肺癌轉(zhuǎn)移基礎(chǔ)研究與中醫(yī)藥轉(zhuǎn)化研究展望＊

闕祖俊，武曉秋，羅 斌，錢芳芳，劉海濤，楊 蘊(yùn)，張 戈＊＊，田建輝,＊＊

（1.上海市中醫(yī)藥研究院中醫(yī)腫瘤研究所 上海 200032；2.香港浸會(huì)大學(xué) 香港 999077；3.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院 上海 20032）

惡性腫瘤嚴(yán)重危害人類健康，而肺癌是發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)最高的惡性腫瘤[1]。隨著早期診斷技術(shù)的發(fā)展，肺癌早期術(shù)后患者的比例不斷升高[2]，而術(shù)后轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致肺癌患者生存率低的主要原因[3]，因此急需研發(fā)抗肺癌轉(zhuǎn)移新藥以提高臨床療效。目前的化療、分子靶向、免疫治療等，對(duì)于早期肺癌患者的療效獲益有限[4,5]，其關(guān)鍵是對(duì)肺癌轉(zhuǎn)移的研究思路及其機(jī)制的探討缺乏整體觀的認(rèn)識(shí)；主要表現(xiàn)在目前肺癌的基礎(chǔ)研究和藥物開發(fā)主要基于原發(fā)灶的腫瘤組織，采用基因組、蛋白組、表觀遺傳和代謝組等現(xiàn)代的一系列先進(jìn)技術(shù)進(jìn)行多組學(xué)聯(lián)合檢測(cè)[6]，然而轉(zhuǎn)移的發(fā)生是已經(jīng)脫落進(jìn)入外周血的循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulating Tumor Cells,CTCs）遷移至靶器官，進(jìn)而增殖成病灶，所以轉(zhuǎn)移的干預(yù)要以機(jī)體內(nèi)環(huán)境為中心，以CTCs 為靶點(diǎn)展開，可能會(huì)取得突破。通過系統(tǒng)梳理目前肺癌轉(zhuǎn)移研究中的思路瓶頸，聯(lián)合現(xiàn)有的科學(xué)技術(shù)進(jìn)展，促進(jìn)中醫(yī)理論指導(dǎo)現(xiàn)代技術(shù)的融合，以傳承創(chuàng)新發(fā)展中醫(yī)藥，提高基礎(chǔ)與臨床的轉(zhuǎn)化，提高中醫(yī)藥在臨床中療效進(jìn)步。

1 肺癌的轉(zhuǎn)化研究效率亟待提高

目前肺癌分子靶向治療和免疫治療已經(jīng)在臨床取得一定成效，然而晚期肺癌患者的5 年生存率仍低于20%，其關(guān)鍵是轉(zhuǎn)移的發(fā)生，且目前缺乏針對(duì)早期肺癌轉(zhuǎn)移有效藥物[3]。其主要原因是體外抗肺癌轉(zhuǎn)移的篩藥平臺(tái)主要是基于美國國家癌癥研究所（National Cancer Institute，NCI）提 供 的NCI-60 細(xì) 胞，而 這 些NCI-60細(xì)胞主要來源于原發(fā)灶，且在二維培養(yǎng)條件下進(jìn)行抗腫瘤化合物的篩選[7]。體內(nèi)研究采用NCI-60細(xì)胞在免疫缺陷小鼠皮下建立移植瘤模型，篩選抗腫瘤化合物對(duì)腫瘤生長的抑制作用，其弊端是皮下移植的腫瘤屬于異位種植，忽視了其起源組織器官的微環(huán)境和內(nèi)環(huán)境?；谏鲜瞿Ｐ秃Y選得到的化合物與臨床療效的關(guān)聯(lián)程度不高，導(dǎo)致目前從基礎(chǔ)到臨床的轉(zhuǎn)化效率極低。

