• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    肺炎支原體實(shí)驗(yàn)室診斷的研究進(jìn)展

    2019-07-03 02:11郭昱瑄張盛玉王熙業(yè)
    醫(yī)學(xué)信息 2019年11期
    關(guān)鍵詞:實(shí)驗(yàn)室診斷肺炎支原體

    郭昱瑄 張盛玉 王熙業(yè)

    摘要:肺炎支原體(MP)是一種常見的呼吸系統(tǒng)感染病原體,約占兒童社區(qū)獲得性肺炎病例的40%。MP不僅引起肺部病變,也能侵犯心、腦、肝、腎等其他器官,引起多種肺外表現(xiàn)。然而MP感染臨床表現(xiàn)不具有特征性,臨床上亦缺乏早期有效的診斷方法,容易和其他病毒、細(xì)菌所致的呼吸道感染相混淆。目前MP的實(shí)驗(yàn)室診斷方法不斷推陳出新,但各種方法均有其優(yōu)勢(shì)與不足,本文對(duì)此作一簡(jiǎn)要綜述。

    關(guān)鍵詞:肺炎支原體;實(shí)驗(yàn)室診斷;血清學(xué)診斷;基因?qū)W診斷

    中圖分類號(hào):R725.6? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI:10.3969/j.issn.1006-1959.2019.11.008

    文章編號(hào):1006-1959(2019)11-0026-03

    Abstract:Mycoplasma pneumoniae (MP) is a common respiratory infection, accounting for approximately 40% of cases of childhood community acquired pneumonia. MP not only causes lung lesions, but also invades other organs such as heart, brain, liver, kidney, etc., causing a variety of extrapulmonary manifestations. However, the clinical manifestations of MP infection are not characteristic, and there is a lack of early and effective diagnostic methods in clinical practice, which is easily confused with respiratory infections caused by other viruses and bacteria. At present, the laboratory diagnostic methods of MP are constantly being updated, but each method has its advantages and disadvantages. This paper gives a brief overview.

    Key words:Mycoplasma pneumoniae;Laboratory diagnosis;Serological diagnosis;Genetic diagnosis

    肺炎支原體(mycoplasma pneumoniae,MP)是一種常見的呼吸系統(tǒng)感染病原體,是社區(qū)獲得性肺炎最主要的病原體之一,可通過飛沫或直接接觸感染,在兒童社區(qū)獲得性肺炎中有40%由MP引起,在成人獲得性肺炎中10.60%~25.82%由MP引起,在臥床患者中,其感染率更高,可達(dá)到29.4%。其可引起上呼吸道感染、支氣管炎、肺炎,也可引起嚴(yán)重的肺外并發(fā)癥[1]。近年來MP肺炎發(fā)病率有逐年增高趨勢(shì),且難治性或重癥MP肺炎病例增多,給兒童、老人等免疫低下人群的健康帶來巨大威脅。MP感染臨床表現(xiàn)不具有特異性,易和其他病毒、細(xì)菌所致的呼吸道感染相混淆。由于MP缺乏細(xì)胞壁,使其對(duì)影響細(xì)胞壁合成的抗生素具有耐藥性,頭孢及青霉素類抗生素治療無(wú)效,因此應(yīng)選擇抑制或影響蛋白質(zhì)和核酸合成的藥物來治療,如大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、氨基糖苷類、喹諾酮類。目前大環(huán)內(nèi)酯類是首選藥物,喹諾酮類和四環(huán)素類不推薦用于兒童和孕婦臨床治療。隨著首選藥物廣泛應(yīng)用,耐藥現(xiàn)象也日益嚴(yán)重[2]。因此,早期確診MP感染,及時(shí)、正確用藥,減少并預(yù)防耐藥性,具有重要的意義?,F(xiàn)對(duì)MP的主要實(shí)驗(yàn)室診斷方法綜述如下。

    1分離培養(yǎng)

