柴胡皂苷D對(duì)非酒精性脂肪性肝炎大鼠糖脂代謝紊亂的影響*

阮 君 肖鐵剛 王 兵△

1.上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院中醫(yī)科 (上海， 200233) 2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院

柴胡皂苷含量占柴胡總干重的7%[1]，其中柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c、柴胡皂苷D被認(rèn)為是柴胡藥理活性最強(qiáng)的物質(zhì)[2,3]。非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是NAFLD的一個(gè)臨床和組織學(xué)分支，與全球人口死亡率、肝硬化和終末期肝病、心血管疾病死亡率的增加以及與肝相關(guān)和非肝相關(guān)癌癥發(fā)病率的增加有關(guān)，本文研究柴胡皂苷D對(duì)NASH大鼠糖脂代謝和肝臟脂肪變性的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)雄性Wistar大鼠44只，體重(130±15)g，由上海斯萊克試驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)[SCXK(滬)2007-0005]，自由進(jìn)食飲水，12 h明暗交替照明，適應(yīng)性普通飼料喂養(yǎng)1 周。

1.2 藥物與試劑 柴胡皂苷D由中國(guó)藥品生物制品研究所提供；羅格列酮片，葛蘭素史克(天津)有限公司，批號(hào)：H20020475；碘125胰島素放射免疫分析試劑盒，購(gòu)于上海西唐生物有限公司。

1. 3 造模和分組方法 44只雄性Wistar 大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(C) 10 只和造模組34只。C組大鼠給予普通飼料喂養(yǎng)，造模組大鼠給予高脂高糖飼料(68%基礎(chǔ)飼料+15%豬油+15%蔗糖+2%膽固醇)喂養(yǎng)。以上飼料均由中國(guó)科學(xué)院上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。于第2、4、6、8周末各處死1只造模大鼠，行肝組織病理切片HE染色，判斷造模情況。造模8周后，將造模成功大鼠隨機(jī)分為模型組(M，n=10)、羅格列酮組(R，n=10)、柴胡皂苷D組(CD，n=10)。

1.4 給藥方法 CD組大鼠以100 mg/kg劑量的柴胡皂苷D灌胃R組大鼠以0.4 g/kg劑量的羅格列酮的灌胃，均1次/d，連續(xù)4周。M組和C組大鼠均以等量生理鹽水灌胃。CD、R和M組大鼠繼續(xù)給予高脂高糖飼料，C組大鼠給予普通飼料。用藥4周后處死大鼠取材。

1.5 觀察指標(biāo) 觀察大鼠行為、狀態(tài)、食欲、毛發(fā)及死亡情況；稱(chēng)量體重；觀察肝臟形態(tài)，包括重量、外形、色澤、質(zhì)地；計(jì)算肝體比(肝體比=肝臟濕重/體重×100%) 。檢測(cè)血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT、AST、FFA、TBA、FBG及FINS水平，計(jì)算IRI：IRI=(FBG×FINS)/22.5。

1.6 病理學(xué)檢測(cè) 取各組大鼠肝右葉相同部位大小(1.0×0.8×0.3)cm3兩塊肝組織放入 4% 甲醛中固定，石蠟包鹽、切片后行HE染色，光鏡下觀察各組大鼠肝臟脂肪變性和炎癥程度。