科學(xué)的模型體系是腫瘤轉(zhuǎn)化研究的關(guān)鍵。目前國際認(rèn)可的抗癌藥物療效預(yù)測(cè)模型主要是人源腫瘤組織異體移植物模型（patient-derived tumor xenografts,PDX），PDX是將人原發(fā)腫瘤組織移植到免疫缺陷小鼠體內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增，然后用于預(yù)測(cè)抗癌藥物的療效。該方法比傳統(tǒng)的細(xì)胞系更為穩(wěn)定，其基因表達(dá)、突變狀態(tài)、轉(zhuǎn)移潛能、藥物反應(yīng)均能更好地保持一致，也更適合用于科學(xué)研究。近年來，人源腫瘤類器官模型（patientderived organoids，PDO）成為新的方向，PDO 是一種基于三維細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)建立的模型，這些類器官在組織學(xué)、分子水平和功能上能夠持續(xù)與來源腫瘤組織保持高度一致，能很好地反映原發(fā)腫瘤的特點(diǎn)，可用于藥物反應(yīng)性試驗(yàn)等研究[8]。雖然PDX和PDO模型可用于篩選抗肺癌藥物，由于該模型的建立同樣基于原發(fā)灶腫瘤組織，因此其缺乏抗腫瘤轉(zhuǎn)移治療的精準(zhǔn)靶點(diǎn)，也難以客觀評(píng)價(jià)干預(yù)方法的實(shí)際效果，這是目前缺乏抗肺癌轉(zhuǎn)移藥物的真正原因。因此急需創(chuàng)新肺癌轉(zhuǎn)移研究平臺(tái)，建立起符合肺癌臨床實(shí)際發(fā)病特征的體內(nèi)與體外研究模型。

2 基于“正虛伏毒”構(gòu)建肺癌轉(zhuǎn)移特異性研究平臺(tái)

田建輝針對(duì)肺癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移提出“正虛伏毒”的理論觀點(diǎn)，認(rèn)為循環(huán)腫瘤細(xì)胞是轉(zhuǎn)移發(fā)生的潛在伏毒。癌癥的轉(zhuǎn)移“種子”和“土壤”假說提示CTCs 可能是腫瘤轉(zhuǎn)移的“種子”[9]。大量臨床研究表明外周血中CTCs的數(shù)量和功能狀態(tài)與腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的發(fā)生和預(yù)后密切相關(guān)[10]。Wang 等研究發(fā)現(xiàn)CTCs 數(shù)目和CTC 細(xì)胞簇可作為乳腺癌患者疾病進(jìn)展和生存的獨(dú)立預(yù)后因子[11]。Aceto等研究發(fā)現(xiàn)，血液中的CTC細(xì)胞簇是單細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的23-50 倍，而采用納鉀ATP 酶抑制劑解離CTC細(xì)胞簇可抑制乳腺癌的轉(zhuǎn)移[12,13]，提示通過干預(yù)CTC進(jìn)而預(yù)防轉(zhuǎn)移發(fā)生可能是提高肺癌患者生存的關(guān)鍵。

為模擬肺癌臨床實(shí)際發(fā)病過程，田建輝課題組首先從早期肺癌患者外周血中富集、分離、建立了肺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞系（CTC-TJH-01）。體外研究發(fā)現(xiàn)CTCTJH-01 細(xì)胞處于上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）的中間階段，具有耐藥性強(qiáng)、干細(xì)胞表型和免疫逃逸特征[14]。體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)CTC-TJH-01細(xì)胞在免疫缺陷小鼠上具有致瘤性和肺轉(zhuǎn)移能力[14]，提示了外周血中的CTCs可能是轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因子。

圖1 懸浮培養(yǎng)的CTC-TJH-01細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

2.1 肺癌轉(zhuǎn)移特異性體外研究模型

課題組采用聚甲基丙烯酸羥乙基酯（poly-HEMA）建立了CTC-TJH-01 細(xì)胞懸浮生長模型，發(fā)現(xiàn)懸浮培養(yǎng)后的CTC-TJH-01 細(xì)胞可自身聚集形成細(xì)胞簇（圖1），其結(jié)構(gòu)與類器官相似，此外還具有生長抑制、細(xì)胞周期阻滯、失巢凋亡抵抗和對(duì)化療藥物不敏感等生物學(xué)特征?；谠撃Ｐ涂珊Y選出解離CTC 細(xì)胞簇或誘導(dǎo)CTC 細(xì)胞簇發(fā)生失巢凋亡的化合物，其可能是潛在的抗肺癌轉(zhuǎn)移藥物。

