揚州市2015～2017年無償獻血者抗-HIV及HIV-RNA檢測結果調(diào)查分析

黎金鳳 虞莉 范恩勇

[摘要] 目的 了解揚州市2015年2月～2017年12月無償獻血者抗-HIV抗體及HIV-RNA檢測情況。 方法 針對揚州市2015年2月～2017年12月121 617例無償獻血者標本先進行2遍ELISA法檢測抗-HIV抗體，然后對ELISA法結果兩側陰性或單側陰性的116 500例核酸標本再用PCR法檢測HIV-RNA?？?HIV抗體陽性送揚州CDC確證，HIV-RNA陽性送江蘇省血液中心進一步確證。 結果 2015年2月～2017年12月抗-HIV抗體檢出陽性57例，占0.05%，確證陽性13例，占0.01%;確證陽性均為ELISA法雙試劑陽性標本，ELISA法單試劑陽性經(jīng)確證均為陰性; HIV-RNA陽性檢出 4例，占0.003%，確證陽性2例，占0.002%。 結論 采、供血機構相關部門在獻血前征詢招募時，應充分考慮人群HIV 感染分布特征，調(diào)整策略，相關部門應加強HIV相關知識的宣傳普及工作，進一步確保血液安全。在血液病毒檢測中，核酸檢測與酶聯(lián)免疫檢測各具優(yōu)勢，兩者互補，給予二者聯(lián)合應用，提高血液病毒檢測準確性。

[關鍵詞] 無償獻血者;酶聯(lián)免疫吸附試驗;核酸檢測;人類免疫缺陷病毒

[中圖分類號] R193.3 ? ? ? ? [文獻標識碼] B ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-9701（2019）13-0123-04

[Abstract] Objective To understand the anti-HIV antibody and HIV-RNA detection of unpaid blood donors in Yangzhou City from February 2015 to December 2017. Methods Anti-HIV antibodies were detected by two-pass ELISA in 121， 617 unpaid blood donors from February 2015 to December 2017 in Yangzhou City. Then， the HIV-RNA of 116， 500 nucleic acid samples with both-sided negative or one-sided negative ELISA results were detected by PCR. The anti-HIV antibody positive samples were sent to Yangzhou CDC for confirmation， and the HIV-RNA positive samples were sent to the Jiangsu Provincial Blood Center for further confirmation. Results 57 cases of positive anti-HIV antibodies from February 2015 to December 2017 accounted for 0.05%. And 13 were positive， accounting for 0.01%. Confirmed positive specimens were ELISA double reagent positive specimens. Single reagent positive specimens by ELISA method were negative after confirmation. There were 4 cases of positive HIV-RNA， accounting for 0.003%， and 2 cases of confirmed positive， accounting for 0.002%. Conclusion Relevant departments of blood collection and blood supply institutions should fully consider the distribution characteristics of HIV infection in the population and adjust the strategy when consulting for recruitment before donating blood. Relevant departments should strengthen the promotion and popularization of HIV-related knowledge to further ensure blood safety. In the detection of blood virus， nucleic acid detection and enzyme-linked immunosorbent assay have their own advantages， and the two complement each other， and the two are combined to improve the accuracy of blood virus detection.

[Key words] Unpaid blood donors; Enzyme-linked immunosorbent assay; Nucleic acid detection; Human immunodeficiency virus

臨床輸血目前是挽救人類生命的、其他醫(yī)學技術不可替代的重要治療手段，同時臨床輸血也是傳播傳染性疾病的主要途徑之一，如乙肝、丙肝、艾滋、梅毒等輸血傳播性疾病，特別是艾滋相關的人類免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus，HIV）的傳播，更是引起采供機構和臨床醫(yī)院重點關注的焦點。HIV病毒進入人體后會破壞機體免疫系統(tǒng)，導致人體免疫功能異常， 抵抗力下降，最終引發(fā)一系列疾病[1]。隨著臨床用血量逐年增加，無償獻血人數(shù)也相應增加。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計，經(jīng)血液傳播感染艾滋病的人數(shù)占全球HIV 感染者的5%～10%[2]。因此，向臨床提供安全、優(yōu)良的血液及血液制品是我們采、供血機構共同追求的目標[3]。近年來，隨著檢測技術的不斷更新和發(fā)展，特別是試劑方法的改進和靈敏度的提高，血液質(zhì)量和輸血安全也得到了極大的改善。目前，實驗室診斷方法主要有抗體診斷、抗原診斷和病毒載量試驗[4]。為了解無償獻血者人群中HIV的感染情況，現(xiàn)將揚州市中心血站2015年2月～2017年12月121 617例無償獻血者標本抗-HIV抗體和HIV-RNA的檢測情況進行回顧性調(diào)查分析，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

