• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    補(bǔ)腎活血方對URSA患者外周血中IL-12和IFN-γ影響的臨床研究①

    2019-09-04 09:12:20馮曉玲劉慶麗
    中國免疫學(xué)雜志 2019年15期
    關(guān)鍵詞:蛻膜孕酮外周血

    馮曉玲 賈 丹 劉慶麗 張 楊

    (黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院,哈爾濱 150040)

    復(fù)發(fā)性流產(chǎn)是指與同一個(gè)配偶連續(xù)發(fā)生2次及以上的自然胚胎丟失或停止發(fā)育[1]。本病的病因復(fù)雜,除遺傳因素、子宮畸形和子宮肌瘤等解剖學(xué)因素、內(nèi)分泌因素、生殖道感染因素、免疫因素、血栓形成傾向以及環(huán)境因素外,另外還有大約40%的患者病因不明,稱為不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(Unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)[2]。隨著對本病認(rèn)識的深入,研究發(fā)現(xiàn)免疫因素是導(dǎo)致URSA發(fā)生的直接因素,其中Th1/Th2失衡是導(dǎo)致本病發(fā)生的主要原因[3]。祖國醫(yī)學(xué)對本病有了更深入的認(rèn)識,補(bǔ)腎活血法治療URSA患者也取得了顯著的臨床療效,本文通過臨床研究,探討補(bǔ)腎活血方對URSA患者外周血中IL-12和IFN-γ的影響。

    1 資料與方法

    1.1資料

    1.1.1URSA患者 2016年2月~2017年2月期間就診于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院URSA患者61例作為研究對象,排除患有精神疾病不能完成治療及患有肝腎功能異常、風(fēng)濕等全身系統(tǒng)疾病,兩組病例年齡及孕周比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn),患者均簽署知情同意書。患者年齡23~41歲,平均年齡(30.75±4.02)歲,停經(jīng)周數(shù)為6~8周。分為補(bǔ)腎活血方聯(lián)合地屈孕酮31例(URSA-1),其中治療期間1例未按要求治療,和單用地屈孕酮30例(URSA-2)。

    1.1.2URSA妊娠失敗患者 2016年2月~2017年2月期間就診于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院的URSA妊娠失敗患者15例作為實(shí)驗(yàn)組(URSA-3),納入標(biāo)準(zhǔn)為年齡22~42歲,妊娠<12周者,符合早期URSA西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)及中醫(yī)腎虛血瘀證證候診斷標(biāo)準(zhǔn)而未經(jīng)任何治療URSA流產(chǎn)者。排除標(biāo)準(zhǔn)為不符合納入病例標(biāo)準(zhǔn)者,如胚胎染色體核型分析異常和病因明確者?;颊吣挲g23~40歲,平均年齡(32.33±4.74)歲,停經(jīng)周數(shù)為6~10周,正常妊娠人工流產(chǎn)患者15例作為對照組(Control),納入標(biāo)準(zhǔn)為患者年齡和妊娠周數(shù)同上并且為正常妊娠,無自然流產(chǎn)史,有一次或一次以上正常生育史,既往生育子女均健康,夫妻無遺傳病史,此次妊娠狀況良好,實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)及超聲正常,要求進(jìn)行人工流產(chǎn)患者。排除標(biāo)準(zhǔn)為首次妊娠婦女;有保胎意愿;胚胎染色體核型分析異常者;實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)及超聲有異常者。年齡29~41歲,平均(33.80±3.74)歲,孕周范圍為6~10周。本研究已獲得倫理委員會批準(zhǔn),并在獲得患者知情同意后,收集患者蛻膜組織。

    1.2方法

    1.2.1給藥方式 URSA-1患者給予補(bǔ)腎活血方聯(lián)合地屈孕酮口服治療4周。URSA-2患者單獨(dú)給予地屈孕酮口服治療4周。中藥補(bǔ)腎活血方,藥物如下:丹參15 g,菟絲子15 g,續(xù)斷15 g,桑寄生15 g,阿膠(烊化)10 g,黃芪15 g。根據(jù)患者情況隨證加減,日一劑200 ml水煎服,早晚分服,以上中藥湯劑均由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院中藥局及煎藥室提供。地屈孕酮片:10 mg,口服2次/d,從住院開始服用,服用4周。地屈孕酮片(達(dá)芙通,荷蘭Abbott Healthcare Products BV公司)國藥準(zhǔn)字H20130110,規(guī)格10 mg/片。