2.2 肺癌轉(zhuǎn)移特異性體內(nèi)研究模型

首先，采用CTC-TJH-01細(xì)胞構(gòu)建攜帶GFP/luc雙標(biāo)的CTC-TJH-01-GFP/luc 細(xì)胞系。其次，采用NCG小鼠構(gòu)建模擬人源化小鼠，即提取人外周血單核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs），將PBMCs與CTC-TJH-01-GFP/luc 細(xì)胞通過尾靜脈共注射接種于NCG小鼠體內(nèi)，通過活體成像動(dòng)態(tài)觀察小鼠肺部成瘤情況。該模型可用于篩選基于免疫治療的抗肺癌轉(zhuǎn)移藥物。

3 精準(zhǔn)的肺癌免疫干預(yù)是未來阻斷肺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵途徑

肺癌的免疫治療已成為肺癌的主流方法，已顯示出的巨大潛力。隨著“免疫監(jiān)視”學(xué)說和“免疫編輯”理論的相繼提出，腫瘤治療策略也由“殺瘤”逐漸向調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境轉(zhuǎn)變[15]。血管生成抑制劑、免疫檢查點(diǎn)抑制劑等調(diào)控腫瘤微環(huán)境的小分子藥物逐漸走進(jìn)臨床，通過恢復(fù)機(jī)體自我抗病能力以抑制腫瘤生長的策略也取得臨床顯效[16]。2018年諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予美國免疫學(xué)家詹姆斯·艾利森與日本免疫學(xué)家本庶佑，表彰他們“發(fā)現(xiàn)負(fù)性免疫調(diào)節(jié)治療癌癥的療法”。證明以調(diào)控自身抗病能力治療癌癥的方法是具有堅(jiān)實(shí)的科學(xué)基礎(chǔ)。腫瘤免疫研究經(jīng)歷了從腫瘤細(xì)胞為中心向腫瘤微環(huán)境轉(zhuǎn)變，但是目前臨床藥物的研發(fā)多以腫瘤細(xì)胞為篩選對(duì)象，因此對(duì)于轉(zhuǎn)移干預(yù)的療效欠佳。

劉嘉湘早在上世紀(jì)70 年代在全國首先倡導(dǎo)扶正法為主治療惡性腫瘤的觀點(diǎn)，認(rèn)為腫瘤是局部屬實(shí)、全身屬虛，而調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)在的抗病能力是提高臨床療效的關(guān)鍵[17]；隨后朱惠蓉發(fā)現(xiàn)以“扶正治癌”為指導(dǎo)的中醫(yī)藥可以通過調(diào)節(jié)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫軸發(fā)揮治療作用，提高療效[18]；田建輝發(fā)現(xiàn)“扶正治癌”指導(dǎo)下形成的肺積方具有下調(diào)機(jī)體腫瘤微環(huán)境中吲哚胺2，3-雙加氧酶(Indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)表達(dá)，逆轉(zhuǎn)免疫逃逸的作用[19]。目前以IDO為干預(yù)靶點(diǎn)的小分子抑制劑藥物正在開展臨床研究；上述研究均提示了調(diào)控機(jī)體微環(huán)境是中醫(yī)藥發(fā)揮作用的重要途徑，但是其具體的干預(yù)機(jī)制仍待深入研究。

