng)心顆粒對給藥后180 min犬MOC的影響 由表4可見，與假手術(shù)組比較，模型對照組犬MOC顯著增加（P＜0.01）。與模型對照組比較，參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組在給藥180 min時能顯著降低MOC（P＜0.05）；硝酸異山梨醇組在給藥 180 min 時能顯著降低 MOC（P＜0.05）。

4.5 參芪養(yǎng)心顆粒對心肌缺血犬心肌梗死區(qū)質(zhì)量百分比的影響 由表5可見，與假手術(shù)組比較，模型對照組犬心肌梗死質(zhì)量與心室質(zhì)量比值顯著增加（P＜0.01）。與模型對照組比較，參芪養(yǎng)心顆粒中劑量組、參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組、硝酸異山梨醇組能降低心肌梗死質(zhì)量與心室質(zhì)量比值（P＜0.01或P＜0.05）。

表2 參芪養(yǎng)心顆粒對心肌缺血犬CVR的影響（x±s）Tab.2 Effect of Shenqi Yangxin Granule on CVR in dogs with myocardial ischemia（x±s）

表3 參芪養(yǎng)心顆粒對心肌缺血犬MBF的影響（x±s）Tab.3 Effect of Shenqi Yangxin Granule on MBF in dogs with myocardial ischemia（x±s）

表4 參芪養(yǎng)心顆粒對給藥后180 min犬MOC的影響（x±s）Tab.4 Effect of Shenqi Yangxin Granule on MOC in dogs 180 minutes after treatment（x±s）

表5 參芪養(yǎng)心顆粒對心肌缺血犬心肌梗死質(zhì)量百分率的影響（x±s）Tab.5 Effect of Shenqi Yangxin Granule on the percentage of myocardial infarction in dogs with myocardial ischemia（x±s）

4.6 參芪養(yǎng)心顆粒對心肌缺血犬心肌HE染色結(jié)果 由HE染色結(jié)果可見假手術(shù)組犬心肌細胞正常，無病變。模型對照組犬心肌左心室片狀透壁壞死，多處局灶性損害，肌纖維腫脹和斷裂，心肌細胞溶解消失，呈片狀淋巴細胞浸潤（箭頭指示位置為炎癥細胞聚集區(qū)）。各給藥組心肌細胞出現(xiàn)局灶性的間質(zhì)反應(yīng)，肌纖維斷裂以及水腫，部分心肌細胞溶解消失，但與模型對照組病變程度相比均有所減輕，見圖1。

圖1 犬左心室心肌組織HE染色圖（×200）Fig.1 HE staining of myocardial tissue in canine left ventricle（×200）

5 討論

心肌缺血是由于心臟血液灌注減少引起心臟的供氧減少，進而誘發(fā)心肌能量代謝失衡，心臟不能正常工作的一種病理狀態(tài)[6]。正常心臟活動所需的能量幾乎完全依靠有氧代謝提供，當某些原因?qū)е滦募⊙汗┙o困難，就構(gòu)成了心肌缺血?？梢鹦募∪毖脑蛴泻芏?，其中最常見的原因是冠狀動脈粥樣硬化。心肌梗死是在冠狀動脈粥樣硬化病變的基礎(chǔ)上繼發(fā)血栓形成阻塞冠狀動脈所致[7]。心電圖是最常用于心肌缺血的無創(chuàng)性檢查，當心肌某一部分供血不足時，將會影響到正常的心室復(fù)極化，可使缺血區(qū)相關(guān)導(dǎo)聯(lián)發(fā)生ST-T異常改變[8]。本研究中模型對照組ST段升高＞2 mV位點數(shù)N-ST顯著多于假手術(shù)組，而與模型對照組比較參芪養(yǎng)心顆粒中劑量組和參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組可顯著降低犬心肌缺血區(qū)N-ST。

冠狀動脈包繞于心臟外面，為心臟提供營養(yǎng)，冠狀動脈狹窄是動脈粥樣硬化所引起的，當冠狀動脈狹窄到一定程度而導(dǎo)致心肌缺血就形成了冠心病[9]。冠狀動脈狹窄最大可超過50%，意味著其對心臟的血液供應(yīng)只有正常時的50%甚至更少[10]。引起冠狀動脈狹窄的粥樣斑塊隨時都有破裂脫落的危險，一旦脫落很可能引起冠狀動脈閉塞，造成心肌大質(zhì)量壞死[11-12]。常用的血管擴張藥硝酸甘油對冠狀動脈具有直接擴張作用，可使冠脈血管總阻力減小，進而增加心肌血流量，硝酸甘油還能擴張遠端小動脈，降低心臟后負荷，從而使心肌耗氧量降低，減小心肌梗死的質(zhì)量[13]。本研究中參芪養(yǎng)心顆粒中劑量組和參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組可顯著降低冠脈血管阻力，增加犬急性心肌缺血模型的心肌血流量。同時參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組可顯著降低心肌耗氧量。以上結(jié)果與處死動物后通過1%的四唑紅溶液對心室染色的結(jié)果一致[14-15]，芪養(yǎng)心顆粒中劑量組和參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組可顯著降低心肌梗死區(qū)質(zhì)量。

參芪養(yǎng)心顆粒對犬結(jié)扎冠狀動脈所引起的急性心肌缺血具有保護作用，有改善因冠狀動脈結(jié)扎而引起的心肌供血不足，減小了心肌梗死區(qū)質(zhì)量。以上實驗結(jié)果為參芪養(yǎng)心顆粒在臨床上治療冠狀動脈狹窄引起的心肌缺血提供了藥效學(xué)依據(jù)。