白菊濕疹乳膏藥效學(xué)研究

史向華 ，楊文彬 ，薛潤苗 ，張彩峰 ，李百強 ，柴秋彥 ，張俊榮

（1.山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院，山西太原030006； 2.山西中醫(yī)藥大學(xué)，山西晉中030619）

皮炎濕疹屬于臨床變態(tài)反應(yīng)性皮膚病之一，變態(tài)反應(yīng)即過敏，具有較復(fù)雜的病理成因與類型多樣的皮膚損傷形式。臨床上以紅斑、丘疹、丘皰疹、瘙癢難忍為主要表現(xiàn)，慢性者表現(xiàn)為浸潤肥厚，難以徹底治愈且具有極高的復(fù)發(fā)性［1]。目前西醫(yī)治療濕疹常采用抗過敏療法，盡管初期可快速控制病情，但容易復(fù)發(fā)，不良反應(yīng)較大。故而臨床開始注重使用中醫(yī)療法。新型中藥制劑白菊濕疹乳膏是在臨床經(jīng)驗方的基礎(chǔ)上研制而成，作用明確，療效顯著。本研究受中國人民武裝警察部隊藥品儀器檢驗所委托，對其藥效學(xué)進行評價，并為臨床試驗提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 藥品與試劑 白菊濕疹乳膏由中國人民武裝警察部隊藥品儀器檢定所提供（樣品為淡棕褐色軟膏，純度：99.1%，置冰箱中備用）。復(fù)方醋酸地塞米松乳膏（皮炎平）20 g：15 mg，廣州白云山制藥有限公司白云山何濟公制藥廠，批號：V1037。2，4-二硝基氯苯（DNCB）：中國醫(yī)藥公司北京分公司，批號：20101026，使用時配制成l%致敏濃度，0.1%激發(fā)濃度。

1.1.2 實驗動物 雄性清潔級KM小鼠50只，體質(zhì)量18～21 g，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心，許可證號：SCXK-（軍）2007-004，實驗動物質(zhì)量合格證號：0017609。雄性清潔級KM小鼠，60只，體質(zhì)量（20±2.0）g，中國食品藥品檢定研究院實驗動物資源研究所提供，許可證號：SCXK-（京）2009-0017，實驗動物質(zhì)量合格證號：0269607。豚鼠，60只，雌雄各半，北京昌揚實驗動物養(yǎng)殖中心提供，合格證號：SCXK（京）2011-0010。

1.2 實驗方法

1.2.1 白菊濕疹膏對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響［2]雄性小鼠50只，隨機分為低、中、高劑量藥物組，陽性對照組及空白對照組5組，每組10只。低、中、高劑量藥物組分別在小鼠右耳耳廓均勻涂抹白菊濕疹乳膏 0.5 g/kg，1.0 g/kg，2.0 g/kg，陽性對照組在小鼠右耳耳廓均勻涂抹皮炎平乳膏1.0 g/kg，空白對照組在小鼠右耳耳廓均勻涂抹空白基質(zhì)1.0 g/kg，2 次/d，連續(xù) 3 d，第 4 天涂藥 1 h 后，對各組小鼠右耳涂予二甲苯致炎，每只0.05mL，4 h后，各組以純化水洗去小鼠右耳耳廓涂抹的藥液，用棉球擦干后將小鼠處死，剪下雙耳，用直徑為8 mm打孔器將雙耳相同部位打下圓耳片，用電子天平稱重，以左耳作對照，左右耳片質(zhì)量之差為腫脹程度，計算各組腫脹度，求出腫脹抑制率。即空白對照組平均腫脹度與給藥組平均腫脹度之差占空白對照組平均腫脹度的百分比。

1.2.2 白菊濕疹膏對磷酸組胺致豚鼠足跖致癢閾的影響［3－5]豚鼠 60 只，雌雄各半，體質(zhì)量 300～350g，隨機分為空白對照組，陽性對照組，低、中、高劑量藥物組，基質(zhì)對照組6組，每組10只。白菊濕疹膏低、中、高劑量組均涂抹相應(yīng)藥膏 0.5 g/kg，1.0 g/kg，2.0 g/kg，陽性對照組在小鼠右耳耳廓均勻涂抹皮炎平乳膏1.0 g/kg，空白對照組在小鼠右耳耳廓均勻涂抹0.9%氯化鈉注射液0.05 mL，基質(zhì)對照組涂抹空白基質(zhì)1.0 g/kg。每天涂藥2次，間隔6 h給藥1次，連續(xù)給藥 7 d。實驗前1 d，給各組豚鼠右后足背剃毛，并涂藥1次。實驗當(dāng)日，用0號砂紙擦傷動物右后足背剃毛處，以少量滲血為度，面積約1 cm2，局部再涂藥1次，末次給藥后30min開始在創(chuàng)面處滴以 0.02%磷酸組胺 0.05mL/只，每次間隔時間為3min，以開始出現(xiàn)豚鼠回頭舔右后足時所給予的磷酸組胺總量為致癢閾。

