酸棗仁-五味子提取物對小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用研究＊

巨帥，張英英，潘婷婷

酸棗仁-五味子提取物對小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用研究＊

巨帥，張英英，潘婷婷

（商洛學院 生物醫(yī)藥與食品工程學院，陜西 商洛 726000）

以酸棗仁、五味子為主要原料制備了醇水提取物，并通過藥理實驗對其鎮(zhèn)靜催眠效果進行評價。結(jié)果表明，與陰性對照組相比，低、中、高劑量酸棗仁-五味子提取物均能有效縮短巴比妥鈉造成的睡眠潛伏期，顯著延長了閾上劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時間，顯著提高了戊巴比妥鈉閾下劑量誘導小鼠睡眠發(fā)生率，具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠效果。

酸棗仁；五味子；鎮(zhèn)靜催眠；藤本植物

酸棗仁為鼠李科植物酸棗Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa（Bge）Hu ex H. F. Chou的干燥成熟種子[1]?，F(xiàn)代研究表明，酸棗仁有鎮(zhèn)靜催眠、抗抑郁、抗驚厥、抗焦慮、增強免疫力、改善記憶力、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、保護視網(wǎng)膜細胞、降血脂、抗動脈粥樣硬化等作用，并對心肌及腦缺氧、缺血有保護作用，酸棗仁中皂苷類、黃酮類、生物堿類、酚酸類、揮發(fā)油類等均為鎮(zhèn)靜催眠的主要活性成分[2-5]。五味子為木蘭科多年生落葉木質(zhì)藤本植物五味子Schisandra Chinese（Turcz.）Baill.的成熟果實[6]。

現(xiàn)代藥理研究表明，五味子具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、保肝、保護神經(jīng)、體外抑菌與殺蟲、抗衰老與抗疲勞、降血糖與降血脂、抑制肌肉萎縮與增強骨骼肌、鎮(zhèn)靜催眠、抗焦慮、改善記憶障礙、鎮(zhèn)咳等作用，且五味子中的五味子醇甲、五味子酯甲和五味子乙素等均為鎮(zhèn)靜催眠的主要活性成分[7-13]。酸棗仁、五味子均有較好的鎮(zhèn)靜催眠作用，本研究旨在對酸棗仁-五味子藥提取物對昆明鼠鎮(zhèn)靜催眠效果進行評價。

1 材料與方法

1.1 實驗藥物

實驗藥物為酸棗仁、五味子，產(chǎn)地為陜西商洛，購自商洛市國藥控股有限責任公司。

1.2 實驗動物

實驗動物為昆明鼠，體重20～22 g，購自空軍軍醫(yī)大學實驗動物中心。

1.3 實驗試劑

實驗試劑有戊巴比妥鈉，分析純，國藥控股化學試劑有限公司；阿普唑侖，金花企業(yè)（集團）股份有限公司；生理鹽水，上海優(yōu)選生物科技有限公司；乙醇，利安隆博華（天津）醫(yī)藥化學有限公司。

1.4 儀器

儀器主要有KQ-250E多功能粉碎機，鉑歐五金廠；DHG-9030A（101）電熱恒溫鼓風干燥箱，上海齊欣科學儀器有限公司；S1-2002電子天平，丹佛儀器（北京）有限公司；RE52-99旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；SHZ-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵，上海亞榮生化儀器廠；100目分級篩，新鄉(xiāng)市同心機械有限責任公司；KQ-250E超聲波清洗機，昆山市超聲儀器有限公司。

1.5 實驗方法

1.5.1 酸棗仁-五味子醇水提取物的制備

取2個1 000 mL的圓底燒瓶，依次放入30 g的酸棗仁和五味子；加入質(zhì)量分數(shù)為75%的乙醇浸泡30 min，于85 ℃下回流提取1 h，將煎液過濾保存；再加10倍量水回流提取1 h，將煎液過濾保存；將醇提取液和水提取液混合在一起，減壓濃縮，干燥箱里面烘干成浸膏，密封保存[14]。

1.5.2 酸棗仁-五味子提取物鎮(zhèn)靜催眠作用評價

1.5.2.1 戊巴比妥鈉閾下及閾上睡眠劑量的測定[15-17]

50只小鼠隨機分為5組，每組10只。實驗組腹腔注射戊巴比妥鈉，注射劑量的質(zhì)量濃度分別為30 mg/kg、34 mg/kg、38 mg/kg、40 mg/kg，陰性對照組注射等量生理鹽水。15 min后，小鼠的翻正反射消失1 min以上，以確定小鼠的靜息指數(shù)，并記錄進入睡眠的小鼠數(shù)量。在小鼠將要睡著但是沒有睡著時（90%～100%），翻正反射不消失的戊巴比妥鈉的最大劑量的藥物劑量即為閾下劑量。

50只小鼠隨機分為5組，每組10只。實驗組腹腔注射戊巴比妥鈉，注射劑量的質(zhì)量濃度分別為42 mg/kg、45 mg/kg、49 mg/kg、50 mg/kg，陰性對照組注射生理鹽水。記錄15 min內(nèi)翻正反射消失超過1 min的小鼠數(shù)量，作為睡眠指標，剛進入睡眠的小鼠的最小劑量（睡眠率100%）為閾上劑量。