    1.2.2ELISA檢測 URSA-1組和URSA-2組患者入組前以及入組4周后均采血,統(tǒng)一應(yīng)用ELISA法檢測患者血清中IL-12、IFN-γ的水平。使用Human IL-12 ELISA試劑盒和Human IFN-γ ELISA kit試劑盒(江蘇科特生物科技有限公司),具體操作步驟均按照試劑盒步驟進(jìn)行。

    1.2.3RT-PCR檢測 分別收集URSA-3組和Control組早孕期婦女行人工流產(chǎn)的蛻膜組織,用RT-PCR方法檢測兩組患者蛻膜組織中的IL-12Rβ1、IL-12Rβ2、IFN-γR mRNA的表達(dá)量。TRizol購自Invitrogen公司,M-MLV Reverse Transcriptase購自Promega公司。RT-PCR使用2×SYBR Green qPCR Master Mix試劑盒(BIOTOOL)。具體操作步驟按照說明書進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用比較Ct法定量,2-ΔΔCt表示目的基因的相對表達(dá)量。ΔCt =Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因,ΔΔCt=ΔCt待測樣品-ΔCt對照組。將逆轉(zhuǎn)錄得到的完整cDNA模板進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增,以此設(shè)定的程序運(yùn)行RT-PCR儀,由此得出擴(kuò)增曲線。

    1.2.4妊娠結(jié)局與隨訪情況比較 截止2018年1月,剔除本研究中脫落的患者,對其余患者進(jìn)行電話隨訪調(diào)查,URSA-1組有1例患者在妊娠32周左右時(shí)產(chǎn)檢發(fā)現(xiàn)胎盤老化住院治療,治療后分娩一名健康胎兒;2例患者在妊娠14周左右出現(xiàn)陰道流血不止,發(fā)生難免流產(chǎn),胎兒做染色體核型分析均未見異常。余皆無明顯不適,分娩健康胎兒中,Apgar評分8~10分。URSA-2組有3例患者妊娠14周左右,發(fā)現(xiàn)胎兒停止發(fā)育,妊娠約12周;2例患者妊娠15周左右出現(xiàn)陰道流血量增多,腹痛不止,發(fā)生難免流產(chǎn);3例患者妊娠21周左右行超聲檢查,發(fā)現(xiàn)無胎心,胎兒做染色體核型分析均未見異常;余皆分娩健康胎兒,Apgar評分8~10分。

    2 結(jié)果

    2.1URSA-1組和URSA-2組患者血清中IL-12、IFN-γ的水平

    2.1.1外周血中IL-12標(biāo)準(zhǔn)曲線 ELISA法測定兩組臨床患者血清中IL-12水平,與標(biāo)準(zhǔn)品對照后吸光度曲線如圖1、表1所示。

    2.1.2外周血中IFN-γ標(biāo)準(zhǔn)曲線 ELISA法測定兩組臨床患者血清中IFN-γ水平,與標(biāo)準(zhǔn)品對照后吸光度曲線如圖2、表2所示。

    2.2URSA-3組和Control組患者流產(chǎn)蛻膜組織中IL-12Rβ1、IL-12Rβ2、IFN-γR組擴(kuò)增曲線 我們通過RT-PCR法測定URSA組與Control組流產(chǎn)蛻膜組織中IL-12Rβ1、IL-12Rβ2、IFN-γR的含量,使用軟件繪制出各項(xiàng)觀測指標(biāo)的擴(kuò)增曲線(圖3、4)。

    GroupsnBefore treatmentAfter treatmenttPURSA-13041.65±11.4532.52±9.071)12.1010.000URSA-23043.82±11.70 37.71±10.472)3)10.2000.000

    Note:Compared with the URSA-1 before treatment,1)P<0.01;compared to the URSA-2 before treatment,2)P<0.01;compared with the URSA-1 after treatment,3)P<0.01.

