CIK細(xì)胞聯(lián)合化療治療非小細(xì)胞肺癌的療效及對(duì)外周血 T淋巴細(xì)胞和Treg細(xì)胞水平的影響

賀新，蘭飛，尤向輝

空軍軍醫(yī)大學(xué)（第四軍醫(yī)大學(xué)）唐都醫(yī)院腫瘤科，西安7100380

肺癌是一種惡性腫瘤，其發(fā)病率和病死率均居全世界惡性腫瘤的第1位，大約85%的原發(fā)性肺癌是非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）[1-2]。NSCLC發(fā)病隱匿，早期無(wú)特殊癥狀，確診時(shí)一般屬于中晚期，無(wú)法進(jìn)行手術(shù)切除或局部放療?；熀头肿影邢蛑委熓峭砥贜SCLC的主要治療手段，但其治療效果仍不盡人意[3-4]。隨著腫瘤免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的不斷提高，細(xì)胞免疫治療逐漸應(yīng)用于NSCLC的臨床治療中，主要通過(guò)體外擴(kuò)增效應(yīng)細(xì)胞，并回輸效應(yīng)細(xì)胞，刺激機(jī)體的免疫應(yīng)答，依賴效應(yīng)細(xì)胞的高殺傷活性及自體的免疫系統(tǒng)共同抵御腫瘤細(xì)胞[5]。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷（cytokine-induced killer，CIK）細(xì)胞是將不同來(lái)源的單個(gè)核細(xì)胞在體外用多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)后獲得的一群異質(zhì)性免疫細(xì)胞，具有增殖活性高、殺瘤活性強(qiáng)、殺瘤譜廣、對(duì)多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感、殺瘤活性不受環(huán)孢素等免疫抑制劑的影響等優(yōu)點(diǎn)[6]。本研究分析了CIK細(xì)胞聯(lián)合化療治療NSCLC的臨床療效及對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell，Treg）水平的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2016年1月至2017年12月空軍軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院收治的90例NSCLC患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為NSCLC；②未接受過(guò)化療、手術(shù)治療或放療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾??；②合并自身免疫疾??；③合并慢性或急性疾??；④合并其他部位惡性腫瘤。依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將患者分為對(duì)照組和觀察組，每組45例。對(duì)照組患者采用多西紫杉醇和順鉑化療，觀察組患者在對(duì)照組的基礎(chǔ)上給予CIK細(xì)胞免疫治療。對(duì)照組中，女20例，男25例；年齡42～81歲，平均（59.2±2.1）歲；TNM分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期12例，Ⅲ期20例；中心型肺癌33例，周圍型肺癌12例；鱗狀細(xì)胞癌25例，腺癌15例，其他5例。觀察組中，女19例，男26例；年齡 43～80歲，平均（58.9±2.1）歲；TNM分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期13例，Ⅲ期20例；中心型肺癌32例，周圍型肺癌13例；鱗狀細(xì)胞癌26例，腺癌14例，其他5例。兩組患者的性別、年齡、TNM分期等基線特征比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)，所有患者均對(duì)本研究知情并簽署知情同意書。

1.2 治療方法

所有患者均接受多西紫杉醇和順鉑化療，每4周化療1次，用藥前24 h靜脈推注地塞米松5 mg，靜脈滴注西咪替丁0.6 g，以預(yù)防多西紫杉醇可能會(huì)導(dǎo)致的液體潴留綜合征，每隔12 h 1次，連續(xù)3天。觀察組患者接受CIK細(xì)胞聯(lián)合化療，患者于每個(gè)周期化療結(jié)束1天后進(jìn)行CIK細(xì)胞回輸治療，每日1次。待血常規(guī)正常，收集患者的外周血單核細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增，然后回輸，持續(xù)5天，為1個(gè)周期的CIK免疫治療。1個(gè)療程包括1個(gè)周期化療和1個(gè)周期的CIK免疫治療。在進(jìn)行治療的過(guò)程中全程由專職醫(yī)護(hù)人員參與，且在進(jìn)行細(xì)胞回輸前半個(gè)小時(shí)，患者需服用非甾體類藥物30 mg，同時(shí)肌內(nèi)注射非那根25 mg，從而預(yù)防可能出現(xiàn)的過(guò)敏反應(yīng)。若患者出現(xiàn)其他不適，需對(duì)癥治療，若出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，需終止治療。對(duì)照組患者僅采用多西紫杉醇和順鉑化療。治療2個(gè)療程后評(píng)價(jià)療效。

