闌尾組織的免疫表達(dá)及其應(yīng)用價值*

李明顯 周 娜 何青蓮 鄭廣娟 杜曉華 謝興意 馮 兵

廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院(廣東省中醫(yī)院)，廣東省廣州市 510120

免疫組化技術(shù)[1]在病理診斷中的作用十分重要，免疫染色結(jié)果的穩(wěn)定性和可靠性依賴于免疫組化對照的設(shè)置[2]。組織芯片是將數(shù)十個甚至上千個組織標(biāo)本規(guī)則有序地排布于一張載玻片上，進(jìn)行同一指標(biāo)檢測的原位組織學(xué)研究技術(shù)，具有容量大、高效率、低消耗、定位準(zhǔn)確等諸多優(yōu)點，適用于免疫組化的質(zhì)量控制及室間評價。但是，由于組織芯片制作技術(shù)的完善離不開專業(yè)的儀器設(shè)備和種類豐富的組織標(biāo)本，再者，商品化的組織芯片價格較高[3]，這些因素都阻礙了基層醫(yī)院免疫組化質(zhì)量控制方面的發(fā)展。為了尋找抗原標(biāo)記物表達(dá)較廣泛的組織以滿足日常工作中免疫組化質(zhì)量控制的要求，筆者對臨床常見且富含多種組織成分的闌尾組織進(jìn)行了相關(guān)的免疫組化染色。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選取廣東省中醫(yī)院2018年5—10月進(jìn)行闌尾切除并診斷為慢性闌尾炎、急性單純性闌尾炎、急性化膿性闌尾炎和急性壞疽性闌尾炎患者各15例，所有患者術(shù)前均無腫瘤及免疫疾病相關(guān)病史，診斷報告由兩位主治以上醫(yī)師簽發(fā)。

1.2 儀器設(shè)備 ES全自動封閉式組織處理儀購自美國Thermo Fisher公司，BENCHMARK@XT全自動免疫組化儀購自美國Roche公司，即用型抗體購自泉暉、邁新、中杉金橋、基因等生物公司。

1.3 方法 闌尾組織10%中性福爾馬林固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋，依次連續(xù)切片，每張玻片上均設(shè)立相應(yīng)陽性質(zhì)控對照組織，68℃烤片1h，免疫組化采用SP法，實驗操作步驟均嚴(yán)格按照全自動免疫組化儀的設(shè)定程序，染色結(jié)果由2位主治醫(yī)師判讀。

2 結(jié)果

慢性闌尾炎、急性單純性闌尾炎、急性化膿性闌尾炎和急性壞疽性闌尾炎組織中抗體染色陽性種類平均分別為104種、82種、65種、46種。慢性闌尾炎組織中的抗體染色陽性種類均穩(wěn)定表達(dá)，其表達(dá)的種類范圍涵蓋了其余3種急性闌尾炎組織中抗體染色陽性的所有種類，圖1。實驗中慢性闌尾炎組織抗體染色陽性的具體情況匯總?cè)缦拢?/p>

ATRX、Calretinin、CK、CK7、CK8、CK18、CK19、CK20、CK-LMW、CEA、E-Cadherin、EMA、CDX-2、Villin、β-catenin表達(dá)于腺上皮細(xì)胞；BCL-2、BLC-6、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD9、CD10、CD15、CD16、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD27、CD30、CD35、CD38、CD43、CD45、CD45RO、CD57、CD61、CD68、CD75、CD79a、CD99、CD117、CD138、CD163、CD207、CDK4、C-MYC、CyclinD1、CXCL13、FLI-1、Galectin-3、IgG、IgG4、INI-1、Ki67、kappa、Lammda、MAC387、MLH1、MSH2、MSH6、MUM-1、P120、PAX5、PAX8、PD-1、PMS2、SOX-11、TIA-1表達(dá)于黏膜下層淋巴組織細(xì)胞；CD31、CD34、D2-40、ERG、FactorⅧ、VEGF表達(dá)于血管及淋巴管的內(nèi)皮細(xì)胞；AAT、AACT、CD68、CollagenⅣ、Lyosozyme、Mac387、Vimentin表達(dá)于黏膜下層的組織細(xì)胞；Caldesmon、Calponin、Desmin、HHF35、MSA、SMA、SMMHC表達(dá)于肌層平滑肌細(xì)胞；CD56、CgA、NF、NSE、Syn、S-100表達(dá)于肌層神經(jīng)纖維細(xì)胞；CK(H)、CK5、CK5/6、MC表達(dá)于闌尾漿膜。

圖1 慢性闌尾炎不同組織結(jié)構(gòu)的免疫表達(dá)