121 617例標本均來自揚州市中心血站2015年2月～2017年12月年無償獻血者，年齡均18～55周歲，所有獻血者均符合《獻血者健康檢查要求》。

1.2 試劑與方法

1.2.1 試劑 ?酶聯(lián)免疫吸附實驗（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑由北京科衛(wèi)和廈門新創(chuàng)提供，核酸試劑由上海科華提供，試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.2.2 方法 ?抗-HIV抗體采用ELISA法進行2遍檢測，2遍采用不同設備、不同廠家試劑、不同工作人員。ELISA法的實驗原理：采用雙抗原夾心法兩步法原理檢測人血清中或血漿樣本中的抗-HIV抗體。在微孔板預包被基因重組HIV抗原。當待檢樣本中存在抗-HIV抗體時，將反應形成抗原抗體復合物，再與加入的酶標記基因工程HIV抗原反應，最后形成“固相HIV抗原-HIV抗體-酶標記HIV抗原”的免疫復合物，加入底物后形成顯色反應。實驗步驟：（1）加入血清至試劑盒內(nèi)微孔板37℃孵育60 min;（2）洗板去除剩余血清;（3）加酶再37℃孵育30 min;（4）洗板去除剩余酶;（5）加底物顯色液37℃孵育30 min;（6）加終止液;（7）比色。最終比色由酶標儀自動完成。每批次實驗均設置陰性、陽性對照，與標本同時檢測，結果以s/cutoff（每孔吸光度A/cutoff，cutoff根據(jù)試劑說明書設置）表示，結果s/cutoff≥0.7為陽性，<0.7為陰性。兩側檢測為陽性或其中一側檢測為陽性最終結果均為陽性，兩側檢測均為陰性最終結果為陰性。所有實驗均嚴格按操作規(guī)程和試劑說明書進行。

HIV-RNA的核酸檢測采用聚合酶鏈反應（Polymerase ?Chain ?Reaction，PCR），采取8人份標本混合檢測模式（8×180 μL=1.44 mL），將標本先進行混樣，混樣結束后，先加裂解液將DNA從細胞內(nèi)裂解出來，再加磁珠吸附DNA，加洗滌液洗滌和洗脫液洗脫，最后提取DNA上清，移入擴增板加入擴增試劑，放入PCR全自動擴增儀擴增，PCR工作原理：在模板DNA、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下，依賴于DNA聚合酶的酶促合成反應。DNA聚合酶以單鏈DNA為模板，借助一小段雙鏈DNA來啟動合成，通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中的一段互補序列結合，形成部分雙鏈。在適宜的溫度和環(huán)境下，DNA聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3-OH末端，并以此為起始點，沿模板5→3方向延伸，合成一條新的DNA互補鏈。PCR由變性——退火——延伸三個基本反應步驟構成：①模板DNA的高溫變性;②模板DNA與引物的低溫退火（復性）;③引物的適溫延伸?；鞕z結果陽性次日再將8個標本拆分單檢（1.44 mL），混檢結果陰性最終結果為陰性。單檢檢測模式同混檢，單檢陽性者最終結果為陽性，單檢陰性最終結果為陰性。所有實驗均嚴格按操作規(guī)程和試劑說明書進行。

檢測策略：2遍ELISA法抗體檢測+1遍核酸檢測;先進行2遍ELISA法檢測抗-HIV抗體，然后對ELISA法兩側陰性或單側陰性標本再進行PCR法檢測HIV-RNA。對ELISA法抗-HIV抗體陽性者送揚州市CDC進一步確證。核酸檢測HIV-RNA陽性者送江蘇省血液中心進一步確證。

1.3 儀器與設備

STAR 8-CH全自動加樣系統(tǒng)（瑞士HAMETLON公司），F(xiàn)AME 24/20全自動酶免分析系統(tǒng)（瑞士HAME TLON公司），ABI7500全自動擴增儀（美國ABI公司），ESCOⅡ型生物安全柜（新加坡ESCO公司），漩渦混合儀，手掌型離心機等。

