肝癌組織中SIRT5的表達(dá)及其臨床病理意義

劉義文　廖春嬌　黃順東

【摘要】 目的：研究沉默調(diào)節(jié)蛋白5（SIRT5）在肝癌組織中的表達(dá)及其臨床病理意義，探討SIRT5在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測48例患者肝癌及其癌旁組織中SIRT5的表達(dá)情況，分析SIRT5與肝癌的病理特征關(guān)系。結(jié)果：SIRT5在肝癌組織中的總陽性率高于癌旁組織（P<0.05）;肝癌組織中SIRT5的表達(dá)與病理分化程度、TNM分期、門脈癌栓或轉(zhuǎn)移、腫瘤大小有關(guān)（P<0.05），與年齡、性別、腫瘤數(shù)目、AFP、HBsAg、肝硬化程度、肝癌組織類型、包膜完整性等因素?zé)o關(guān)（P>0.05）。結(jié)論：SIRT5的高表達(dá)在肝癌的發(fā)生及發(fā)展中起一定作用，可能在一定程度上反映了肝癌侵襲性強(qiáng)弱。

【關(guān)鍵詞】 沉默調(diào)節(jié)蛋白5; 肝癌; 病理特征

【Abstract】 Objective：To study the expression of SIRT5 in hepatocellular carcinoma and its clinicopathological significance，and to explore the role of SIRT5 in the occurrence and development of hepatocellular carcinoma.Method：The expression of SIRT5 in 48 patients with hepatocellular carcinoma and its adjacent tissues was detected by immunohistochemical SP method.The relationship between SIRT5 and pathological characteristics of hepatocellular carcinoma was analyzed.Result：The total positive rate of SIRT5 in hepatocellular carcinoma was higher than that of adjacent tissues（P<0.05）.The expression of SIRT5 in hepatocellular carcinoma tissues was correlated with pathological differentiation，TNM stage，portal vein thrombus or metastasis，tumor size（P<0.05），but not with age，sex，number of tumors，AFP，HBsAg，degree of cirrhosis，type of hepatocellular carcinoma tissues and capsule integrity（P>0.05）.Conclusion：The high expression of SIRT5 may play a role in the occurrence and development of hepatocellular carcinoma，which may reflect the invasiveness of hepatocellular carcinoma to a certain extent.

【Key words】 SIRT5; Hepatocellular carcinoma; Pathological characteristics

First-authors address：The Second Peoples Hospital of Jingzhou，Jingzhou 434000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.04.035

沉默調(diào)節(jié)蛋白（Sirtuin，SIRT）是一類NAD+依賴型去乙?；福赏ㄟ^去乙?；揎椪{(diào)控腫瘤細(xì)胞的能量代謝及基因的穩(wěn)定性、改變腫瘤微環(huán)境，進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生及發(fā)展[1-3]。SIRT5作為SIRT家族一員，其在肺癌的發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮癌基因的作用，但在肝癌中的作用鮮有報(bào)道，本研究擬通過免疫組織化學(xué)SP法檢測SIRT5在肝癌中的表達(dá)情況及臨床病理意義，分析SIRT5與肝癌的病理特征關(guān)系，來探討SIRT5在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為肝癌的治療及預(yù)后評估提供一定的理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究收集的組織標(biāo)本來自本院肝膽外科2014年1月-2016年12月行肝癌切除術(shù)的患者48例，組織標(biāo)本為同一患者的原發(fā)性肝癌組織及其癌旁組織。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有肝癌患者均經(jīng)病理證實(shí)，且術(shù)前均未行任何抗腫瘤治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除肝癌切除術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)患者、合并嚴(yán)重心腦血管疾病患者、不愿參加臨床研究的患者。本研究通過了本院倫理委員會審核并遵循臨床相關(guān)倫理研究規(guī)定，患者均知情并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 試劑 兔抗人SIRT5多克隆抗體（工作濃度為1︰500）為美國Abcam公司產(chǎn)品、免疫組化試劑盒及DAB辣根過氧化物酶顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。

1.2.2 檢測方法 所有組織標(biāo)本均經(jīng)l0%甲醛固定后石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，采用免疫組織化學(xué)SP法，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.2.3 陽性標(biāo)準(zhǔn) SIRT5陽性表達(dá)為棕黃色顆粒，染色部位主要集中于細(xì)胞核、細(xì)胞膜和/或細(xì)胞質(zhì)。免疫組化采用半定量積分法：以染色程度評分、陽性表達(dá)細(xì)胞百分比評分對SIRT5表達(dá)情況進(jìn)行評估。染色程度評分：無著色為0分;有輕度著色，呈現(xiàn)淺黃色為1分;有中度著色，呈現(xiàn)棕黃色為2分;有重度著色，呈現(xiàn)棕褐色為3分。陽性細(xì)胞染色百分比評分：<1/3為1分：1/3～2/3為2分：>2/3為3分。根據(jù)二者乘積判斷陽性等級：0分為陰性（-），3～6分為陽性（+），>6分為強(qiáng)陽性（++），總陽性=陽性+強(qiáng)陽性。