目前轉(zhuǎn)移的干預(yù)是臨床治療的難點(diǎn)，其關(guān)鍵是轉(zhuǎn)移的機(jī)制不明確。腫瘤轉(zhuǎn)移不是繼發(fā)器官的“消極”接受，而是“積極”地準(zhǔn)備適宜環(huán)境。在2005 年，Kaplan教授提出轉(zhuǎn)移前微環(huán)境（The Pre-metastatic niche,PMN）概念，即遠(yuǎn)處的靶器官在腫瘤細(xì)胞到達(dá)之前，先形成適合腫瘤細(xì)胞定植、生長、增殖的局部微環(huán)境[20]；花寶金課題組發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方雙參顆?？梢愿深A(yù)髓源性抑制細(xì)胞（Myeloid-Derived Suppressor Cells,MDSCs）在PMN 形成中的免疫抑制作用[21]；而課題組前期研究發(fā)現(xiàn)外周血MDSCs 的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的臨床分期具有相關(guān)性[22]；因此，外周免疫逃逸將成為阻斷腫瘤細(xì)胞進(jìn)入PMN形成微轉(zhuǎn)移的重要干預(yù)環(huán)節(jié)。

基于外周免疫逃逸，研究發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌患者外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的表達(dá)水平具有一定的規(guī)律，即早期患者明顯高于晚期患者[23]；課題組在提取患者外周血的循環(huán)腫瘤細(xì)胞對(duì)其生物學(xué)特征進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，循環(huán)腫瘤細(xì)胞與原代細(xì)胞相比，具有更強(qiáng)的耐藥性、干細(xì)胞特性以及休眠的特點(diǎn)[24]；這在某種程度上揭示了目前轉(zhuǎn)移干預(yù)療效不佳的原因。因此，我們建立了以循環(huán)腫瘤細(xì)胞為基礎(chǔ)的臨床篩藥平臺(tái)，積極探索從外周免疫逃逸干預(yù)轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵靶點(diǎn)。而提高外周自然殺傷細(xì)胞的功能，有望促進(jìn)NK細(xì)胞對(duì)CTC清除，預(yù)防轉(zhuǎn)移的發(fā)生。

4 系統(tǒng)生物學(xué)技術(shù)成為揭示中醫(yī)藥復(fù)方調(diào)控肺癌的機(jī)制的重要技術(shù)

中醫(yī)藥抗轉(zhuǎn)移在臨床得到了一定的驗(yàn)證，但是由于中醫(yī)藥復(fù)方發(fā)揮作用的多成分、多途徑、多靶點(diǎn)，導(dǎo)致其機(jī)制研究一直難以突破。而2001 年，Leroy Hood的系統(tǒng)生物學(xué)概念的提出，為解決這一瓶頸提供了有效手段[25]。張衛(wèi)東教授[26]建立了集系統(tǒng)生物學(xué)、網(wǎng)絡(luò)生物學(xué)、現(xiàn)代藥理研究及化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)研究為一體的現(xiàn)代中藥復(fù)方研究體系，確立了以自上而下的系統(tǒng)論與自下而上的還原論相結(jié)合、宏觀與微觀相結(jié)合、體內(nèi)與體外相結(jié)合的研究模式；李梢教授[27]通過應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)對(duì)腫瘤扶正祛邪中藥進(jìn)行統(tǒng)計(jì)研究發(fā)現(xiàn)，中藥治療比直接殺傷腫瘤細(xì)胞在調(diào)節(jié)腫瘤免疫微環(huán)境和腫瘤預(yù)防方面具有更大的潛力。

中醫(yī)藥復(fù)方的多組分決定了其作用機(jī)制的多途徑及多靶點(diǎn)；而系統(tǒng)生物學(xué)的優(yōu)勢(shì)正是通過點(diǎn)-線-面-網(wǎng)的角度將中醫(yī)藥不同組分的聯(lián)合作用進(jìn)行整體分析，進(jìn)一步揭示了中醫(yī)藥的整體干預(yù)機(jī)制。如李洪霖等[28]采用基因/蛋白網(wǎng)絡(luò)分析的方法預(yù)測(cè)加味附子理中湯抑制肺癌的分子機(jī)制及抗腫瘤靶點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)加味附子理中湯及其拆方人參蓽茇組可能通過調(diào)控TGF-β1/SMAD2/3、Wnt/β/β-catenin、Gli/Hedgehog 信號(hào)通路發(fā)揮對(duì)LLC 荷瘤小鼠的抑制作用，并可多目標(biāo)調(diào)節(jié)腫瘤及腫瘤微環(huán)境分子網(wǎng)絡(luò)來實(shí)現(xiàn)特定效果。

