體外診斷試劑產(chǎn)品校準品量值傳遞方法

謝靜 張瑩

摘 要 體外診斷試劑檢測系統(tǒng)的準確性需要通過校準品不間斷的比較鏈進行量值傳遞。校準品量值傳遞的有效性、可靠性是廠商保證其檢測結(jié)果準確、可追溯、可重復的重要工具，只有嚴格按照溯源鏈進行量值傳遞，才能保證檢測系統(tǒng)能提供可靠的、有參考意義的檢測結(jié)果。

關(guān)鍵詞 校準品 量值傳遞 溯源 不確定度

中圖分類號：R981.9 文獻標志碼：C 文章編號：1006-1533（2019）13-0043-02

Method for the transfer of calibration quality of in vitro diagnostic reagent products

XIE Jing， ZHANG Ying*

（Shanghai Food and Drug Administration Certification and Review Center， Shanghai 200020， China）

ABSTRACT The accuracy of in vitro diagnostic reagent detection system needs to be transmitted through the continuous comparison chain of calibration products. The validity and reliability of calibration product value transfer is an important tool for manufacturers to ensure that their detection results are accurate， traceable and repeatable. Only when the quantity value is strictly transmitted according to the traceability chain， can the detection system provide reliable and reference test results.

KEy WORDS calibration product； value transfer； traceability； uncertainty

隨著醫(yī)療健康產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，體外診斷產(chǎn)業(yè)的規(guī)范化和標準化，臨床檢驗的精密度與穩(wěn)定性越來越被重視，體外診斷試劑產(chǎn)品量值傳遞是實現(xiàn)臨床檢測結(jié)果準確可追溯的重要工具，只有保證產(chǎn)品校準品量值傳遞的有效性，才能在量值上保證臨床檢驗結(jié)果的準確性。

1 校準品量值傳遞對體外診斷試劑檢測準確性的意義

ISO17511：2003中對計量學溯源的解釋為：通過一條具有規(guī)定不確定度的、不間斷的比較鏈，使測量結(jié)果或測量標準的值能夠與規(guī)定的參考標準，通常是與國家標準或國際標準聯(lián)系起來的特性。實驗室的定量檢測，量必須有準確定義，這樣可以使得醫(yī)療的措施可以被正確使用，并且在不同時間和空間都可用以被比較，報告給醫(yī)生或者其他衛(wèi)生人員及患者的結(jié)果必須準確，包括正確和精密，精密即為重復性好，正確是結(jié)果有可比性。

對于溯源性的要求，歐盟關(guān)于體外診斷用品導則（Directive 98/79/EC）要求：“校準物和（或）質(zhì)控物的定值，必須通過現(xiàn)有較高級別的參考測量程序和（或）參考物質(zhì)保證其溯源性”。《醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范體外診斷試劑現(xiàn)場檢查指導原則》中8.7.1應當建立校準品、參考品量值溯源程序。對每批生產(chǎn)的校準品、參考品進行賦值。因此，校準品的量值傳遞對體外診斷試劑的檢測準確性的影響是毋庸置疑的，校準品量值的實質(zhì)影響是臨床檢驗的結(jié)果，只有重視對體外診斷試劑的量值傳遞的研究，不斷提高檢驗技術(shù)，才能最終使得診斷結(jié)果準確一致，各個檢測系統(tǒng)、各家醫(yī)院、不同時期的檢測結(jié)果具有可比性，最終促進臨床檢驗事業(yè)的發(fā)展，使患者受益。

2 校準品量值溯源的類型

2.1 測量結(jié)果在計量上可溯源至SI的被測量

有可用的一級參考測量程序和一個或多個（經(jīng)認證的）一級參考物質(zhì)（作為校準品）。達到這樣水平的有約25～30個類型的量，具有良好確定的組分，例如：一些電解質(zhì)、代謝物、甾體激素及一些甲狀腺激素等。

2.2 測量結(jié)果不能在計量上追溯至SI的被測量

1）有可用的國際約定的參考測量程序（不能被稱為一級參考測量程序）和一種或多種用此參考檢測測量定值的國際約定校準物質(zhì)，如糖化血紅蛋白。

2）有可用的國際約定的參考測量程序，但沒有國際約定的校準物質(zhì)。符合這些條件的約有30種類型組分的量，如：如某些凝血因子、血細胞（ICSH參考方法）、高密度脂蛋白膽固醇等。