1.3 檢測(cè)方法

外周血T淋巴細(xì)胞檢測(cè)：取100 μl外周靜脈血，分別加入20 μl CD4、CD8、CD3抗體，室溫下避光孵育15 min，然后加入Immuno Prep Reagent System細(xì)胞裂解液，裂解10 min，1500 r/min離心5 min，棄上清，加入1.5 ml磷酸鹽緩沖液混勻，1500 r/min離心5 min，棄上清，然后上流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

Treg細(xì)胞檢測(cè)：取 100 μl外周靜脈血，依次加入鼠抗人CD4-異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）單克隆抗體、鼠抗人CD25-FITC單克隆抗體，于4℃下避光放置30 min，然后加入紅細(xì)胞裂解液裂解樣品管中的紅細(xì)胞，最后采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 觀察指標(biāo)和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

比較兩組患者的臨床療效及治療前后兩組患者的外周血T淋巴細(xì)胞水平（CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+水平及CD4+/CD8+）和Treg細(xì)胞水平（CD4+CD25+水平及CD4+CD25+/CD4+）。依據(jù)實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（response evaluation criteria in solid tumor，RECIST）[7]將患者的臨床療效分為完全緩解（complete response，CR）、部分緩解（partial response，PR）、疾病穩(wěn)定（stable disease，SD）和疾病進(jìn)展（progressive disease，PD）。總有效率=（CR+PR）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組內(nèi)及組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)和兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床療效的比較

觀察組患者的總有效率為37.8%（17/45），高于對(duì)照組的17.8%（8/45），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.486，P＜0.05）。（表1）

表1 兩組患者的臨床療效

2.2 外周血 T淋巴細(xì)胞水平的比較

治療前，觀察組和對(duì)照組患者的外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+水平及 CD4+/CD8+比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，兩組患者的CD3+、CD3+CD4+水平及CD4+/CD8+均較本組治療前升高，且觀察組患者的CD3+、CD3+CD4+水平及CD4+/CD8+均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2 治療前后兩組患者外周血 T淋巴細(xì)胞水平的比較（±s）

表2 治療前后兩組患者外周血 T淋巴細(xì)胞水平的比較（±s）

注：a與本組治療前比較，P＜0.05；b與對(duì)照組治療后比較，P＜0.05

指標(biāo)CD3+（%）CD3+CD4+（%）CD3+CD8+（%）CD4+/CD8+時(shí)間治療前治療后治療前治療后治療前治療后治療前治療后觀察組（n=45）53.56±7.33 71.42±9.39a b 31.04±6.94 45.29±8.10a b 25.96±7.38 25.21±7.61 1.16±0.35 1.82±0.43a b對(duì)照組（n=45）53.12±9.05 61.32±9.17a 30.92±8.12 35.93±7.71a 25.87±7.58 26.31±7.62 1.13±0.47 1.35±0.39a

2.3 外周血Treg細(xì)胞水平的比較

治療前，觀察組和對(duì)照組患者的外周血CD4+CD25+水平及CD4+CD25+/CD4+比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，兩組患者的CD4+CD25+水平及CD4+CD25+/CD4+均較本組治療前降低，且觀察組患者的CD4+CD25+/CD4+低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表3）

表3 治療前后兩組患者外周血Treg細(xì)胞水平的比較（±s）

表3 治療前后兩組患者外周血Treg細(xì)胞水平的比較（±s）

注：a與本組治療前比較，P＜0.05；b與對(duì)照組治療后比較，P＜0.05

指標(biāo)CD4+CD25+（%）CD4+CD25+/CD4+時(shí)間治療前治療后治療前治療后觀察組（n=45）3.98±1.00 3.65±1.08a 13.12±2.58 8.63±1.79a b對(duì)照組（n=45）3.95±1.09 3.70±1.07a 13.08±2.59 11.08±1.78a