    圖2 URSA-1組和URSA-2組患者血清中IFN-γ水平曲線圖Fig.2 Serum IFN-γ level curve in URSA-1 group and URSA-2 group patients

    GroupsnBefore treatmentAfter treatmenttPURSA-13037.87±9.4727.92±7.641)3.9030.000URSA-230 39.68±10.1233.08±8.892)3)2.7450.000

    Note:Compared with the URSA-1 before treatment,1)P<0.01;compared to the URSA-2 before treatment,2)P<0.01;compared with the URSA-1 after treatment,3)P<0.01.

    圖3 URSA-3組和Control組患者流產(chǎn)蛻膜組織中IL-12Rβ1、IL-12Rβ2和IFN-γR擴(kuò)增曲線Fig.3 Amplification curves of IL-12Rβ1,IL-12Rβ2 and IFN-γR in decidua tissue of abortion in URSA-3 group and Control groupNote: nt is the control group,ut is the URSA group.

    圖4 GAPDH擴(kuò)增曲線Fig.4 GAPDH amplification curvesNote: nt is the control group,ut is the URSA group.

    表3 URSA-3組與Control組蛻膜組織中IL-12Rβ1、IL-12 Rβ2和IFN-γR mRNA相對表達(dá)量

    Tab.3 Relative expression of IL-12Rβ1,IL-12Rβ2 and IFN-γR mRNA in decidua tissues of URSA-3 group and Control group

    GroupsnIL-12Rβ1 mRNAIL-12Rβ2 mRNAIFN-γR mRNAControl150.69±0.270.59±0.160.62±0.16URSA-3151.81±0.291.13±0.250.99±0.22P0.0000.0070.000

    表4 URSA-1組和URSA-2組臨床妊娠結(jié)局比較

    Tab.4 Total clinical efficacy of URSA-1 group and URSA-2 group

    GroupsnLive birth babyabortionTotal effective rate(%)URSA-13028293.3URSA-23022873.3

    2.3URSA-3與Control組蛻膜IL-12Rβ1、IL-12β2、IFN-Rγ mRNA表達(dá)比較 兩組URSA患者的蛻膜組織中,URSA-3組中IL-12Rβ1、IL-12Rβ2、IFN-Rγ mRNA表達(dá)均高于Control組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表3。

    2.4妊娠結(jié)局及隨訪情況比較 總療效如表4所示,兩組相比臨床保胎成功率差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說明URSA-1組與URSA-2組相比,臨床療效更好。

    3 討論

    近年來生殖免疫學(xué)的研究越來越深入,免疫因素在生殖中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,而且發(fā)現(xiàn)URSA的發(fā)生可能與母胎界面間免疫耐受機(jī)制相關(guān),是免疫排斥的結(jié)果。URSA這種病理性妊娠可能是因?yàn)榧?xì)胞因子的分泌異常或者母胎界面局部細(xì)胞功能異常引起的。

    正常妊娠期,母體的各項(xiàng)機(jī)能都會發(fā)生相應(yīng)變化,尤其是免疫功能方面,包括特異性的免疫抑制、抑制性T細(xì)胞和非特異性因子維持正常妊娠。這種環(huán)境一旦被打破,母體就會對胎兒產(chǎn)生免疫排斥,進(jìn)而可能引起妊娠失敗[4,5]。近年來,學(xué)者們對URSA的生殖免疫學(xué)因素進(jìn)行了諸多研究,發(fā)現(xiàn)與免疫相關(guān)的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)可以分為自身免疫型和同種免疫型,同種免疫型又稱原因不明型。同種免疫型URSA與母胎界面免疫耐受不平衡具有相關(guān)性,同種免疫型URSA的原因包括Th1與Th2細(xì)胞因子的失衡、封閉抗體低下、NK細(xì)胞活性及亞型表達(dá)異常、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞表達(dá)異常等。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是一類具有免疫抑制功能的T細(xì)胞亞型,表達(dá)CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的亞型起源于胸腺[6],在機(jī)體的免疫耐受和調(diào)控免疫應(yīng)答中發(fā)揮不可忽視的作用[7]。妊娠期間胎兒所攜帶的抗原能夠被母體的抗原呈遞細(xì)胞所識別,并呈遞給特定的CD4+T細(xì)胞,CD4+T細(xì)胞受到刺激后分化為Th1、Th2、Th17和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,從而在母胎界面形成特定的免疫微環(huán)境。Th1型細(xì)胞因子主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng),產(chǎn)生胚胎排斥作用;Th2細(xì)胞因子主要促進(jìn)抗體生成和介導(dǎo)體液免疫,起到抗炎性反應(yīng)的作用,對Th1細(xì)胞有抑制作用,故對妊娠有利。Th1/Th2細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)調(diào)控這兩種免疫應(yīng)答,其過程和方式錯綜復(fù)雜。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,流產(chǎn)的發(fā)生與Th1/Th2的偏移密切相關(guān),正常妊娠需要Th1/Th2保持平衡,打破這種平衡,將導(dǎo)致URSA的發(fā)生[8,9]。Th1型細(xì)胞主要分泌IL-2、 IL-12、TNF-α等細(xì)胞因子,Th2型細(xì)胞主要分泌粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、IL-4、 IL-6等因子[10]。