2 結(jié)果

2.1 4組大鼠體重、肝濕重、肝體比測(cè)定情況 見(jiàn)表1。

表1 4組大鼠體重、肝濕重、肝體比比較

2.2 4組大鼠肝功能檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表2。

表2 4組大鼠肝功能結(jié)果比較

2.3 4組大鼠總膽汁酸、游離脂肪酸檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表3。

表3 4組大鼠TBA、FFA結(jié)果比較

2.4 4組大鼠血脂指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表4。

表4 4組大鼠血脂情況比較

2.5 4組大鼠血糖、胰島素、胰島素抵抗指數(shù)結(jié)果 見(jiàn)表5。

表5 4組大鼠血糖、胰島素、胰島素抵抗指數(shù)比較

2.6 4組大鼠肝脂肪變性和炎癥情況 見(jiàn)表6。

表6 4組大鼠肝脂肪變性、炎癥程度比較

3 討論

非酒精性脂肪性肝病以全身性代謝障礙為主要特點(diǎn),歸屬中醫(yī)“肝癖”“積聚”“脅痛”“痰濁”等范疇[4]?！胺才K腑十二經(jīng)之氣化, 皆必藉肝臟之氣化以鼓舞之, 始能調(diào)暢而不病”(清代周學(xué)海《讀醫(yī)隨筆》)”，肝臟為氣機(jī)升降之樞, 有研究認(rèn)為肝主疏泄對(duì)氣機(jī)的調(diào)節(jié)功能為脂類(lèi)代謝主要途徑[5]。脾失健運(yùn)，肝氣郁結(jié)，最終導(dǎo)致氣機(jī)郁阻、痰瘀互結(jié)是NAFLD的發(fā)病趨勢(shì)和特點(diǎn)[6]。

柴胡為傘形科植物柴胡(DC.)或狹葉柴胡(Willd.)的干燥根，有“北柴胡”“南柴胡”之分[7]，以柴胡為主藥的方劑對(duì)防治脂肪肝有良好效果，如小柴胡湯及其類(lèi)方大柴胡湯、柴胡疏肝散、柴胡桂枝干姜湯、柴胡加龍骨牡蠣湯、柴苓湯等[8]。柴胡皂苷D的藥理作用較為廣泛，包括抗腫瘤、抗癌、保肝、鎮(zhèn)靜、抗癲癇及雌激素樣作用等[9],且療效確切。

糖脂代謝紊亂包括胰島素抵抗、糖耐量異常和脂質(zhì)代謝改變，被認(rèn)為是NAFLD和NASH的分子發(fā)病機(jī)制。機(jī)體營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩時(shí)脂質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子包括碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(ChREBP)以及甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c (SREBP-1c)上調(diào)，導(dǎo)致脂肪生成基因的表達(dá)增加，乙酰輔酶a羧化酶(ACC)升高，促進(jìn)新生脂肪生成(NDL)，抑制肝內(nèi)脂肪酸氧化作用來(lái)驅(qū)動(dòng)脂肪變性[10]。有實(shí)驗(yàn)證明，NAFLD患者不僅肝新生脂肪生成升高，而且血漿FFAs也升高，胰島素抵抗(IR)時(shí)，抑制激素敏感脂肪酶的作用消失，導(dǎo)致脂肪組織向血液中大量釋放游離脂肪酸[11]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示M組大鼠血清TC、TG和FFA均升高，與上述結(jié)果符合，柴胡皂苷D可降低NASH大鼠血脂、血糖和游離脂肪酸水平，改善糖脂代謝紊亂狀態(tài)。

IR與NAFLD之間存在關(guān)聯(lián)，并且IR還是一種獨(dú)立的危險(xiǎn)因素，可用于預(yù)測(cè)NAFLD的發(fā)生發(fā)展[12，13]。本研究發(fā)現(xiàn)，M組大鼠血糖、胰島素含量和胰島素抵抗均有增加，經(jīng)過(guò)柴胡皂苷D治療后，血糖、胰島素含量和胰島素抵抗均明顯降低，柴胡皂苷D可有效改善胰島素抵抗，從而減輕NASH。

實(shí)驗(yàn)表明柴胡皂苷D具有利膽保肝作用。戴維等[14]證明柴胡皂苷D能夠通過(guò)降低膽汁酸的濃度，抑制肝細(xì)胞鈣超載，上調(diào) STIM1 mRNA 的表達(dá)，進(jìn)而減輕阻塞性黃疸對(duì)大鼠肝臟的損傷。法尼醇X受體(FXR)作為膽汁酸相關(guān)受體，當(dāng)膽汁酸增加到一定程度時(shí)，可以通過(guò)誘導(dǎo) Fxr 來(lái)調(diào)節(jié)膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)基因的表達(dá)，達(dá)到調(diào)節(jié)膽汁酸平衡的作用。如柴胡皂苷D通過(guò)誘導(dǎo) Abcc4 mRNA 表達(dá)促進(jìn)膽汁酸從肝細(xì)胞進(jìn)入體循環(huán)進(jìn)而降低膽汁酸的含量；在回腸中，柴胡皂苷D通過(guò)誘導(dǎo) Mdr1 mRNA 表達(dá)促進(jìn)其外排來(lái)調(diào)節(jié)膽汁酸的含量[15]。本研究結(jié)果也證明柴胡皂苷D能降低血清總膽汁酸水平、降低ALT，對(duì)NASH大鼠有利膽保肝之效。