活血化瘀中藥促內(nèi)皮祖細(xì)胞血管修復(fù)和新生研究進(jìn)展

黃明艷 劉超 王階

摘要：血管修復(fù)和血管新生是治療心血管疾病的有效途徑，內(nèi)皮祖細(xì)胞在這一過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。活血化瘀中藥對(duì)心血管疾病有顯著療效，是目前中醫(yī)學(xué)和中西醫(yī)結(jié)合學(xué)科基礎(chǔ)研究和臨床試驗(yàn)的熱點(diǎn)研究領(lǐng)域。本文通過(guò)綜述活血化瘀中藥單體、有效成分和復(fù)方對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞動(dòng)員、增殖、遷移、分化、黏附及分泌細(xì)胞因子等功能的影響，探討活血化瘀中藥對(duì)血管修復(fù)和血管新生的作用機(jī)制，為其在心血管疾病方面的研究及應(yīng)用提供參考。

關(guān)鍵詞：活血化瘀;內(nèi)皮祖細(xì)胞;血管修復(fù);血管新生;心血管疾病;綜述

中圖分類號(hào)：R285??? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A??? 文章編號(hào)：1005-5304（2019）07-0141-04

Abstract： Vascular repair and angiogenesis are effective methodsfor the treatment of cardiovascular diseases. Endothelial progenitor cells play a key role in this process. TCM of promoting blood circulation and removing blood stasishas significant efficacy for cardiovascular diseases， and is currently a hot research field in basic research and clinical trials of TCM and integrated traditional Chinese and Western medicine.By discussing the effects of single herbs， active ingredients and compound of TCM of promoting blood circulation and removing blood stasison promoting mobilization， proliferation， migration， differentiation， adhesion and secretion of cytokines of endothelial progenitor cells， this article discussed the mechanism of action of TCM of promoting blood circulation and removing blood stasis on vascular repair and angiogenesis， in order to provide references for research and application of TCM of promoting blood circulation and removing blood stasis in cardiovascular diseases.

Keywords： promoting blood circulation and removing blood stasis; endothelial progenitor cells; vascular repair; angiogenesis; cardiovascular diseases; review

內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells，EPCs）是內(nèi)皮細(xì)胞（ECs）的前體細(xì)胞，組織缺血缺氧產(chǎn)生的信號(hào)分子可促使骨髓EPCs動(dòng)員至外周循環(huán)，對(duì)血管內(nèi)皮損傷后的修復(fù)及血管新生有積極意義。而內(nèi)皮損傷是動(dòng)脈粥樣硬化及心腦血管疾病發(fā)病的基礎(chǔ)，近年來(lái)，EPCs成為心腦血管疾病研究的熱點(diǎn)?；钛鲋兴帉?duì)心血管疾病有顯著療效，本文就其促進(jìn)EPCs血管修復(fù)和新生相關(guān)研究進(jìn)行綜述。