    IL-12是一種由淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和其他抗原呈遞細(xì)胞產(chǎn)生的通過二硫鍵將分子量35 kD(P35)和40 kD(P40)兩個(gè)亞基結(jié)合組成的一種細(xì)胞因子,是白介素家族中的一員。IL-12與其受體(IL-12Rβ1和IL-12Rβ2兩個(gè)鏈構(gòu)成的異二聚體)之間具有很高的親和力。P40亞單位是可溶性的蛋白,且為誘導(dǎo)性表達(dá),與免疫細(xì)胞表面對應(yīng)的受體IL-12Rβ1相結(jié)合;而P35亞基為組成性低水平表達(dá),與對應(yīng)的受體IL-12Rβ2相結(jié)合并產(chǎn)生免疫傳導(dǎo)信號。IL-12有多種生物活性,在機(jī)體炎性反應(yīng)早期和感染時(shí)期即可產(chǎn)生,其中最主要的生物學(xué)特性是調(diào)節(jié)Th細(xì)胞亞群的平衡。IL-12是連接抗原特異適應(yīng)性免疫與先天免疫應(yīng)答的關(guān)鍵因子,在細(xì)胞免疫應(yīng)答的過程中起調(diào)節(jié)作用,并且可以誘導(dǎo)細(xì)胞免疫排斥反應(yīng)。國內(nèi)外研究證明,IL-12水平的異常與URSA的發(fā)生具有相關(guān)性[11,12]。

    研究者在1965年發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞培養(yǎng)上清液中有IFN樣抗病毒物質(zhì),另一團(tuán)隊(duì)在1973年于淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中也發(fā)現(xiàn)干擾素存在,1980年將其命名為IFN-γ。IFN-γ主要由活化的T細(xì)胞及NK細(xì)胞產(chǎn)生,亦屬于Th1型細(xì)胞因子,可以抑制Th2細(xì)胞增生。相關(guān)研究證明,URSA患者外周血中IFN-γ水平相比于正常未孕婦女明顯升高。IFN-γ導(dǎo)致流產(chǎn)可能通過以下多種途徑,一方面促進(jìn)Th0向Th1細(xì)胞分化,激活 NK細(xì)胞的殺傷毒性;另一方面,能夠促進(jìn)免疫應(yīng)答反應(yīng),使胎盤細(xì)胞發(fā)生凋亡,同時(shí)能促使滋養(yǎng)細(xì)胞表面黏附分子的表達(dá),損傷滋養(yǎng)細(xì)胞的生長發(fā)育[13,14]。

    本研究結(jié)果表明,URSA患者蛻膜組織中IL-12R及IFN-γR的含量明顯高于正常早孕人流組。說明二者的異常表達(dá)可能通過改變蛻膜組織中細(xì)胞因子的作用,進(jìn)一步影響母胎界面免疫耐受及Th1/Th2的平衡,導(dǎo)致流產(chǎn)[15,16]。提示IL-12、IFN-γ可能與URSA的發(fā)病相關(guān)。用ELISA法對分別用補(bǔ)腎活血方聯(lián)合地屈孕酮及單純地屈孕酮治療的兩組URSA患者治療前后外周血中的IL-12、IFN-γ水平進(jìn)行測定,結(jié)果發(fā)現(xiàn),治療后URSA患者外周血中IL-12、IFN-γ水平明顯降低,并且補(bǔ)腎活血方及地屈孕酮聯(lián)合用藥療效明顯優(yōu)于單純地屈孕酮組,為補(bǔ)腎活血治療URSA臨床應(yīng)用提供了參考依據(jù)。