系統(tǒng)生物學(xué)在揭示中醫(yī)證候的內(nèi)涵與特征中也發(fā)揮相當(dāng)重要的作用，因其具有共同的特點(diǎn)——復(fù)雜的人體。證候的演變必然存在著特殊的物質(zhì)基礎(chǔ)，而蛋白質(zhì)和多肽是機(jī)體生命活動(dòng)的執(zhí)行者，因此，證候的變化必然由蛋白質(zhì)或多肽的質(zhì)、量或空間結(jié)構(gòu)的改變等引起。如馬俊杰等[29]在胸腔鏡下獲取了120例NSCLC患者的腫瘤組織，通過氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）法觀察其代謝物成分，發(fā)現(xiàn)中醫(yī)證型與肺癌組織代謝組學(xué)存在一定的相關(guān)性，以乳酸、葡萄糖、肌醇、磷酸膽堿為最敏感的診斷化合物。楚瑞閣等[30]發(fā)現(xiàn)EGFR 在肺陰虧虛型、氣血虧虛型、痰濕蘊(yùn)肺型、腎陽虛衰型、肺脾氣虛型呈上升趨勢(shì)，根據(jù)EGFR 在不同證型中的差異性表達(dá)或許可以指導(dǎo)臨床用藥。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)已逐漸應(yīng)用于中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究領(lǐng)域，通過構(gòu)建“藥物-靶標(biāo)-疾病”相關(guān)網(wǎng)絡(luò)，有助于深入研究中藥復(fù)方的具體作用機(jī)制，有助于中藥復(fù)方新藥的研發(fā)，并發(fā)現(xiàn)其多靶點(diǎn)的潛在治療作用。羅國安教授[31]提出，中藥復(fù)方（外部干預(yù)系統(tǒng)）與人體（生物應(yīng)答系統(tǒng)）之間是“系統(tǒng)-系統(tǒng)”的相互作用關(guān)系，并給出了從臨床出發(fā)，以信號(hào)通路為靶標(biāo)的復(fù)方新藥的研發(fā)策略。

5 腸道菌群在肺-腸軸中調(diào)控肺癌轉(zhuǎn)移的作用

腸道菌群因其種群數(shù)量巨大，與人體的生理功能密切相關(guān)，被稱為人的“第二基因”。其中，除了維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的最主要功能，對(duì)于肺癌來說，腸道菌群對(duì)于適應(yīng)性免疫的調(diào)節(jié)作用不容忽視。近來研究顯示免疫檢查點(diǎn)抑制劑的療效與腸道菌群的調(diào)控作用密切相關(guān)[32]。目前的研究認(rèn)為腸道菌群的作用主要在于輔助性T細(xì)胞（Th）和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg），通過促進(jìn)Treg表達(dá)負(fù)調(diào)控免疫，幫助維持腸內(nèi)穩(wěn)態(tài)[33]。腸道是人體最大的免疫器官，而在腸道中定居的菌群是調(diào)節(jié)腸道免疫的重要因素。