1? 內(nèi)皮祖細(xì)胞與血管修復(fù)和新生

1997年，Asahara[1]在外周血中發(fā)現(xiàn)了EPCs，并在后續(xù)研究中發(fā)現(xiàn)，EPCs是一類具有游走特性、能定向增殖分化為成熟血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，主要來(lái)源于骨髓，在成人外周血中少量存在，一方面通過(guò)分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等細(xì)胞因子，促進(jìn)缺血組織的血管新生，另一方面通過(guò)動(dòng)員、遷移、歸巢和分化參與損傷血管的再內(nèi)皮化和血管新生[2]。方葉青等[3]研究表明，冠心病患者外周血中EPCs數(shù)量和細(xì)胞集落數(shù)顯著低于對(duì)照組，且與冠狀動(dòng)脈病變的范圍和狹窄程度呈負(fù)相關(guān)。Watt等[4]研究也表明，不穩(wěn)定型心絞痛患者多伴冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮功能紊亂，這與EPCs數(shù)量減少密切相關(guān)。Lee等[5]研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)向下肢缺血模型大鼠移植EPCs，可激活JAK2/STAT3信號(hào)通路，增加下肢血流率和毛細(xì)血管密度，促進(jìn)下肢血管的修復(fù)和新生。Abd Eamt等[6]研究發(fā)現(xiàn)，向急性心肌梗死模型的雜種犬心內(nèi)移植人臍靜脈血分離培養(yǎng)的EPCs后，可調(diào)節(jié)心臟的血管新生和誘導(dǎo)EPCs向心肌細(xì)胞分化。此外，Yin等[7]研究表明，向頸動(dòng)脈受損模型裸鼠腹腔注射冷凍人臍靜脈血分離培養(yǎng)的EPCs，可促進(jìn)細(xì)胞因子VEGF和基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1）釋放，加速頸動(dòng)脈內(nèi)皮損傷的修復(fù)?？梢?jiàn)，EPCs在血管內(nèi)皮修復(fù)和新生中起重要作用。

2? 活血化瘀中藥單體及有效成分對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞的影響

活血化瘀類藥物又可分為3大類[8]：具有活血、行血通瘀作用的活血類藥物，如川芎、三七、姜黃和蒲黃等;具有養(yǎng)血、調(diào)和血脈作用的和血類藥物，如當(dāng)歸、牡丹皮、丹參和赤芍等;具有破血消瘀作用的破血類藥物，如大黃、水蛭和乳香等。

中藥單體及有效成分，以其化學(xué)結(jié)構(gòu)清楚、分子式明確、靶點(diǎn)易于探討等特點(diǎn)，在研究及應(yīng)用方面有一定優(yōu)勢(shì)。目前，破血類相關(guān)研究較少，和血類及活血類中藥單體及有效成分對(duì)EPCs的藥理作用見(jiàn)表1。