    本實(shí)驗(yàn)檢測蛻膜組織IFN-γR和IL-12R mRNA表達(dá)水平,今后我們的研究方向應(yīng)增加檢測治療前外周血中IL-12與IFN-γ水平的臨床部分,并分析細(xì)胞因子與蛻膜組織靶細(xì)胞膜表面相關(guān)受體作用的相關(guān)性。同時(shí)擴(kuò)大樣本量,減少地域因素帶來的影響,以達(dá)到減少誤差的效果,并進(jìn)行多因素分析,設(shè)計(jì)相關(guān)的動物實(shí)驗(yàn),深入研究蛻膜組織中的IL-12、IFN-γ水平及導(dǎo)致URSA的機(jī)制,彌補(bǔ)不足。對患者進(jìn)行遠(yuǎn)期隨訪,完善兒童智力、生長發(fā)育狀況等方面的資料,為補(bǔ)腎活血方長期廣泛應(yīng)用于臨床治療URSA提供依據(jù)。

    猜你喜歡
    蛻膜孕酮外周血
    補(bǔ)腎活血方對不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者蛻膜與外周血中IL-21、IL-27的影響
    蛻膜化缺陷在子癇前期發(fā)病機(jī)制中的研究進(jìn)展
    經(jīng)前煩躁障礙癥發(fā)病與四氫孕酮敏感性中西醫(yī)研究進(jìn)展
    妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥蛻膜組織T細(xì)胞和B細(xì)胞失調(diào)與病情程度的關(guān)系
    肝臟(2020年12期)2021-01-11 10:44:30
    人早孕蛻膜基質(zhì)細(xì)胞對育齡期女性外周血Treg的影響
    腹腔血與靜脈血β-HCG與孕酮比值在診斷異位妊娠中的價(jià)值
    白血病外周血體外診斷技術(shù)及產(chǎn)品
    結(jié)腸炎小鼠外周血和結(jié)腸上皮組織中Gal-9的表達(dá)
    慢性蕁麻疹患者外周血IL-17和IL-23的表達(dá)及臨床意義
    2型糖尿病患者外周血中hsa-miR-29b的表達(dá)及臨床意義
    香蕉丝袜av| 免费观看性生交大片5| 美女主播在线视频| 国产免费现黄频在线看| 两个人免费观看高清视频| 亚洲国产色片| 青青草视频在线视频观看| 波多野结衣一区麻豆| 丝袜人妻中文字幕| 美女高潮到喷水免费观看| 成年女人在线观看亚洲视频| 一级爰片在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| av在线播放精品| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产精品 国内视频| 日本黄色日本黄色录像| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产乱来视频区| 亚洲一区中文字幕在线| 毛片一级片免费看久久久久| 国产成人精品久久二区二区91 | 欧美xxⅹ黑人| 久久久国产精品麻豆| 免费少妇av软件| 亚洲三区欧美一区| 亚洲精品国产av成人精品| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 高清av免费在线| freevideosex欧美| 亚洲在久久综合| 亚洲久久久国产精品| 一个人免费看片子| 国产成人欧美| 欧美亚洲日本最大视频资源| 三级国产精品片| 一边摸一边做爽爽视频免费| 水蜜桃什么品种好| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产精品嫩草影院av在线观看| 午夜91福利影院| 久久ye,这里只有精品| 午夜福利,免费看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲av电影在线进入| 国产精品av久久久久免费| 黄频高清免费视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产精品.久久久| 亚洲国产日韩一区二区| 九草在线视频观看| 99国产精品免费福利视频| 久久久欧美国产精品| 1024香蕉在线观看| 日韩视频在线欧美| 伦精品一区二区三区| 日本黄色日本黄色录像| 大香蕉久久网| 岛国毛片在线播放| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久久久精品人妻al黑| 久久久欧美国产精品| 伦理电影大哥的女人| 在线天堂中文资源库| 久久久欧美国产精品| 久热这里只有精品99| 1024香蕉在线观看| 午夜福利,免费看| 国产精品国产av在线观看| 国产探花极品一区二区| av在线老鸭窝| 国产爽快片一区二区三区| 妹子高潮喷水视频| 国产亚洲一区二区精品| 久久久久网色| 丰满少妇做爰视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲四区av| 亚洲欧美清纯卡通| 欧美精品亚洲一区二区| 国产日韩欧美视频二区| 如何舔出高潮| 韩国精品一区二区三区| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 九九爱精品视频在线观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产亚洲欧美精品永久| 青春草亚洲视频在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 最近中文字幕高清免费大全6| www.精华液| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲美女黄色视频免费看| 大话2 男鬼变身卡| 久久女婷五月综合色啪小说| a级片在线免费高清观看视频| 午夜影院在线不卡| 国产精品久久久av美女十八| 18禁动态无遮挡网站| av不卡在线播放| 久久青草综合色| 亚洲情色 制服丝袜| 国产激情久久老熟女| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲国产av影院在线观看| av福利片在线| 日韩av不卡免费在线播放| 久久人妻熟女aⅴ| 九草在线视频观看| 久久久久久久久久久免费av| 叶爱在线成人免费视频播放| 成人毛片a级毛片在线播放| 丝袜美腿诱惑在线| videosex国产| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 国产免费现黄频在线看| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲中文av在线| 国产探花极品一区二区| 国产精品二区激情视频| 免费在线观看完整版高清| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产成人精品福利久久| 