3 討論

生物免疫治療是一種逐漸被重視的新型治療模式，而細(xì)胞過(guò)繼性免疫治療也越來(lái)越受到人們的關(guān)注[8]。CIK細(xì)胞作為過(guò)繼性免疫治療的首選，不僅增殖速度較快，對(duì)腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的殺傷活性，而且腫瘤細(xì)胞的耐藥性對(duì)其殺死腫瘤細(xì)胞的效果無(wú)影響[9]。CIK細(xì)胞是由外周血單核細(xì)胞及多種細(xì)胞因子如γ-干擾素（interferon-γ，IFN-γ）、CD3抗體和白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2）等誘導(dǎo)擴(kuò)增而來(lái)。有研究發(fā)現(xiàn)，CIK細(xì)胞聯(lián)合化療藥物對(duì)NSCLC具有較好的治療效果，可增強(qiáng)患者的免疫功能[10-12]。本研究結(jié)果顯示，治療后觀察組患者的總有效率為37.8%，高于對(duì)照組的17.8%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示CIK細(xì)胞免疫療法聯(lián)合化療治療NSCLC的療效優(yōu)于單一化療。

T淋巴細(xì)胞在機(jī)體細(xì)胞免疫和抗腫瘤過(guò)程中具有重要的調(diào)控作用，其中CD3+T淋巴細(xì)胞屬于成熟的淋巴細(xì)胞，在免疫過(guò)程中活性最高[13]。CD4+T淋巴細(xì)胞是主要的輔助性T細(xì)胞，參與巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的激活，發(fā)揮抗腫瘤作用。CD4+T淋巴細(xì)胞不僅能夠直接殺死腫瘤細(xì)胞，還可以通過(guò)其活化使機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫應(yīng)答具備一定的記憶功能，對(duì)再次進(jìn)行抗腫瘤免疫具有重要作用[14]。CD8+T淋巴細(xì)胞又稱T抑制細(xì)胞或細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，主要通過(guò)抑制CD4+T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的功能，抑制抗體的形成和細(xì)胞免疫應(yīng)答，具有負(fù)向調(diào)節(jié)作用。CD8+T淋巴細(xì)胞越多，說(shuō)明腫瘤細(xì)胞不斷增殖，可反映機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的抵抗能力[15]。在T淋巴細(xì)胞亞群中，CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞發(fā)揮調(diào)節(jié)樞紐的作用，其數(shù)量和比值的變化可反映機(jī)體的免疫功能[16]。本研究結(jié)果表明，治療后，兩組患者的CD3+、CD3+CD4+水平及CD4+/CD8+均較本組治療前升高，且觀察組患者的CD3+、CD3+CD4+水平及CD4+/CD8+均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示CIK細(xì)胞治療能夠彌補(bǔ)NSCLC患者因化療引起的免疫細(xì)胞數(shù)量下降。CD4+CD+25T細(xì)胞是具有獨(dú)特免疫調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞亞群，在維持自身免疫耐受中發(fā)揮重要作用，同時(shí)也阻止了機(jī)體對(duì)自體同源腫瘤細(xì)胞的免疫，在腫瘤發(fā)生發(fā)展以及預(yù)后轉(zhuǎn)歸過(guò)程中扮演著重要角色[17]。Treg細(xì)胞能夠抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞的免疫反應(yīng)，促進(jìn)抑制性細(xì)胞因子的釋放，下調(diào)免疫共刺激分子和黏附分子的表達(dá)[18]。Treg細(xì)胞還能夠下調(diào)腫瘤局部產(chǎn)生的免疫反應(yīng)，抑制機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫清除[19]。因此，Treg細(xì)胞數(shù)量增多說(shuō)明腫瘤細(xì)胞在繼續(xù)增殖，其數(shù)量與腫瘤的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，治療后兩組患者的CD4+CD25+水平及CD4+CD25+/CD4+均較治療前降低，且觀察組患者的CD4+CD25+/CD4+低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示CIK細(xì)胞能夠減輕NSCLC患者因化療導(dǎo)致的免疫功能損傷。

綜上所述，CIK細(xì)胞聯(lián)合化療可提高NSCLC的治療效果，改善患者的免疫功能，為NSCLC的治療提供新的方案。