羅氏U701和希森美康UF-1000i兩種尿沉渣分析儀不同分析原理檢測(cè)細(xì)菌結(jié)果差異性比較*

肖春海，梁 爽，黃敏潔，董志武

(上海市第六人民醫(yī)院金山分院檢驗(yàn)科，上海 201500)

尿路感染(urinary tract infection，UTI)是臨床常見(jiàn)的疾病或并發(fā)癥之一[1]，人體的尿路結(jié)構(gòu)決定了發(fā)生尿路感染的幾率很高和方式很多。臨床上導(dǎo)管相關(guān)UTI的發(fā)病率很高，尤其是在兒科ICU[2]。隨著抗生素的廣泛使用，UTI病原菌的耐藥性越來(lái)越嚴(yán)重[3-4]。目前UTI的實(shí)驗(yàn)室主要診斷方法仍是傳統(tǒng)的中段尿細(xì)菌培養(yǎng)，此方法的報(bào)告時(shí)間一般至少是48 h，無(wú)法用于快速診斷[5]。及時(shí)使用適合的抗生素，對(duì)于UTI的治療非常重要。隨著技術(shù)的發(fā)展，近些年尿沉渣分析儀得到了快速的普及，其檢測(cè)結(jié)果中除了傳統(tǒng)的細(xì)胞分類計(jì)數(shù)外還增加了細(xì)菌指標(biāo)，其目的是為UTI早期診斷提供部分直接證據(jù)。該類設(shè)備依據(jù)檢測(cè)原理不同，可分為拍照?qǐng)D像分析法和流式熒光染色計(jì)數(shù)法兩大類。羅氏U701檢測(cè)原理屬于靜止拍攝圖像分析法，希森美康UF-1000i屬于流式熒光染色計(jì)數(shù)法。本文用223份臨床UTI患者的中段尿樣品在兩臺(tái)設(shè)備上分別進(jìn)行尿液有形成分檢測(cè)，同時(shí)進(jìn)行中段尿細(xì)菌培養(yǎng)作為金標(biāo)準(zhǔn)，從而比較兩臺(tái)設(shè)備對(duì)尿液中細(xì)菌的檢測(cè)能力有無(wú)差異。

1材料和方法

1.1 研究對(duì)象 隨機(jī)選取我院2018年11月住院疑似尿路感染患者的中段尿223份，其中女性104例，男性119例。

1.2 主要儀器與試劑 圖像智能分析法采用羅氏公司的U701尿沉渣分析儀，熒光染色計(jì)數(shù)法采用希森美康公司的UF-1000i尿沉渣分析儀，細(xì)菌鑒定采用西門子公司的MicroScan WalkAway-40 plus全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏分析儀。以上三臺(tái)設(shè)備均采用原裝配套試劑。

1.3 方法 采用1 μl接種環(huán)在9 cm血瓊脂平板上進(jìn)行中段尿接種，35℃培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果。血瓊脂平板生長(zhǎng)菌落以>104CFU/ml為陽(yáng)性。挑取陽(yáng)性菌落在MicroScan WalkAway-40 plus微生物鑒定分析儀上進(jìn)行菌種鑒定。同一份中段尿標(biāo)本在進(jìn)行尿液接種培養(yǎng)之后分別在U701和UF1000i上進(jìn)行尿有形成分檢測(cè)。最后，對(duì)剩余的尿液標(biāo)本以400 g離心5 min，棄去上清，沉渣涂片，革蘭氏染色鏡檢。UF-1000i細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果以大于143.5/μl為陽(yáng)性[3]，U701儀器的細(xì)菌結(jié)果有四種形式：-，1+，2+，3+，涂片染色鏡檢以視野內(nèi)見(jiàn)到成片狀分布的細(xì)菌形態(tài)為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 中段尿培養(yǎng) 223份中段尿樣品培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)>104CFU/ml，即判斷培養(yǎng)陽(yáng)性，共有55份中段尿培養(yǎng)出病原菌。其中革蘭陽(yáng)性球菌20株，占36.4%(20/55)；革蘭陰性桿菌35株，占63.6%(35/55)。

2.2 尿沉渣分析儀的檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表1。尿有形成分分析的細(xì)菌結(jié)果以中段尿培養(yǎng)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，UF-1000i的敏感度為92.7%，特異度為98.8%，正確度為97.3%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(KappaR=0.927，P=0.687)。U701細(xì)菌分級(jí)檢測(cè)的陽(yáng)性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為1+，2+，3+。涂片染色鏡檢敏感度為100%，特異度為98.8%，正確度為99.1%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(KappaR=0.976，P=0.500)。

表1 三種檢測(cè)尿細(xì)菌方法和培養(yǎng)法結(jié)果比較

2.3 涂片染色鏡檢結(jié)果和UF-1000i的結(jié)果比較 見(jiàn)表2。

涂片染色鏡檢結(jié)果和UF-1000i的細(xì)菌檢測(cè)結(jié)果正確度為98.2%，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(KappaR=0.952，P=0.125)。