国产精品二区激情视频| 1024香蕉在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| tube8黄色片| 精品一区二区三卡| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲国产看品久久| 青春草视频在线免费观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产又爽黄色视频| 免费黄频网站在线观看国产| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲成人一二三区av| 日韩一区二区三区影片| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久久久久人妻| 男人舔女人的私密视频| 涩涩av久久男人的天堂| 国产亚洲精品第一综合不卡| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久久a久久爽久久v久久| 少妇精品久久久久久久| 在线观看人妻少妇| 国产精品国产av在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 高清视频免费观看一区二区| 伦精品一区二区三区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 九草在线视频观看| 亚洲成人av在线免费| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲一码二码三码区别大吗| av在线观看视频网站免费| 中文字幕色久视频| 丰满乱子伦码专区| 国产亚洲最大av| 9色porny在线观看| 丝袜美足系列| 国产精品嫩草影院av在线观看| a 毛片基地| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 波多野结衣av一区二区av| 美女中出高潮动态图| 精品视频人人做人人爽| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产伦理片在线播放av一区| 五月开心婷婷网| 国产极品天堂在线| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 在线观看国产h片| 性色avwww在线观看| 在线观看免费高清a一片| 日韩欧美精品免费久久| 少妇 在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 青春草视频在线免费观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 少妇人妻 视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产精品熟女久久久久浪| 国产爽快片一区二区三区| 蜜桃在线观看..| 久久精品国产亚洲av高清一级| 免费在线观看黄色视频的| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 99久久综合免费| 国产黄色视频一区二区在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 一级爰片在线观看| 久久久久精品人妻al黑| 男女免费视频国产| 男女边摸边吃奶| 亚洲欧洲国产日韩| 大片电影免费在线观看免费| 免费观看性生交大片5| 2021少妇久久久久久久久久久| 中文字幕制服av| 青春草视频在线免费观看| 黄色配什么色好看| 欧美精品一区二区大全| 欧美中文综合在线视频| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲伊人色综图| 在线天堂中文资源库| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 老司机亚洲免费影院| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 美女福利国产在线| 老司机影院成人| 999精品在线视频| 男人舔女人的私密视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 欧美最新免费一区二区三区| 男女啪啪激烈高潮av片| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日韩伦理黄色片| 各种免费的搞黄视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 久久人人爽人人片av| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 一区二区日韩欧美中文字幕| 欧美黄色片欧美黄色片| 男女边摸边吃奶| 免费高清在线观看视频在线观看| 免费在线观看黄色视频的| 亚洲精品国产色婷婷电影| av卡一久久| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| videos熟女内射| 日韩电影二区| 亚洲,欧美,日韩| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 精品一区二区免费观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 久久精品国产综合久久久| 狂野欧美激情性bbbbbb| videos熟女内射| 亚洲国产日韩一区二区| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 最新中文字幕久久久久| √禁漫天堂资源中文www| 丝袜美足系列| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 男女午夜视频在线观看| 国产毛片在线视频| 黄频高清免费视频| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲综合色网址| 亚洲色图综合在线观看| www日本在线高清视频| 少妇熟女欧美另类| 国产野战对白在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 男女免费视频国产| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 97在线视频观看| 美女国产视频在线观看| 亚洲国产精品一区三区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 欧美在线黄色| 黑丝袜美女国产一区| 