中醫(yī)傳統(tǒng)理論認(rèn)為“肺與大腸相表里”，而現(xiàn)代研究證實(shí)腸道菌群可通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的分布，進(jìn)而調(diào)控肺臟的區(qū)域免疫狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)CCL25/CCR9 軸介導(dǎo)了肺源性CCR9+CD4+T 細(xì)胞進(jìn)入腸道，改變腸道微生物群的組成并引起腸道免疫損傷[34]。GUI 等發(fā)現(xiàn)使用萬古霉素等抗生素混合藥物破壞小鼠微生物菌群環(huán)境后，順鉑對(duì)于Lewis 肺癌小鼠的抗癌作用下降，而使用乳酸桿菌處理的小鼠則顯示出增強(qiáng)的抗腫瘤反應(yīng)[35]。上述研究均證實(shí)了中醫(yī)理論“肺與大腸”相表里的科學(xué)性，同時(shí)表明中醫(yī)藥研究要注重“間接應(yīng)答”，通過調(diào)節(jié)腸道菌群的平衡或是通過調(diào)節(jié)腸道菌群的代謝發(fā)揮其治病作用。因此，通過腸道菌群的干預(yù)來調(diào)控肺臟區(qū)域免疫，進(jìn)而到達(dá)防治腫瘤的目的，具有一定的應(yīng)用前景。

6 適配子技術(shù)促進(jìn)肺癌基礎(chǔ)-臨床轉(zhuǎn)化

6.1 核酸適配子技術(shù)的優(yōu)勢(shì)

核酸適配子（aptamer）是一種類似抗體且能特異性與靶物質(zhì)結(jié)合的新型識(shí)別分子，其可以與靶點(diǎn)分子（蛋白質(zhì)，病毒，細(xì)菌，細(xì)胞，重金屬離子等）高特異性和高親和力結(jié)合。在臨床上核酸適配子可用于生物成像與腫瘤早期診斷，Tan 等[36]通過cell-SELEX 技術(shù)篩選出了可特異性識(shí)別胰腺導(dǎo)管癌的核酸適配體XQ-2d，其可為胰腺導(dǎo)管癌的診斷與治療提供分子識(shí)別成像探針。Tan 等通過細(xì)胞篩選獲得了能與人急性淋巴細(xì)胞白血病T 細(xì)胞（CCRF-CEM）相結(jié)合的核酸適配子sgc8，以及能與Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞結(jié)合并具有高親合力的核酸適配子TD05[37]。此外，核酸適配子還可用于檢測(cè)微小殘余病灶和微轉(zhuǎn)移灶。即針對(duì)特定腫瘤細(xì)胞的核酸適體，可以直接用作探針探測(cè)腫瘤細(xì)胞。上官等通過細(xì)胞-SELEX方法篩選得到特異性DNA適配子sgc8、sgc3、sgd3和KH1C12，sgc8、sgc3和sgd3能夠從腫瘤和骨髓細(xì)胞混合物中識(shí)別T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞，而KH1C12能夠識(shí)別急性髓細(xì)胞樣白血病細(xì)胞[38]。

6.2 核酸適配子偶合循環(huán)腫瘤細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)移的精準(zhǔn)干預(yù)

循環(huán)腫瘤細(xì)胞是肺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要因素，但存在富集效率低的問題。基于核酸適配子的富集及檢測(cè)方法還能快速高效捕獲和釋放CTCs，并對(duì)CTCs 進(jìn)行定性和定量分析，且能檢測(cè)出血液中的單個(gè)CTCs和不同亞群的腫瘤細(xì)胞。Song 等篩選到EpCAM 的核酸適配子SYL3C，可以從培養(yǎng)基中的混合細(xì)胞中識(shí)別出靶細(xì)胞[39]。

核酸適配子不僅具有分子識(shí)別功能，還可能具有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及調(diào)控作用，故有可能發(fā)展成為一類新型抗腫瘤藥物用于治療腫瘤。目前已篩選出數(shù)十種具有潛在臨床應(yīng)用價(jià)值的抗腫瘤核酸適配子（如AS1411，REG-1 等），其中某些特異性核酸適配子無需經(jīng)過修飾即具有顯著的抗腫瘤作用。同時(shí)，核酸適配子可以通過不同途徑偶聯(lián)化療藥物、納米顆粒以及小分子藥物，達(dá)到精準(zhǔn)靶向治療作用，提高靶向癌癥的效率。如Chen 等[40]利用cell-SELEX 技術(shù)成功篩選到只識(shí)別小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系NCI-H69 而不識(shí)別非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系NCI-H661的核酸適配子。這些研究顯示了核酸適配子在早期肺癌檢測(cè)中的潛力，以及通過靶向CTCs的核酸適配子偶聯(lián)納米顆粒可能具有抗肺癌轉(zhuǎn)移的能力。