1.5.2.2 酸棗仁-五味子提取物對閾下睡眠劑量戊巴比妥鈉致入睡小鼠數(shù)量的影響

50只昆明小鼠被分為5組，每組10只，分組如下：阿普唑侖陽性對照組（0.25 mg/kg）、低劑量組（0.40 g/kg）、中劑量組（0.80 g/kg）、高劑量組（1.60 g/kg）、陰性對照組。實驗組按低、中、高劑量進行灌胃給藥，陽性對照組腹腔注射阿普唑侖溶液，陰性對照組注射相同劑量的生理鹽水，給藥1 h后，腹腔注射閾下劑量戊巴比妥鈉。觀察并記錄注射戊巴比妥鈉后30 min內(nèi)各組小鼠睡眠情況。

1.5.2.3 酸棗仁-五味子提取物對閾上催眠劑量戊巴比妥鈉誘導小鼠睡眠時間的影響

50只昆明小鼠被分為5組，每組10只，分組如下：阿普唑侖陽性對照組（0.25 mg/kg）、低劑量組（0.40 g/kg）、中劑量組（0.80 g/kg）、高劑量組（1.60 g/kg）、陰性對照組。實驗組按低、中、高劑量進行灌胃給藥，陽性對照組腹腔注射阿普唑侖溶液，陰性對照組注射相同劑量的生理鹽水，給藥1 h后，腹腔注射閾上劑量戊巴比妥鈉，對注射戊巴比妥鈉后各實驗組小鼠睡眠時間進行記錄。

1.5.2.4 統(tǒng)計分析

2 結(jié)果

2.1 戊巴比妥鈉閾下及閾上睡眠劑量的測定

不同濃度戊巴比妥鈉對小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用具體如表1所示。

表1 不同濃度戊巴比妥鈉對小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用

組別劑量/（mg/kg）入睡動物/只入睡率/（%） 陰性對照組—00 戊巴比妥鈉3000 3400 38110 40220 42550 45990 4910100 5010100

由表1可知，戊巴比妥鈉的質(zhì)量濃度為30 mg/kg、34 mg/kg時小鼠入睡率為0%，質(zhì)量濃度為38 mg/kg時小鼠入睡率為10%，質(zhì)量濃度為40 mg/kg、42 mg/kg、45 mg/kg時小鼠入睡率分別為20%，50%，90%，質(zhì)量濃度為49 mg/kg和50 mg/kg時小鼠入睡率100%。因此，戊巴比妥鈉閾下睡眠劑量的質(zhì)量濃度確定為38 mg/kg，閾上睡眠劑量確定為49 mg/kg。

2.2 酸棗仁-五味子提取物對閾上催眠劑量戊巴比妥鈉誘導小鼠睡眠時間的影響

酸棗仁與五味子提取物對延長閾上劑量戊巴比妥鈉誘導小鼠睡眠時間的影響如表2所示。

表2 酸棗仁與五味子提取物對延長閾上劑量戊巴比妥鈉誘導小鼠睡眠時間的影響（n=10，±s）

注：與陰性對照組比，*為＜0.05，**為＜0.01，***為＜0.001。

由表2可知，與陰性對照組比較，阿普唑侖組明顯延長了小鼠睡眠時間，且酸棗仁五味子提取物的低、中、高劑量組均能顯著延長閾上劑量戊巴比妥鈉誘導的小鼠睡眠時間。

2.3 酸棗仁-五味子提取物對閾下睡眠劑量戊巴比妥鈉致入睡小鼠數(shù)量的影響

酸棗仁-五味子提取物對閾下睡眠劑量戊巴比妥鈉致入睡小鼠數(shù)量的影響如表3所示。

表3 酸棗仁-五味子提取物對閾下睡眠劑量戊巴比妥鈉致入睡小鼠數(shù)量的影響

組別n入睡動物數(shù)/只入睡率/（%） 陰性對照組10110 阿普唑侖組1010100 低劑量組（0.40 g/kg）10220 中劑量組（0.80 g/kg）10550 高劑量組（1.60 g/kg）10880

由表3可知，與陰性對照組相比，各實驗組小鼠入睡率均有所增加。其中阿普唑侖組催眠效果最為明顯，入睡率最大，為100%；酸棗仁-五味子低、中、高劑量組，入睡率隨劑量的增加而增加，高劑量組入睡率為80%。說明在戊巴比妥鈉閾下劑量下，酸棗仁與五味子提取物對于小鼠睡眠發(fā)生率具有較好的誘導作用。

2.4 酸棗仁-五味子提取物對巴比妥鈉誘導小鼠睡眠潛伏期的影響

酸棗仁-五味子提取物對巴比妥鈉誘導小鼠睡眠潛伏期的影響如表4所示。

表4 酸棗仁-五味子提取物對巴比妥鈉誘導小鼠睡眠潛伏期的影響（n=10，±s）

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注：與陰性對照組比，*為＜0.05，**為＜0.01，***為＜0.001。

由表4可知，與陰性對照組相比，阿普唑侖組與酸棗仁五味子提取物的低、中、高劑量組均能有效縮短小鼠巴比妥鈉睡眠潛伏期，使小鼠更快地進入睡眠狀態(tài)。

3 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，與陰性對照組相比，酸棗仁-五味子提取物能夠有效縮短巴比妥鈉誘導小鼠睡眠的潛伏期，增加閾下睡眠劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡的數(shù)量，延長閾上催眠劑量戊巴比妥鈉誘導小鼠的睡眠時間，具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用。

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R285.5

A

10.15913/j.cnki.kjycx.2019.16.020

2095－6835（2019）16－0049－03

潘婷婷（1988—），女，山西臨汾人，碩士，講師，研究方向為中藥資源開發(fā)。

國家級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目（編號：201711396015）

〔編輯：張思楠〕