1.4 觀察指標

統(tǒng)計2015年2月～2017年12月121 617例無償獻血者標本抗-HIV 抗體ELISA法檢測陽性率及送揚州市CDC確證陽性率，同時針對抗-HIV 抗體陽性標本不同試劑的檢測結果，分析其確證結果情況。觀測2015年2月～2017年12月116 500例無償獻血者標本的HIV-RNA核酸檢測情況及陽性標本送省血液中心確證后的結果。分析ELISA法檢測抗- HIV抗體陽性者送揚州CDC進一步確證后，其陽性者人群分布。

1.5 統(tǒng)計學分析

采用SPSS22.00統(tǒng)計學軟件進行處理，計數(shù)資料以[n（%）]表示，2016年與2015年，2017年與2015年抗-HIV 抗體檢測陽性率之間的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 ELISA法抗-HIV抗體檢測結果及WB確證結果

2015年2月～2017年12月121 617例無償獻血者標本抗-HIV 抗體ELISA法檢測出57例陽性，送揚州市CDC用WB法確證出13例陽性，見表1。

2.2 抗-HIV抗體陽性結果組合與確證結果

57例ELISA 法抗-HIV抗體陽性送檢者中，單試劑陽性40例，雙試劑陽性17例，WB法確證結果，見表2。

2.3 抗-HIV抗體陽性結果不同試劑的S/CO值濃度分布與確證結果情況

兩種ELISA試劑抗-HIV抗體陽性結果S/CO值濃度分布與確證結果情況，見表3。

2.4 HIV-RNA核酸檢測情況及陽性標本確證結果

2015年2月～2017年12月116 500例無償獻血者標本的HIV-RNA核酸檢測情況及陽性標本送省血液中心確證后的結果分析見表4。

2.5 HIV-RNA確認陽性獻血員的跟蹤隨訪

兩例HIV-RNA確認陽性獻血員經(jīng)后續(xù)進一步跟蹤隨訪均為HIV感染窗口期。

2.6抗- HIV抗體確證陽性者人群分布情況

ELISA法檢測抗- HIV抗體陽性者送揚州CDC進一步確證后，其陽性者人群分布情況見表5。

3 討論

HIV感染的主要傳播途徑為母嬰傳播、血液傳播和性傳播。其中血液傳播和性傳播是兩大主要傳播途徑。包括不安全性行為、MSM、靜脈吸毒等，亦有經(jīng)輸血傳播HIV的病例[5，6]。由于HIV是RNA病毒，較DNA病毒易變異、不穩(wěn)定，且存在檢測窗口期，血液檢測陰性不能完全排除輸血后HIV感染的可能，因此，了解HIV在無償獻血者人群中的分布對于進一步加強血液安全尤為重要。

從表1可以看出，本市2015～2017年ELISA共檢測121 617例標本，抗-HIV初篩有反應性為57例（0.05%），確認陽性13例（0.01%），與2015年相比較，2016年和2017年陽性率差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。低于廣西沿海地區(qū)0.04%的感染率[7]，低于北海市0.045%的感染率[8]，但高于徐州市0.005%的感染率[9]。

從表2、3可以看出，兩種ELISA試劑初篩一側陽性的標本確認結果均為陰性，兩種ELISA試劑初篩均陽性確認結果陽性率為76.5%（13/17），兩種ELISA試劑初篩結果S/CO≤10，確認結果均為陰性，S/CO>10的初篩標本，北京科衛(wèi)的確認陽性率為81.3%（13/16），廈門新創(chuàng)的確認陽性率為81.3%（13/16）。隨著初篩S/CO值的升高，其確認結果的陽性率也逐漸升高，但S/CO比值較低并不能判定為抗-HIV陰性，要進一步做后續(xù)追蹤隨訪和確認實驗[10]。

從表4可以看出，本市2015～2017年核酸共檢測標本116500例，HIV-RNA初篩陽性4例（0.003%），確認陽性2例（0.002%）。兩例HIV-RNA確認陽性獻血員經(jīng)后續(xù)跟蹤隨訪為HIV窗口期感染。因此，核酸檢測可檢測出HIV弱陽性標本，提高HIV檢出率，有力增強了輸血安全性[11]。

