紫外-可見分光光度法測(cè)定刺玫果中總黃酮的含量

李仁杰，丁建秋，姜瑋倫，姚慧敏*

(1.通化師范學(xué)院吉林省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)白山藥用植物研究實(shí)驗(yàn)室，通化134002；2.吉林省白山市第七中學(xué)，白山134700）

刺玫果為薔薇科薔薇屬植物山刺玫（Rosadavurica Pall.）的成熟果實(shí)，又名野薔薇果，廣泛分布于東北及內(nèi)蒙、山西等省。該果實(shí)性溫，味酸，營(yíng)養(yǎng)豐富，民間大量采食或用于泡茶、泡酒等[1]。刺玫果所含大量活性成分均具有極高的藥用價(jià)值，在抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、對(duì)心血管系統(tǒng)的作用等方面的研究都取得了進(jìn)展[2～7]。目前，刺玫果正在作為一種天然保健藥物被日益重視和廣泛開發(fā)，市場(chǎng)上已出現(xiàn)由刺玫果原料為主研制的保健食品，如果汁、果酒、果醋等[8]。

目前文獻(xiàn)中對(duì)于刺玫果及其保健品總黃酮的含量測(cè)定方法主要為高效液相色譜法[9～10]和紫外-可見分光光度法。與高效液相色譜法相比較，紫外-可見分光光度法具有適用性較廣、操作簡(jiǎn)單、測(cè)試時(shí)間短、精密度和準(zhǔn)確度較好等特點(diǎn)，在中藥總黃酮的含量測(cè)定上有著不可替代地位。因此，本文以蘆丁為對(duì)照品，采用紫外-可見分光光度法對(duì)刺玫果中總黃酮的含量進(jìn)行測(cè)定，以便對(duì)刺玫果及系列產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

紫外分光光度儀 （上海儀電分析儀器有限公司，INESA-L6）；電熱套（北京中興偉業(yè)有限儀器公司）

蘆?。ㄖ袊?guó)藥品生物制品檢定所）；刺玫果（批號(hào)：161106、161107、161108）采自吉林省通化市長(zhǎng)白山區(qū)，經(jīng)通化師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院朱俊義教授鑒定為刺玫果）；試劑均為分析純，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取在120°C干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品10mg，置10mL容量瓶中，加70%乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取2mL，置10mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取刺玫果粉末10g，加適量水浸泡1.5h，按料液比為1：10進(jìn)行煎煮、提取溫度為80℃進(jìn)行煎煮，煎煮3次，每次煎煮1.5h，濾過，合并3次煎液，濃縮至100mL，取濃縮液5mL至10mL容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.2 溶液的顯色

分別精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各1mL，分別置25mL量瓶中，各加70%乙醇至6mL，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10mL，再加70%乙醇至刻度，搖勻，放置15min，以相應(yīng)試劑為空白，進(jìn)行檢測(cè)。

2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

精密量取對(duì)照品溶液3mL，置25mL量瓶中，按照2.2中方法進(jìn)行顯色，以相應(yīng)試劑為空白，在400～800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。對(duì)照品溶液在510nm有較大吸收，故確定蘆丁測(cè)定波長(zhǎng)為510nm。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取對(duì)照品溶液 l、2、3、4、5、6mL，分別置25mL量瓶中，按照2.2中方法進(jìn)行顯色，以相應(yīng)試劑為空白，于波長(zhǎng)510nm下進(jìn)行檢測(cè)。以對(duì)照品濃度C為縱坐標(biāo)（X），吸光度A為橫坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸。蘆丁在8～48μg·mL-1濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為y=0.0108x+0.1647（r=0.9998）。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液3mL，置25mL量瓶中，按照2.2中方法進(jìn)行顯色，連續(xù)測(cè)定5次，測(cè)得吸光度值，RSD為0.54%，結(jié)果表明儀器精密度良好，可滿足實(shí)驗(yàn)測(cè)定要求。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液3mL，置25mL量瓶中，按照 2.2 中方法進(jìn)行顯色，室溫放置，分別于 0、2、4、6、8、12h，測(cè)定吸光度值，RSD為0.73%，結(jié)果表明，溶液顯色后放置12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批刺玫果藥材（161106批），依次按2.1和2.2項(xiàng)下方法操作，測(cè)得吸光度值，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品含量，RSD為0.56%，結(jié)果表明本方法樣品重復(fù)性良好。

2.8 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取已知含量的刺玫果10g，共6份，依次按照2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液。取6份供試品溶液各1mL，精密加入濃度為200μg·mL-1蘆丁對(duì)照品3mL，依次按2.2項(xiàng)下方法操作，測(cè)得吸光度值，將吸光度值帶入線性回歸方程，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 刺玫果回收率測(cè)定結(jié)果

刺玫果平均加樣回收率分別為100.387%，RSD為0.85%，加樣回收率符合含量測(cè)定要求。

2.9 含量測(cè)定

分別取三批刺玫果各10g，按“供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，依次按2.2項(xiàng)下方法操作，測(cè)得吸光度值，按外標(biāo)法計(jì)算含量，刺玫果含量測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 刺玫果含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

黃酮類化合物是藥用植物的主要有效成分，具有重要的藥用價(jià)值。近年來國(guó)內(nèi)的大量研究表明刺玫果具有抗衰老，防治心血管疾病等作用，增強(qiáng)免疫作用，保肝作用和預(yù)防癌癥等作用[11～13]。

本文以蘆丁為對(duì)照品，采用紫外-可見分光光度法對(duì)刺玫果中總黃酮的含量進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蘆丁在8～48μg·mL-1濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為y=0.0108x+0.1647（r=0.9998）。經(jīng)計(jì)算刺玫果中總黃酮平均含量為11.820mg·g-1。通過方法學(xué)考察說明儀器精密度好，方法重現(xiàn)性好，樣品經(jīng)顯色后的12h內(nèi)吸光度較穩(wěn)定，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可以用于刺玫果的質(zhì)量控制。