2.4 U701尿沉渣結(jié)果按照不同參考范圍分成三組 見(jiàn)表3。

表2 涂片染色鏡檢和UF-1000i細(xì)菌結(jié)果比較

表3 U701結(jié)果和培養(yǎng)結(jié)果比較

三組結(jié)果分別與培養(yǎng)結(jié)果比較。組1的敏感度為98.2%，特異度為57.1%，與培養(yǎng)的正確度為67.3%。組2的敏感度為94.5%，特異度為89.9%，與培養(yǎng)的正確度為91.0%。組3的敏感度為63.6%，特異度為95.2%，與培養(yǎng)的正確度為87.4%。三組結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(KappaR=0.387，0.778，0.635，P=0.000，0.003，0.036，均P<0.05)。

3討論臨床實(shí)驗(yàn)室尿干化學(xué)中的亞硝酸鹽和白細(xì)胞酯酶也被認(rèn)為是反映UTI的間接指標(biāo)[6-7]。但對(duì)于UTI的診斷，白細(xì)胞酯酶特異度只有49.82%，而亞硝酸鹽的靈敏度也只有38.28%[8]。雖然白細(xì)胞酯酶和亞硝酸鹽相互結(jié)合可以提高診斷效率，但仍然在實(shí)際工作中依賴人工對(duì)其進(jìn)行復(fù)核。還有文獻(xiàn)報(bào)道[9-10]，試紙空氣中暴露時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、尿標(biāo)本檢測(cè)前留置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、用藥等因素均可造成亞硝酸鹽和白細(xì)胞酯酶假陰性或假陽(yáng)性。本文以中段尿細(xì)菌培養(yǎng)為標(biāo)準(zhǔn)，UF-1000i的結(jié)果和培養(yǎng)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，相關(guān)性也非常好(R>0.8)，說(shuō)明兩者的一致性很高。UF-1000i有專用的細(xì)菌通道[11]，此通道細(xì)菌容易通過(guò)，其它成分很難通過(guò)，而且其熒光染色也具有很強(qiáng)的特異性，對(duì)于尿液的質(zhì)量要求相對(duì)不高，所以UF-1000i檢測(cè)細(xì)菌的結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果很接近。這與其它關(guān)于UF-1000i細(xì)菌計(jì)數(shù)對(duì)于UTI的早期診斷有重要意義的報(bào)道一致，特別是對(duì)陰性的篩選[12-14]。離心涂片染色鏡檢方法也和培養(yǎng)有很好的一致性(P>0.05)，但前者的繁瑣程度決定了不可能對(duì)每個(gè)尿常規(guī)標(biāo)本都進(jìn)行此操作，只能作為某些懷疑假陽(yáng)性或假陰性標(biāo)本的補(bǔ)充驗(yàn)證試驗(yàn)。U701在一次性計(jì)數(shù)板中采用靜止拍攝圖像判讀技術(shù)，其基本原理是數(shù)字成像和單細(xì)胞成像分割技術(shù)，與已有的數(shù)據(jù)模型庫(kù)進(jìn)行比較，實(shí)現(xiàn)智能判讀[15]。但圖像的質(zhì)量對(duì)單細(xì)胞成像算法的判讀準(zhǔn)確性有很大的影響。尿液有形成分比較繁雜，其中可以有完整的典型的細(xì)胞，還可有破碎的畸形的細(xì)胞及其胞內(nèi)外逸物質(zhì)，甚至是不可識(shí)別的某些有形成分。當(dāng)有形成分過(guò)多時(shí)，可以使尿液渾濁，透明度差，設(shè)備拍照時(shí)圖像中干擾成分增多，甚至相互重疊，造成識(shí)別錯(cuò)誤，因而出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性，但目前技術(shù)難以避免。從統(tǒng)計(jì)結(jié)果中可見(jiàn)U701的細(xì)菌結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果有差異，并且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。本文通過(guò)對(duì)U701細(xì)菌結(jié)果重新分組分析，建議U701的細(xì)菌參考范圍在“- ～1+”及以下，“3+”結(jié)果特異度相對(duì)最高，會(huì)一定程度上提高該指標(biāo)對(duì)于UTI的診斷價(jià)值。兩臺(tái)尿沉渣分析儀的檢測(cè)原理不同，對(duì)于尿液細(xì)菌的檢測(cè)結(jié)果，UF-1000i性能明顯優(yōu)于U701。U701的細(xì)菌結(jié)果更需要結(jié)合其它指標(biāo)綜合判斷，如果有疑問(wèn)可以用尿沉渣離心涂片染色鏡檢進(jìn)行復(fù)核確認(rèn)。