從表5可以看出，確認陽性結果中：性別分布以男性為主占76.9%，年齡分布以18～45歲為主占84.6%，學歷分布以低學歷為主占76.9%，職業(yè)分布以以個體和公司職員為主占100%，婚姻狀況以已婚為主占76.9%。獻血情況以首次為主占61.5%。（1）HIV感染者主要是男性，占76.9%，遠遠高于女性感染者。一方面可能是男性的社交活動較多;另外，男男同性戀（MSM）是HIV高危人群，MSM人群HIV 感染率較高，是HIV流行的重要人群之一。（2）感染者中18～45歲人群較多占84.6%，這個年齡段的人群處于性活躍期，由于目前社會對性觀念的改變，不同程度受到性開放、婚前性行為、性亂行為的影響，外加社會上的一些惡劣風氣諸如賣淫、嫖娼的現(xiàn)象越來越嚴重。45～55歲僅占15.4%。（3）低學歷占76.9%，這類感染人群的文化程度較低，防病治病意識比較淡泊，傳統(tǒng)的說教宣傳很可能難以引起這類人群的重視和理解、接受，未能收到較好效果，應尋求和探索更適合這類人群的宣傳策略。研究生占15.4%，本科生占7.7%。（4）職業(yè)分布以個體和公司職員為主占100%，這類人群相對流動性較大。（5）婚姻狀況以已婚為主占76.9%。已婚人群性傳播機會較多，這是HIV重要傳播途徑。（6）獻血情況以首次為主占61.5%。多次獻血人群相對安全些。（7）人群戶籍分布沒有明顯差異。從年齡、學歷分布等可以看出HIV感染者已從高危人群向低危人群擴散。因此，采、供血機構應采取積極有效的措施，聯(lián)合各大媒體開展對HIV的預防及傳播途徑等相關知識的宣傳。從以上整個人群分布可以看出，我們采、供血機構在獻血征詢招募時，應充分考慮獻血人群HIV感染分布特征，調(diào)整招募方案，進一步保證血液安全。

因此，采、供血機構應聯(lián)合相關部門共同做好無償獻血宣傳工作，讓獻血者能充分認識到高危行為的危害性，引導高危人群在獻血前進行自我了解，排查，放棄獻血，工作人員也應加強獻血前的健康咨詢工作，最大限度的排查高危獻血者[12]。盡量將HIV感染者于獻血前隔離，從源頭上保障輸血安全[13]。排查之余，為保證血液檢測質(zhì)量，提高檢測試劑的特異性和靈敏度，應進一步縮短檢測“窗口期”，約90%的血液漏檢導致患者輸血后感染是由 “窗口期”引起，“窗口期”已成為導致血液檢測漏檢并威脅患者生命安全的重要原因。目前抗-HIV檢測試劑中，第3代試劑的“窗口期”平均約為22 d，第4 代試劑增加了P24 抗原檢測，理論上“窗口期”平均縮短4～5 d，核酸試劑“窗口期”為7.4～9.1 d[7]，因此，無償獻血者標本的核酸檢測非常有必要性，大大縮短了窗口期，提高了血液檢測的安全性。以上我們重點闡述了試劑靈敏度的重要性，試劑的特異性也很重要，從表1可以看出，抗-HIV酶免有反應性，確認陰性為77.2%（44/57），為試劑的非特異性反應。因此應提高試劑的特異性，避免血源的浪費。同時，對這部分屏弊的假陽性獻血員應根據(jù)相關流程歸隊召回，避免獻血員的流失及對其造成的心理負擔[14]。

綜上所述，在獻血者血液標本篩查檢測時，應選擇先進的實驗方法和儀器設備，確保臨床采、供血的進一步安全。在血液病毒檢測中，核酸檢測與酶聯(lián)免疫檢測各具優(yōu)勢，兩者互補，給予二者聯(lián)合應用，提高血液病毒檢測準確性[15]。同時，工作人員應加強自身的保護，防止職業(yè)暴露。各采、供血機構應加強聯(lián)網(wǎng)工作，防止HIV感染者到處惡意獻血，加強屏蔽工作，從而進一步保障血液安全[16]。

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（收稿日期：2019-01-12）