3）有可用的一個或多個國際約定的校準物質(zhì)（用作校準品）及賦值方案，但沒有國際約定的參考程序。符合這些條件的約有300多種量，如：使用世界衛(wèi)生組織（WHO）國際標準的量（蛋白激素、某些抗體和腫瘤標志物等）。

4）既無參考測量程序，也無校準的參考物質(zhì)可用。制造商自行建立“自用”源測量程序和源校準品，為產(chǎn)品校準品定值。符合這些條件的約有300種組分的量，如某些腫瘤標志物和抗體。

據(jù)此，量值的傳遞可根據(jù)有無國際參考物質(zhì)/國家標準品和參考測量程序的情況分為以上5種不同的類型。

3 參考物質(zhì)和參考測量程序

1）國際參考物質(zhì)與參考測量程序由國際檢驗醫(yī)學溯源聯(lián)合委員會（JCTLM）主要負責評定。JCTLM于2002年由國際計量局（BIPM）、國際臨床化學與檢驗醫(yī)學聯(lián)合會（IFCC）和國際實驗室認可合作組織（ILAC）共同成立。JCTLM有2個工作組，工作組1主要負責評價候選的參考物質(zhì)和參考測量程序；工作組2主要負責評價候選的參考測量實驗室。JCTLM工作組評價依據(jù)的標準包括：ISO17511、ISO15193、ISO15194、ISO18153、ISO/IEC17025和SO15195：2003。通過評價的參考物質(zhì)、參考測量程序和參考測量實驗室將會公布在JCTLM秘書處的網(wǎng)站上。

2）國家參考物質(zhì)由中國食品藥品檢定研究院標準物質(zhì)與標準化研究所研究、制備、標定、審核和分發(fā)，并定期發(fā)布體外診斷試劑國家標準品和參考品目錄。截至2019年1月，有效的體外診斷試劑標準物質(zhì)共有97種。

3）若無國際參考物質(zhì)、也無國家參考物質(zhì)，也沒有約定的參考方法，最好采用純物質(zhì)制備替代的參考物質(zhì)，并建立內(nèi)部測量程序，制造商應考察程序的科學性、嚴謹性，一般采用回收的方法對自定義的源參考物質(zhì)的量值進行確認和修正。在實際工作中，大部分企業(yè)采用新鮮患者標本作為源參考物質(zhì)，選定行業(yè)內(nèi)公認較好的參考測量系統(tǒng)，給新鮮患者標本定值，再以定值后的患者標本給固定檢測系統(tǒng)校準，系列定值的新鮮患者樣本從量值上認為可以溯源至公認的參考測量系統(tǒng)，從而實現(xiàn)校準的可溯源性。需注意的是，業(yè)內(nèi)公認較好的測量系統(tǒng)需要進行進一步確認，常規(guī)方法之間的比對，不屬于確認的范疇，在此，我們需要對常規(guī)測量系統(tǒng)與參考測量系統(tǒng)使用一定數(shù)量的樣本進行回歸驗證以確認其量值溯源的可靠性，這種確認我們通常認為應該是全量程的確認而不是某一個點的確認。

4 校準品量值傳遞的方法——直接賦值法與比對法

1）直接賦值法。是用直接定值的方法，用高一級參考物質(zhì)或參考測量系統(tǒng)，直接給廠商的校準品進行定值，以此傳遞量值。

2）比對法。用選定參考檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果對廠商校準品的定值進行回歸調(diào)整。最終再與參考值進行比對，當斜率接近于1，截距接近于0，即表示廠商檢測系統(tǒng)可以溯源至參考測量系統(tǒng)，此種溯源方法即通過校準品進行量值傳遞。

5 校準品的不確定度

根據(jù)JJF1001-2011的定義，測量不確定度簡稱不確定度，表征合理地賦予被測量之值的分散性，與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)。