3? 活血化瘀復(fù)方對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞的影響

活血化瘀復(fù)方在臨床上應(yīng)用廣泛，在EPCs相關(guān)研究已取得一定成果，現(xiàn)從不同類型研究闡述如下。

臨床研究方面，有研究將60例冠心病患者隨機(jī)分為2組，對(duì)照組予冠心病標(biāo)準(zhǔn)化治療3個(gè)月，治療組在冠心病標(biāo)準(zhǔn)化治療的基礎(chǔ)上予通心絡(luò)口服3片/次，3次/d，治療3個(gè)月，發(fā)現(xiàn)2組治療后EPCs遷移、黏附功能及Janus激酶-2（JAK-2）磷酸化水平均較治療前顯著提高，而治療組更優(yōu)，表明通心絡(luò)治療可增強(qiáng)冠心病患者EPCs遷移、黏附功能，其機(jī)制與上調(diào)CXCR4/JAK-2信號(hào)通路有關(guān)[28]。吳燕等[29]采用補(bǔ)陽(yáng)還五湯（黃芪30 g，赤芍、紅花、牛膝各15 g，地龍、川芎、桃仁、桂枝各10 g）治療糖尿病下肢血管病變。結(jié)果表明，該方可增加EPCs數(shù)量、降低MMP-9水平，改善下肢血管管壁和血流狀況，保護(hù)血管內(nèi)皮。曹政等[30]研究發(fā)現(xiàn)，冠心病患者通過(guò)12周麝香保心丸（人工麝香、人參提取物、人工牛黃、肉桂、蘇合香、蟾酥、冰片）治療后，血漿NO水平升高、EPCs數(shù)量增加，提示麝香保心丸可使EPCs動(dòng)員，其機(jī)制可能與機(jī)體NO分泌增加有關(guān)。此外，陳鵬等[31]采用通冠膠囊（黃芪、丹參、水蛭和冰片）治療冠心病經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療術(shù)后3個(gè)月，觀察其對(duì)外周血EPCs的影響，結(jié)果表明，治療組超聲心動(dòng)圖顯示左室射血分?jǐn)?shù)和室壁運(yùn)動(dòng)指數(shù)改善程度均優(yōu)于對(duì)照組，且外周血EPCs數(shù)量增加，心功能得到改善。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面，有研究以補(bǔ)陽(yáng)還五湯灌胃及EPCs尾靜脈輸注作用于內(nèi)皮損傷模型大鼠，從血管內(nèi)皮的形態(tài)、功能和EPCs歸巢等方面評(píng)價(jià)內(nèi)皮損傷修復(fù)情況。結(jié)果表明，補(bǔ)陽(yáng)還五湯可促進(jìn)EPCs修復(fù)損傷的血管內(nèi)皮，其作用機(jī)制可能與調(diào)控內(nèi)環(huán)境及促進(jìn)EPCs的歸巢有關(guān)[32]。高冬等[33]將DAPI熒光標(biāo)記的EPCs由尾靜脈注射植入下肢缺血大鼠模型，予不同劑量血府逐瘀湯（當(dāng)歸9 g，生地黃9 g，桃仁12 g，紅花9 g，枳殼6 g，赤芍6 g，柴胡3 g，甘草6 g，桔梗4.5 g，川芎4.5 g，牛膝9 g）灌胃，實(shí)驗(yàn)3、7 d發(fā)現(xiàn)，高劑量藥物組缺血區(qū)熒光強(qiáng)度和肉芽組織血管數(shù)量均顯著高于常規(guī)劑量藥物組和生理鹽水組，且高劑量及常規(guī)劑量藥物組2個(gè)時(shí)相點(diǎn)血清NO含量均顯著高于生理鹽水組。提示血府逐瘀湯通過(guò)提高NO水平誘導(dǎo)EPCs遷移至缺血區(qū)，促進(jìn)血管新生，進(jìn)而改善缺血壞死。張偉等[34]采用血府逐瘀湯灌胃并靜脈輸注EPC干預(yù)內(nèi)皮損傷的大鼠，結(jié)果顯示，與單用EPC組和單用藥物組比較，血府逐瘀湯聯(lián)合EPC組內(nèi)膜厚度顯著減少，且降低TC、TG、血鈣和升高高密度脂蛋白、血管SDF-1、eNOS蛋白表達(dá)作用更顯著。