国产麻豆69| 国产1区2区3区精品| 久久精品夜色国产| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲精品乱久久久久久| 在线观看免费高清a一片| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 免费大片黄手机在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 搡女人真爽免费视频火全软件| 免费观看性生交大片5| 欧美日韩av久久| tube8黄色片| 人体艺术视频欧美日本| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 免费观看a级毛片全部| 亚洲精品国产色婷婷电影| 少妇人妻精品综合一区二区| 性色avwww在线观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲成人av在线免费| 26uuu在线亚洲综合色| 国产一区二区 视频在线| 国产老妇伦熟女老妇高清| 老女人水多毛片| 黄色配什么色好看| 免费观看av网站的网址| 街头女战士在线观看网站| √禁漫天堂资源中文www| 一级a爱视频在线免费观看| 久久av网站| 成人国产麻豆网| 男男h啪啪无遮挡| 一个人免费看片子| 久久免费观看电影| 中国国产av一级| 飞空精品影院首页| 尾随美女入室| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 人人澡人人妻人| 久久久久久久大尺度免费视频| av视频免费观看在线观看| 免费观看在线日韩| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 考比视频在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 在线观看美女被高潮喷水网站| 午夜激情av网站| 亚洲精品一二三| 中文字幕人妻熟女乱码| 咕卡用的链子| 欧美97在线视频| 欧美最新免费一区二区三区| 久久这里只有精品19| 搡老乐熟女国产| 五月天丁香电影| 亚洲欧美色中文字幕在线| 人体艺术视频欧美日本| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲精品中文字幕在线视频| 熟女电影av网| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久精品国产亚洲av天美| 国产高清不卡午夜福利| www.熟女人妻精品国产| 另类精品久久| 波野结衣二区三区在线| 91久久精品国产一区二区三区| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美xxⅹ黑人| 免费av中文字幕在线| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 亚洲少妇的诱惑av| 久久99一区二区三区| 在线观看国产h片| 老司机影院成人| 波多野结衣av一区二区av| 国产成人精品久久二区二区91 | 一区福利在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 成人影院久久| 久久久久精品性色| 免费高清在线观看日韩| 一级片'在线观看视频| 免费黄色在线免费观看| 久久亚洲国产成人精品v| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产亚洲最大av| 下体分泌物呈黄色| 亚洲久久久国产精品| 视频区图区小说| 亚洲国产最新在线播放| 日韩欧美一区视频在线观看| 观看av在线不卡| 亚洲 欧美一区二区三区| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲精品自拍成人| 中文字幕色久视频| 韩国高清视频一区二区三区| 免费高清在线观看日韩| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久精品国产亚洲av高清一级| av一本久久久久| 高清在线视频一区二区三区| 国产精品 国内视频| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲精品日本国产第一区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 日日撸夜夜添| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产精品.久久久| 日日撸夜夜添| 下体分泌物呈黄色| 成人免费观看视频高清| 亚洲国产欧美在线一区| 另类精品久久| 国产精品av久久久久免费| 精品一区在线观看国产| www.自偷自拍.com| 永久免费av网站大全| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产爽快片一区二区三区| 男女下面插进去视频免费观看| 成人影院久久| 日本91视频免费播放| 在线观看免费日韩欧美大片| 午夜91福利影院| 成年动漫av网址| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 精品国产国语对白av| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲欧洲日产国产| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 黄频高清免费视频| 国产综合精华液| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 在线 av 中文字幕| 尾随美女入室| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲精品视频女| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲精品一二三| 中文字幕人妻熟女乱码| 好男人视频免费观看在线| www.