1.3 觀察指標(biāo) 比較SIRT5在肝癌組織和癌旁組織中的表達(dá)，分析肝癌組織中SIRT5的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 21.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SIRT5在肝癌組織和癌旁組織中的表達(dá)比較 SIRT5蛋白顆粒定位于細(xì)胞核、細(xì)胞膜和/或細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒，見圖1、2;SIRT5在肝癌組織中的總陽性率高于癌旁組織，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=28.364，P=0.000）。見表1。

2.2 肝癌組織中SIRT5的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 肝癌組織中SIRT5的表達(dá)與病理分化程度、TNM分期、門脈癌栓或轉(zhuǎn)移、腫瘤大小有關(guān)（P<0.05），與年齡、性別、腫瘤數(shù)目、AFP、HBsAg、肝硬化程度、肝癌組織類型、包膜完整性等因素?zé)o關(guān)（P>0.05）。見表2。

3 討論

SIRT家族主要通過影響蛋白的去乙?；磻?yīng)參與機(jī)體的應(yīng)激、基因穩(wěn)定性的調(diào)控、能量的代謝、DNA的修復(fù)及細(xì)胞壽命的調(diào)節(jié)[4]，通過調(diào)控細(xì)胞黏附及炎癥途徑干預(yù)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程[3]。SIRT家族在人體內(nèi)有7個(gè)成員（SIRT1～SIRT7），SIRT1和SIRT2主要分布于細(xì)胞質(zhì)中，SIRT3、SIRT4、SIRT5主要分布于線粒體中，SIRT6和SIRT7則主要分布于細(xì)胞核中[5]。根據(jù)研究顯示，SIRT家族7個(gè)成員均在腫瘤的發(fā)生及發(fā)展中其重要作用，其中SIRT1、SIRT2、SIRT3、SIRT4、SIRT6發(fā)揮抑癌基因的作用[6-15]，SIRT7可能發(fā)揮癌基因作用[16]，而對于SIRT5在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用的缺乏明確定論，僅有研究表明其可能在肺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起癌基因的作用[17]，但也有研究顯示在非小細(xì)胞肺癌中，敲除SIRT5后腫瘤細(xì)胞增殖能力減弱[18]。在乳腺癌中SIRT5表達(dá)改變與腫瘤分化水平以及激素受體陽性有關(guān)[19-20]。但在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用不十分明確，僅有我國學(xué)者常亮[20]研究指出SIRT5在肝細(xì)胞肝癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)。

本研究結(jié)果顯示，SIRT5在肝癌組織中的總陽性率高于癌旁組織（P<0.05），說明肝癌組織中SIRT5的過度表達(dá)在一定程度上可以反映肝細(xì)胞的惡變程度，這與常亮[20]研究報(bào)道基本一致，且他的研究發(fā)現(xiàn)，SIRT5在肝細(xì)胞肝癌組織中的表達(dá)與腫瘤的直徑、腫瘤的數(shù)目及TNM分期有關(guān)，而與性別、年齡、病理分級、門脈癌栓、AFP、肝硬化均不相關(guān)，并通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SIRT5通過調(diào)控細(xì)胞周期和EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，肝癌組織中SIRT5的表達(dá)與病理分化程度、TNM分期、門脈癌栓或轉(zhuǎn)移、腫瘤大小有關(guān)（P<0.05），與年齡、性別、腫瘤數(shù)目、AFP、HBsAg、肝硬化程度、肝癌組織類型、包膜完整性等因素?zé)o關(guān)（P>0.05），具體表現(xiàn)為在有門脈癌栓或轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑>5cm、病理分化程度為低分化及未分化、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ中的SIRT5陽性表達(dá)高于無門脈癌栓或轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑≤5 cm、病理分化程度為中分化及高分化、TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期，即在發(fā)生門脈癌栓或轉(zhuǎn)移、腫瘤體積大、病理分化程度低及TNM分期較差組中SIRT5的陽性表達(dá)明顯增加，提示SIRT5與肝癌的侵襲性有一定關(guān)系。可以看出，本組研究對于SIRT5在肝癌組織中的表達(dá)與腫瘤的數(shù)目、門脈癌栓及組織分化程度的相關(guān)性，與常亮[20]研究有一定的出入，可能與入組的標(biāo)本量少有關(guān)。但可以明確的是SIRT5在肝癌的發(fā)生發(fā)展中起重要的作用。

綜上所述，SIRT5在肝癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，在肝癌的發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮癌基因作用，一定程度上反映了肝癌侵襲性強(qiáng)弱，但其在肝癌形成及進(jìn)展中所發(fā)揮的具體分子作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2018-07-03） （本文編輯：董悅）