提示血府逐瘀湯可通過(guò)改善機(jī)體內(nèi)環(huán)境，促進(jìn)EPC歸巢以促進(jìn)EPCs修復(fù)損傷的內(nèi)皮。腦心通膠囊由黃芪、丹參、水蛭和地龍等中藥組成，具益氣活血、化瘀通脈功效。邱麗珍等[35]采用小鼠單側(cè)后肢股動(dòng)脈缺血模型聯(lián)合綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓移植研究腦心通膠囊對(duì)EPCs的作用。結(jié)果顯示，術(shù)后1、3 d腦心通組外周血EPCs數(shù)量顯著上調(diào);術(shù)后3 d和7 d腦心通組EPCs歸巢數(shù)量顯著高于模型組，提示腦心通膠囊可促進(jìn)EPCs的動(dòng)員與歸巢。盧健棋等[36]觀察以益氣養(yǎng)陰、活血通脈為主要作用的養(yǎng)心通脈方對(duì)家兔EPCs的影響，將治療組和對(duì)照組分別用10%養(yǎng)心通脈方含藥血清和10%空白血清培養(yǎng)96 h。結(jié)果表明，治療組EPCs的增殖、遷移、黏附能力均顯著高于對(duì)照組。提示養(yǎng)心通脈方含藥血清能顯著提升EPCs的增殖、遷移、黏附能力，進(jìn)而促進(jìn)缺血心肌血管新生，這可能是其治療冠心病的作用機(jī)制之一。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方面，有研究采用血府逐瘀湯干預(yù)體外培養(yǎng)的100 nmol/L血管緊張素II誘導(dǎo)的EPCs衰老模型。結(jié)果表明，血府逐瘀湯可通過(guò)降低衰老EPCs中p53蛋白的表達(dá)，顯著增加衰老EPCs中SIRT1蛋白的表達(dá)以延緩EPCs衰老，進(jìn)而提高其功能和數(shù)量以促進(jìn)血管新生，其中以15%藥物血清組效果最佳[37]。王賢等[38]觀察斑曉膠囊（瓜蔞、薤白、三七）對(duì)小鼠骨髓源性EPCs的刺激活化作用，在細(xì)胞培養(yǎng)第7日、藥物作用72 h情況下，與對(duì)照組比較，斑曉低劑量和高劑量組均可顯著促進(jìn)EPCs的增殖，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示斑曉膠囊可促進(jìn)小鼠骨髓源性EPCs的增殖，其機(jī)制可能與通過(guò)提高Bcl-2/Bax比值、抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。秦臻等[39]觀察當(dāng)歸補(bǔ)血湯（黃芪∶當(dāng)歸=5∶1）對(duì)人循環(huán)EPCs功能的影響。將體外培養(yǎng)7 d的EPCs隨機(jī)分為空白組、對(duì)照組、辛伐他汀組，當(dāng)歸補(bǔ)血湯高、中、低濃度組分別培養(yǎng)48 h，結(jié)果表明，與對(duì)照組比較，當(dāng)歸補(bǔ)血湯低、中、高濃度組和辛伐他汀組均可顯著促進(jìn)EPCs的增殖、遷移及成小管功能，且均可上調(diào)EPCs表達(dá)的Bcl-2蛋白。提示當(dāng)歸補(bǔ)血湯可通過(guò)上調(diào)Bcl-2的表達(dá)來(lái)促進(jìn)循環(huán)EPCs的功能。此外，秦臻等[40]還觀察了當(dāng)歸補(bǔ)血湯含藥血清對(duì)EPCs功能及PI3K/Akt通路的影響，結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)歸補(bǔ)血湯藥物血清可促進(jìn)EPCs的增殖、黏附、遷移及成小管功能，上調(diào)細(xì)胞eNOS mRNA、總Akt和磷酸化Akt蛋白的表達(dá)，促進(jìn)EPCs分泌NO，而上述作用在PI3K抑制劑處理后均顯著減弱。提示當(dāng)歸補(bǔ)血湯可能通過(guò)PI3K/Akt通路調(diào)節(jié)EPCs功能。