GB/T 21415（ISO 17511）《體外診斷試劑校準品和質(zhì)控品的計量學溯源》規(guī)定，“制造廠商的計量學溯源責任從產(chǎn)品校準品的定值，到二級參考物質(zhì)或二級參考測量程序”。體外診斷試劑生產(chǎn)廠商通過的校準品的逐級量值傳遞，直至醫(yī)院患者樣本，保證包括檢驗試劑、檢驗儀器、校準品、樣本這一固定的檢測系統(tǒng)可以穩(wěn)定地、持續(xù)地輸出檢測結(jié)果，保證檢測系統(tǒng)的量值溯源性，臨床結(jié)果的計量學溯源性。每一級、每一濃度的校準品在依靠自身的濃度進行量值傳遞，逐級傳遞至患者檢測的結(jié)果，每一級的校準品均因其自身穩(wěn)定性、均一性、賦值過程引入不確定度校準品的不確定度，而這個不確定度也會傳遞到患者的檢測結(jié)果，校準品的不確定度是衡量校準品賦值可靠性的定量指標，因此，制定科學有效的方法計算校準品不確定度是關(guān)系到患者檢測結(jié)果準確性的關(guān)鍵因素之一。

評定校準品不確定度的流程可分為4個步驟：①確定被測量目標的不確定度，如校準品的測量不確定度范圍，根據(jù)檢測項目定為各自濃度的1%～5%。②識別不確定度來源確定評估方案，在溯源體系建立的過程中，體外診斷試劑校準品不確定度的來源主要包含3個方面：第一，校準品的定值過程，包含儀器與試劑的精密度、上一級校準品的不確定度、校準品的復溶或修正等。第二，校準品均勻性，包含瓶間均勻性與瓶內(nèi)均勻性。第三，校準品穩(wěn)定性。③量化不確定度分量。根據(jù)指定的不確定度評定方案，分別計算不確定度分量。④計算合成不確定度和擴展不確定度。在定值過程中盡可能減少或消除引起不確定度的影響因素，也可通過減少校準次數(shù)來降低不確定度，將不確定度控制在目標不確定度范圍內(nèi)。

需要注意的是，在量值傳遞過程中，為保證能達到被測量的目標不確定度，需要規(guī)定每一個等級校準品的目標不確定度，被測量的目標不確定度需要滿足終端客戶的臨床需求。

6 討論

體外診斷試劑檢測系統(tǒng)的準確性需要通過校準品不間斷的比較鏈進行量值傳遞。是廠商保證其檢測結(jié)果準確、可追溯、可重復的重要工具，只有嚴格按照溯源鏈進行量值傳遞，才能保證檢測系統(tǒng)的根本目標——臨床檢驗機構(gòu)能為患者提供可靠的有參考意義的檢測結(jié)果。因此，診斷試劑的溯源性在我們?nèi)粘５募夹g(shù)審評中也是重點關(guān)注的內(nèi)容之一。

結(jié)合審評的經(jīng)驗和送審資料的情況，在技術(shù)審評中對于產(chǎn)品溯源性的關(guān)注點我們主要集中在以下幾點：

1）不間斷的校準鏈，各級校準品相應的校準文件，這些文件應包括物質(zhì)、方法、測量系統(tǒng)、影響因素、不確定度評估及統(tǒng)計技術(shù)的描述。

2）校準文件中測量方法應包括方法學考察，統(tǒng)計方法應合理有效，不確定度評估應科學、合理、有效。

3）表述的規(guī)范性。測量項目的參照對象（測量標準、程序）沒有明確的計量等級時，應聲稱溯源至制造商的工作校準品。

4）溯源性的保證。很多企業(yè)采用已獲證產(chǎn)品開展量值傳遞過程，這里應該明確，產(chǎn)品級校準品不是有證參考物質(zhì)，不是量值標準，用產(chǎn)品校準品進行量值傳遞時無法保證量值可靠性，因此需同時考慮校準物的準確性和可互換性，需要通過回歸計算確認其可溯源性。

5）對于若無國際參考物質(zhì)、也無國家參考物質(zhì)，也沒有約定的參考方法的時候，需要對常規(guī)測量系統(tǒng)與參考測量系統(tǒng)使用一定數(shù)量的樣本進行回歸驗證以確認其量值溯源的可靠性，這種確認我們通常認為應該是全量程的確認而不是某一個點的確認。需要特別關(guān)注常規(guī)方法之間的比對，不屬于溯源范疇，在建立溯源性后是可以通過比對等方式進行確認的。