1.2.3 白菊濕疹膏對 DNCB誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響［3－4]昆明種小鼠60只，隨機分為6組，脫毛前處理、涂藥方法及分組均同 1.2.2。實驗第2天與第3天均用5%DNCB溶液0.1 mL均勻涂抹各組小鼠腹部致敏，第7天于涂藥后2 h，用1%DNCB 0.1mL涂各小鼠右耳激發(fā)，在激發(fā)24 h后，頸椎脫臼處死小鼠，剪下雙耳，對齊，用8 mm打孔器取下圓型耳片，迅速用分析天平稱量雙耳，并計算腫脹度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 白菊濕疹膏對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響結(jié)果見表1。

表1 對小鼠二甲苯所致耳廓腫脹情況 （±s）

表1 對小鼠二甲苯所致耳廓腫脹情況 （±s）

注：與空白對照組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01

組別 n 劑量（g·kg） 腫脹度（mg） 腫脹抑制率（%）低劑量藥物組 10 0.5 8.42±2.801） 20.11中劑量藥物組 10 1.0 6.30±3.602） 40.23高劑量藥物組 10 2.0 5.32±2.822） 49.53陽性對照組 10 1.0 6.10±2.582） 42.13空白對照組 10 1.0 10.54±3.32 20.11

由表1可以看出，與空白對照組比較，低、中、高劑量藥物組及陽性對照組耳廓腫脹度均明顯減輕，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。表明皮炎平及白菊濕疹乳膏能明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳廓炎癥，且實驗藥物隨劑量增大效果更趨明顯。

2.2 白菊濕疹膏對磷酸組胺致豚鼠足跖癢致癢閾的影響

結(jié)果見表2。

表2 對豚鼠磷酸組胺致足癢致癢閾的影響 （±s）

表2 對豚鼠磷酸組胺致足癢致癢閾的影響 （±s）

注：與空白對照組比較，P＜0.05，P＜0.01

組別 n 劑量（g·kg） 致癢閾（vg）空白對照組 12 0 56.8±23.2基質(zhì)對照組 12 0.5 78.8±25.7低劑量藥物組 12 0.5 79.6±31.6中劑量藥物組 12 1.0 105.0±44.61）高劑量藥物組 12 2.0 165.8±58.92）陽性對照組 12 0.5 204.2±55.12）1）2）

由表2可見，低劑量藥物組雖有一定的作用，但與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。中、高劑量藥物組及陽性對照組與空白對照組比較，致癢閾顯著提高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。說明濕疹乳膏與皮炎平可顯著提高磷酸組胺對豚鼠的致癢閾。

2.3 白菊濕疹膏對DNCB誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響

結(jié)果見表3。

表3 對小鼠DNCB誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響 （±s）

表3 對小鼠DNCB誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響 （±s）

注：與空白對照組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01

組別 n 劑量（g·kg） 腫脹度（mg）腫脹抑制率（%）空白對照組 10 0 7.55±4.97 －基質(zhì)對照組 10 1.0 7.99±6.02 －低劑量藥物組 10 0.5 10.03±6.03 －25.53中劑量藥物組 10 1.0 4.17±4.161） 44.76高劑量藥物組 10 2.0 2.62±1.462） 65.29陽性對照組 10 1.0 2.32±2.192） 69.27

由表3可見，DNCB誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型組（空白對照組）出現(xiàn)顯著腫脹，說明模型復(fù)制成功。與模型組比較，中、高劑量藥物組和皮炎平組均可顯著減輕小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型耳廓皮膚的腫脹質(zhì)量（P＜0.05，P＜0.01），說明白菊濕疹膏可顯著改善小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型耳廓皮膚病變。

3 討論

本研究是在前期實驗結(jié)果的基礎(chǔ)之上，進一步研究白菊濕疹乳膏的抗炎作用，以期為臨床用藥提供實驗依據(jù)。

炎癥早期的主要表現(xiàn)是毛細管擴張、通透性增加、滲出和水腫，二甲苯作為致炎劑能夠增加小鼠耳部血流量、增強血管通透性，從而引起小鼠耳腫脹。實驗結(jié)果表明，白菊濕疹乳膏能明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹度，且高劑量組抑制率達到49.53%，抗炎效果更趨明顯。

組織胺是經(jīng)典的瘙癢介質(zhì)。其通過H1或H2受體引起皮膚和黏膜毛細血管擴張和滲透性增高，產(chǎn)生紅斑、水腫，通過刺激神經(jīng)末梢而引起瘙癢［6]。本實驗結(jié)果顯示，白菊濕疹乳膏可明顯提高磷酸組胺對豚鼠的致癢閾，表明該制劑具有明顯的止癢作用。

DNCB是一種半抗原，與皮膚表面的蛋白質(zhì)結(jié)合后成為完全抗原，可誘發(fā)機體產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反應(yīng)。當(dāng)一定抗原進入機體內(nèi)，能刺激T淋巴細胞轉(zhuǎn)化為特異的致敏T淋巴細胞，致敏T淋巴細胞分布于全身皮膚內(nèi)，當(dāng)該抗原再次接觸皮膚，致敏T淋巴細胞大量增殖，并釋放多種細胞因子，局部引起以單核細胞浸潤為主的炎癥反應(yīng)［7]。本實驗結(jié)果顯示白菊濕疹膏可顯著抑制DNCB誘發(fā)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型組出現(xiàn)的皮膚腫脹，且隨劑量增大抗炎效果增強，具有一定的量-效關(guān)系，表明白菊濕疹乳膏具有良好的抗炎、止癢作用。