4? 小結(jié)

活血化瘀中藥對(duì)EPCs的影響相關(guān)研究起步較晚，但從中藥單體、有效成分和復(fù)方多方面已取得一定成果。研究表明，活血化瘀中藥可增強(qiáng)EPCs動(dòng)員、增殖、遷移、分化和黏附的功能，還能促進(jìn)細(xì)胞因子的分泌，促進(jìn)內(nèi)皮的修復(fù)和血管新生。唐容川《血證論》有“蓋瘀血去新血已生，新血生瘀血自去”，體現(xiàn)了活血化瘀中藥促進(jìn)血管修復(fù)和新生的內(nèi)在原因，而EPCs在這一過(guò)程中起到了關(guān)鍵的作用，目前相關(guān)研究已從臨床、動(dòng)物和細(xì)胞多層次開(kāi)展，但其作用機(jī)制尚未完全闡明，值得進(jìn)一步探究。

參考文獻(xiàn)：

[1] ASAHARA T， MUROHARA T， SULLIVAN A， et al. Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis[J]. Science，1997， 275（5302）：964-967

[2] ZHANG M， MALIK A B， REHMAN J. Endothelial progenitor cells and vascular repair[J]. Curr Opin Hematol，2014，21（3）：224-228.

[3] 方葉青，張松榮，方紅城，等.冠心病患者內(nèi)皮祖細(xì)胞變化與冠狀動(dòng)脈病變的相關(guān)性[J].中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志，2012，20（9）：814-818.

[4] WATT J， KENNEDY S， AHMED N， et al. The relationship between oxidised LDL， endothelial progenitor cells and coronary endothelial function in patients with CHD[J]. Open Heart，2016， 3（1）：e342.

[5] LEE S H， LEE K B， LEE J H， et al. Selective interference targeting of lnk in umbilical cord-derived late endothelial progenitor cells improves vascular repair， following hind limb ischemic injury， via regulation of JAK2/STAT3 signaling[J]. Stem Cells， 2015，33（5）：1490-1500.

[6] ABD EAMT， ABD ENEA， ABD EHM， et al. Endothelial progenitor cells regenerate infracted myocardium with neovascularisation development[J]. J Adv Res，2015，6（2）：133-144.

[7] YIN Y， LIU H， WANG F， et al. Transplantation of cryopreserved human umbilical cord blood-derived endothelial progenitor cells induces recovery of carotid artery injury in nude rats[J]. Stem Cell Res Ther，2015，6：37.

[8] 陳可冀.血瘀證與活血化瘀治療的研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2005，3（11）：10-12.

[9] 嚴(yán)鳳娣，何勝虎，張晶.丹參多酚酸鹽對(duì)外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的影響[J].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2014，8（24）：4436-4439.

[10] 張涓，呂姣姣，李豪，等.正交設(shè)計(jì)研究丹皮酚與丹參酮ⅡA聯(lián)合rhG-CSF對(duì)大鼠EPCs增殖的影響[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2018，38（17）：1777-1782.

[11] 楊彥，陳慶偉，曹廣煜，等.丹參酮ⅡA增效大鼠骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞VEGF、SDF-1表達(dá)[J].激光雜志，2012，33（2）：83-86.

[12] 郭張強(qiáng)，成忠，李論，等.丹參酮ⅡA對(duì)急性心肌梗死無(wú)復(fù)流作用研究[J].臨床心血管病雜志，2011，27（3）：184-186.

[13] 蔣宇.丹參酚酸B對(duì)外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖、粘附和遷移功能的影響[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2013，22（1）：16-17.

[14] 趙先鋒，徐予.丹酚酸B促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞動(dòng)員和黏附的作用[J].中國(guó)組織工程研究，2017，21（21）：3352-3357.

[15] 封亞麗，張倩倩，何紅濤，等.丹酚酸B對(duì)人血管內(nèi)皮祖細(xì)胞分化與旁分泌功能的影響[J].山東醫(yī)藥，2017，57（21）：36-38.

[16] YIN Y， DUAN J L， GUO C， et al. Danshensu accelerates angiogenesis after myocardial infarction in rats and promotes the functions of endothelial progenitor cells through SDF-1α/CXCR4 axis[J]. European Journal of Pharmacology，2017，814：274-282.

[17] 季亢挺，唐疾飛，陳鵬，等.丹參素保護(hù)內(nèi)皮祖細(xì)胞炎癥損傷的機(jī)制研究[J].中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2010，11（8）：809-812.

[18] 林杰，黃偉劍，徐力辛，等.川芎嗪對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2009，44（3）：187-191.

[19] 劉俊松，馬根山，姚玉宇，等.川芎嗪對(duì)自體移植內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)兔受損腹主動(dòng)脈內(nèi)膜的影響[J].中國(guó)微循環(huán)，2009，13（1）：15-18，73.

[20] 李嵐，姚玉宇，馬根山，等.川芎嗪對(duì)體外血管內(nèi)皮祖細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2009，28（3）：180-184.

[21] 黃美健，朱成圣，姚航平，等.姜黃素對(duì)慢性阻塞性肺疾病患者外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及功能的影響[J].中國(guó)臨床藥學(xué)雜志，2015，24（3）：147-152.