A.S-100神經(jīng)細(xì)胞胞漿陽性 20×；B.MSA肌型細(xì)胞胞漿陽性 20×；C.CD7增生反應(yīng)性T細(xì)胞細(xì)胞膜陽性 20×；D.CEA腺上皮胞漿陽性 20×。

3 討論

免疫組織化學(xué)技術(shù)已成為病理診斷中必不可少的輔助工具，近年出現(xiàn)的組織芯片技術(shù)通過科學(xué)合理的設(shè)計使得大規(guī)模的免疫組化質(zhì)量控制工作變得簡便易行，但組織芯片技術(shù)在開展過程中仍然存在一些問題。首先，組織取材的大小及取樣深度[4]能否真實反映異質(zhì)性腫瘤的全部信息是芯片設(shè)計中經(jīng)常遇到的問題；組織固定、處理時間、包埋條件及自身硬度的差別也會影響組織芯片的制作質(zhì)量；組織芯片的組織來源尤其是少見或罕見的組織標(biāo)本收集十分困難，因此組織芯片技術(shù)的推廣應(yīng)用具有一定的難度。

闌尾炎是一種臨床常見病，根據(jù)病程常分為慢性闌尾炎和急性闌尾炎，急性闌尾炎包括急性單純性闌尾炎、急性化膿性闌尾炎、急性壞疽闌尾炎三種主要類型，手術(shù)摘除的闌尾組織是病理科常見的病理標(biāo)本。闌尾由上皮組織、黏膜下層、肌層組織和淋巴組織四部分組成，含有上皮、淋巴組織、平滑肌、間質(zhì)、神經(jīng)等不同胚層發(fā)育而來的各種組織[5]，能夠表達(dá)多種抗原，可作為質(zhì)控對照組織用于大部分常用抗體的檢測。本實驗通過比較不同類型的闌尾炎組織，發(fā)現(xiàn)抗體染色陽性的穩(wěn)定表達(dá)及表達(dá)種類與患者的性別和年齡無關(guān)，而與闌尾組織的壞死程度相關(guān)。慢性闌尾炎組織因無壞死成分，抗體染色陽性的種類具有一致性，均為104種；而急性闌尾炎組織由于發(fā)生了不同程度的壞死，以間皮、腺上皮細(xì)胞及黏膜下淋巴組織影響最嚴(yán)重，抗體染色陽性的種類均少于慢性闌尾炎組織，即使同一類型的急性闌尾炎組織抗體染色陽性的種類因壞死程度的不同而存在一定差異，因此慢性闌尾炎組織可以作為一種簡易而又高效穩(wěn)定表達(dá)的質(zhì)控對照組織。在確認(rèn)將慢性闌尾炎組織作為合格的質(zhì)控對照組織前需進(jìn)行HE染色觀察判斷，以保證所選的組織包含上皮組織、黏膜下層、肌層組織和淋巴組織，而且包含至少1個淋巴濾泡。實驗中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)闌尾組織管徑≥1cm時，沿組織切面的直徑切開可以得到兩個合格的質(zhì)控對照組織[6]。因此可以將闌尾組織與其他類型的組織進(jìn)行組合，以進(jìn)一步擴(kuò)大新型組合的組織芯片的免疫表達(dá)種類，為免疫組化質(zhì)量控制工作帶來更多方便。在實際工作應(yīng)用中尚需要注意以下幾點：(1)需在病理報告工作完成后再對闌尾組織進(jìn)行質(zhì)控對照實驗，同時盡量避開含糞石的組織或清洗干凈，以便于切片制作。(2)闌尾組織每次制備200張組織切片后都應(yīng)將最后一張切片進(jìn)行HE染色，以確定制備的質(zhì)控對照切片合格和剩余組織結(jié)構(gòu)的完整性及變化趨勢，為下次質(zhì)控對照工作做好隨時調(diào)整的準(zhǔn)備。(3)質(zhì)控對照切片制備數(shù)量以滿足1周的工作量需求為宜，且需放置在4℃冰箱保存[6]。(4)定期更換新鮮固定液，24～48h后再進(jìn)行脫水處理，以防止固定不足影響抗體染色的穩(wěn)定表達(dá)。

總之，慢性闌尾炎組織可表達(dá)種類廣泛的抗原，與組織芯片相比，具有組織來源豐富、制作簡單、成本低的優(yōu)點，因此利用闌尾組織制作免疫組化的質(zhì)控對照是一種簡單實用而又高效的方法，不但適用于基層醫(yī)院，其他醫(yī)院也可以參考借鑒，值得推廣。