7 人工智能促進(jìn)肺癌基礎(chǔ)和轉(zhuǎn)化研究效率

人工智能（Artificial intelligence AI）技術(shù)已融入肺癌的全程管理當(dāng)中。影像診斷與AI 深度結(jié)合大大提高了放射科醫(yī)生的工作效率，在肺癌早期診斷的背景下深度學(xué)習(xí)已經(jīng)運(yùn)用于肺部影像的成像診斷[41]。藥物研發(fā)需要整合大量高通量組學(xué)數(shù)據(jù)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)數(shù)據(jù)乃至圖像等高維表型數(shù)據(jù)，面對(duì)這些數(shù)據(jù)，人工智能技術(shù)在藥物設(shè)計(jì)領(lǐng)域顯示出巨大的前景[42]。人工智能深度習(xí)方法可以進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘信息分析，解釋與制藥相關(guān)的大數(shù)據(jù)以發(fā)現(xiàn)新的藥物[43]。人工智能強(qiáng)大的特征提取、深度學(xué)習(xí)能力已經(jīng)可以應(yīng)用相關(guān)的技術(shù)來預(yù)測(cè)結(jié)構(gòu)，因?yàn)榇蠖鄶?shù)疾病與蛋白質(zhì)功能紊亂有關(guān)，從序列預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)折疊，研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，這種基于結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計(jì)策略可以用來發(fā)現(xiàn)活動(dòng)的小分子朝向蛋白質(zhì)的目標(biāo)[44]。

由于很多藥物并非是單一靶點(diǎn)而是多靶點(diǎn)的發(fā)揮效應(yīng)，特別是中藥復(fù)方，其發(fā)揮作用機(jī)制復(fù)雜，靶點(diǎn)眾多，開發(fā)研究難度高。藥物研發(fā)將涉及基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，代謝網(wǎng)絡(luò)，蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)，藥物靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，藥物-藥物網(wǎng)絡(luò)、藥物-疾病網(wǎng)絡(luò)、目標(biāo)疾病網(wǎng)絡(luò)、藥物不良反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)和疾病-疾病網(wǎng)絡(luò)[45]，人工智能技術(shù)可以將多個(gè)網(wǎng)絡(luò)集成到形成用于改變一種藥物用途的異構(gòu)網(wǎng)絡(luò)。藥物目標(biāo)的預(yù)測(cè)是作為從藥物到疾病的橋梁[46]，一種通過網(wǎng)絡(luò)擴(kuò)散算法整合多個(gè)網(wǎng)絡(luò)信息的異構(gòu)網(wǎng)絡(luò)用于預(yù)測(cè)新的目標(biāo)和適應(yīng)癥[47]。這也符合中醫(yī)理論中“同病異治”、“異病同治”的概念。最后人工智能的數(shù)據(jù)分析功能可以規(guī)避既往臨床研究中遇到過的問題，避免重復(fù)錯(cuò)誤，優(yōu)化設(shè)計(jì)方案。相信在不久的將來，AI 技術(shù)將被期待涵蓋新藥發(fā)現(xiàn)和開發(fā)的所有環(huán)節(jié)[43]，最終在藥物研發(fā)中不可或缺。