自偷自拍.com| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 伦理电影免费视频| 亚洲av在线观看美女高潮| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 欧美另类一区| 在线观看www视频免费| 1024香蕉在线观看| 两性夫妻黄色片| 曰老女人黄片| 久久久欧美国产精品| 久久精品久久久久久噜噜老黄| www日本在线高清视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久久久久久久久久久大奶| 精品第一国产精品| 久久久久久久大尺度免费视频| 欧美最新免费一区二区三区| 天美传媒精品一区二区| 人妻 亚洲 视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 久久久久久久国产电影| 视频在线观看一区二区三区| 97在线人人人人妻| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 一区二区三区激情视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 99久久人妻综合| 制服诱惑二区| 亚洲欧美清纯卡通| 黄色一级大片看看| 9色porny在线观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 又大又黄又爽视频免费| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 中国三级夫妇交换| 秋霞在线观看毛片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 午夜日韩欧美国产| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲精品日本国产第一区| 99re6热这里在线精品视频| www.精华液| 美女午夜性视频免费| 性少妇av在线| 国产精品一二三区在线看| a级毛片在线看网站| 美国免费a级毛片| 九草在线视频观看| 日韩av免费高清视频| 丝袜喷水一区| 亚洲伊人久久精品综合| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 欧美精品亚洲一区二区| 满18在线观看网站| 亚洲,一卡二卡三卡| 在线精品无人区一区二区三| 高清av免费在线| 欧美精品高潮呻吟av久久| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 青青草视频在线视频观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 99久久中文字幕三级久久日本| 乱人伦中国视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产 精品1| 国产成人精品无人区| 一本久久精品| 在线天堂最新版资源| 国产1区2区3区精品| 欧美日本中文国产一区发布| 国产成人av激情在线播放| 亚洲人成网站在线观看播放| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 欧美av亚洲av综合av国产av | 国产国语露脸激情在线看| 久热久热在线精品观看| 日本av免费视频播放| 999精品在线视频| 国产黄频视频在线观看| 蜜桃国产av成人99| 黄片无遮挡物在线观看| 蜜桃国产av成人99| 国产 一区精品| 婷婷色av中文字幕| 国产黄频视频在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 精品人妻偷拍中文字幕| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产av一区二区精品久久| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲第一av免费看| 中文字幕色久视频| 国产野战对白在线观看| 亚洲国产av新网站| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 欧美精品一区二区免费开放| 天堂俺去俺来也www色官网| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美成人午夜精品| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 精品国产露脸久久av麻豆| 丝袜美足系列| av有码第一页| 精品第一国产精品| 熟女av电影| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲国产精品999| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产精品一国产av| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产福利在线免费观看视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 99re6热这里在线精品视频| 国产男人的电影天堂91| 久久久a久久爽久久v久久| 一区在线观看完整版| 三上悠亚av全集在线观看| 26uuu在线亚洲综合色| 激情视频va一区二区三区| av网站免费在线观看视频| 日韩欧美精品免费久久| 久久国产精品大桥未久av| 国精品久久久久久国模美| 午夜福利,免费看| 97在线视频观看| 嫩草影院入口| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 97在线视频观看| 久热这里只有精品99| 亚洲综合色网址| 久久久久久久亚洲中文字幕| 搡女人真爽免费视频火全软件| 成人二区视频| 亚洲天堂av无毛| 999精品在线视频| 免费观看a级毛片全部| 久热久热在线精品观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 日韩一区二区三区影片| 亚洲精品视频女| 韩国av在线不卡| 1024视频免费在线观看| 欧美成人午夜精品| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 日韩一区二区三区影片| av在线观看视频网站免费| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 久久人妻熟女aⅴ| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 久久久久国产精品人妻一区二区| 母亲3免费完整高清在线观看 | 免费黄频网站在线观看国产| 桃花免费在线播放| 久久久久久久亚洲中文字幕| 爱豆传媒免费全集在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲内射少妇av| 考比视频在线观看| 国产激情久久老熟女| 国产av一区二区精品久久| 亚洲国产精品一区三区| 久久久久国产网址| 国产成人免费无遮挡视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 婷婷色综合www| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 永久网站在线| 国产 精品1|