8 展望

8.1 完善轉(zhuǎn)移特異性平臺(tái)，促進(jìn)肺癌轉(zhuǎn)化研究

在腫瘤的轉(zhuǎn)移過程中，外周循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞所起的關(guān)鍵作用已經(jīng)得到充分重視。越來越多的研究表明外周血中的CTCs可通過與血小板結(jié)合、與中性粒細(xì)胞結(jié)合、或自身聚集形成CTC 細(xì)胞簇，而CTC 細(xì)胞簇的轉(zhuǎn)移能力顯著強(qiáng)于單個(gè)CTC 細(xì)胞，其可能的機(jī)制是CTC細(xì)胞簇具有失巢凋亡抵抗、逃逸外周免疫殺傷、抵抗外周剪切力的能力[12,13,48]。此外，Liang等研究發(fā)現(xiàn)晚期肺癌患者的CTCs水平與外周血中的NK細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)[49]；Mao等也發(fā)現(xiàn)基于NK細(xì)胞介導(dǎo)的免疫治療可以顯著降低晚期肺癌患者外周血中的CTCs數(shù)目[50]。提示NK細(xì)胞控制腫瘤轉(zhuǎn)移可能通過抑制外周血中的CTCs。因此，采用核酸適配子技術(shù)靶向外周血中的CTCs，尤其是CTCs 細(xì)胞簇，或通過提高NK 細(xì)胞對(duì)CTCs的識(shí)別殺傷，這可能是防治肺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵策略。

8.2 引入系統(tǒng)生物學(xué)思維和技術(shù)，促進(jìn)機(jī)制研究的突破

肺癌轉(zhuǎn)移是目前制約臨床總體療效提高的瓶頸，深入開展轉(zhuǎn)移機(jī)制研究是提高防控效果的前提。轉(zhuǎn)移是一種多步驟，多環(huán)節(jié)的系統(tǒng)性疾病，需要有系統(tǒng)思維的指導(dǎo)。而系統(tǒng)生物學(xué)和中醫(yī)學(xué)具有內(nèi)在的一致性，都有重視整體觀念的優(yōu)勢(shì)，為中醫(yī)藥防治肺癌研究提供了合適的理論參考和研究工具。目前采用系統(tǒng)生物學(xué)思維指導(dǎo)肺癌的中醫(yī)藥研究已經(jīng)成為主流方法。從基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、表觀遺傳學(xué)、代謝組學(xué)、免疫組學(xué)等角度開展肺癌的證候研究、療效機(jī)制研究等已經(jīng)有較多的報(bào)道。而腸道菌群研究也是從系統(tǒng)角度出發(fā)、以免疫調(diào)控為切入點(diǎn)研究中醫(yī)藥防控肺癌的重要領(lǐng)域，尤其契合“肺與大腸相表里”、“脾為后天之本”等中醫(yī)理論核心理念，研究的內(nèi)容和深度逐漸增加。國內(nèi)張衛(wèi)東、羅國安、李梢等在系統(tǒng)生物學(xué)思維啟發(fā)下，主導(dǎo)建立了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)平臺(tái)、中藥復(fù)方新藥研發(fā)等平臺(tái)，揭示了證候基礎(chǔ)和中藥復(fù)方新藥的作用基礎(chǔ)。人工智能技術(shù)在分析多組學(xué)大數(shù)據(jù)中更有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，已經(jīng)滲透到肺癌臨床診療管理、藥物研發(fā)等領(lǐng)域，隨著多組學(xué)的產(chǎn)生日劇加快，基于大數(shù)據(jù)的人工智能將在肺癌的轉(zhuǎn)化研究中起到更重要的作用。

8.3 積極融合現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，促進(jìn)肺癌基礎(chǔ)和轉(zhuǎn)化研究效率

隨著生命科學(xué)和信息科學(xué)的飛速發(fā)展，新理論和新技術(shù)不斷涌現(xiàn)。中醫(yī)藥研究要結(jié)合自身重視整體和思辨的學(xué)科特點(diǎn)，積極融合現(xiàn)代科技發(fā)展，尤其是系統(tǒng)生物學(xué)、人工智能和量子力學(xué)等學(xué)科的發(fā)展，促進(jìn)自身學(xué)科理論的更新和完善。

中醫(yī)藥具有“治未病”的優(yōu)勢(shì)，在預(yù)防肺癌發(fā)生和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中具有很大潛力。

要積極進(jìn)行肺癌發(fā)病理論的理論創(chuàng)新和技術(shù)平臺(tái)創(chuàng)新，為轉(zhuǎn)化研究提供平臺(tái)，最終提高中醫(yī)藥防控肺癌的整體效果。