    MP分離培養(yǎng)包括液體培養(yǎng)法和固體培養(yǎng)法。液體培養(yǎng)法利用MP代謝產(chǎn)物使培養(yǎng)液中指示劑顏色發(fā)生改變(由紅變黃為陽(yáng)性)而鑒定;固體培養(yǎng)法根據(jù)顯微鏡下菌落形態(tài)呈煎蛋樣進(jìn)行鑒別[3]。傳統(tǒng)液固二步培養(yǎng)法曾是WHO推薦的診斷金標(biāo)準(zhǔn),但MP自身無(wú)法合成甾醇,培養(yǎng)成本高,生長(zhǎng)極緩慢,約2~4周,很難在臨床推廣。目前臨床上使用的快速液體培養(yǎng)法雖能在24~48 h完成診斷[4],但培養(yǎng)基中加入的青霉素和醋酸鉈等物質(zhì)無(wú)法抑制真菌和其他雜菌的生長(zhǎng),易產(chǎn)生假陽(yáng)性。She RC等[5]對(duì)分離培養(yǎng)在MP感染的臨床診斷意義進(jìn)行了評(píng)估,結(jié)果顯示與血清學(xué)和基因?qū)W檢測(cè)相比,分離培養(yǎng)法的靈敏度更低且耗時(shí)長(zhǎng),故此法不適于此類病原體的診斷。

    2血清學(xué)檢測(cè)

    雙份血清學(xué)抗體滴度升高4倍以上是診斷MP感染的金標(biāo)準(zhǔn),但收樣困難、耗時(shí),不利于臨床醫(yī)生及時(shí)制定治療方案。MP包括抗原檢測(cè)和抗體檢測(cè),其中抗原檢測(cè)靈敏度低,易與呼吸道其他病原體出現(xiàn)交叉反應(yīng),臨床應(yīng)用受限。MP侵入機(jī)體后,可引起免疫應(yīng)答產(chǎn)生相應(yīng)的抗體,IgM和IgG抗體一般分別在感染的1周和2周后開始出現(xiàn),IgA抗體出現(xiàn)雖更早于IgM,但其靈敏度太低[1]。IgM在感染3~4周達(dá)到峰值,可做為急性期感染的診斷指標(biāo);IgG出現(xiàn)較晚,但持續(xù)時(shí)間長(zhǎng),一般用于判斷既往MP感染。IgM和IgG抗體同時(shí)檢測(cè),有利于提高診斷率[6]。以下為幾種臨床常用的血清學(xué)檢測(cè)方法。

    2.1補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFA)? 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)在10余年前是檢測(cè)MP感染最常用的方法。MP感染后,MP抗原糖脂成分刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體??乖贵w復(fù)合物和補(bǔ)體結(jié)合,在指示系統(tǒng)中能引起溶血;若血清中不含抗體,則補(bǔ)體不被結(jié)合,不發(fā)生溶血現(xiàn)象。但由于糖脂抗原并非MP的特異性抗原,與細(xì)菌、某些植物及人體組織可能有交叉反應(yīng),目前臨床不常用。

    2.2血清冷凝集試驗(yàn)(CAT)? MP感染后,機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答,會(huì)產(chǎn)生一種非特異性IgM 冷凝集素。其在4℃下可使人的O型紅細(xì)胞或自身紅細(xì)胞發(fā)生凝集現(xiàn)象,而37℃溫浴后凝集現(xiàn)象消失。當(dāng)?shù)味取?4時(shí),對(duì)MP感染有參考價(jià)值。該方法操作簡(jiǎn)單,但特異性較差,流感病毒感染、腺病毒感染、腫瘤等疾病也會(huì)導(dǎo)致CAT結(jié)果呈陽(yáng)性,甚至抗生素的使用都會(huì)影響到CAT的結(jié)果[7]。

    2.3酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)? ELISA發(fā)明于1980年,常聯(lián)合檢測(cè)MP-IgM和MP-IgG以提高ELISA診斷率。原理是采用MP抗原包被于載體表面,捕獲血清中的相應(yīng)抗體形成免疫復(fù)合物,再與酶標(biāo)記的第二抗體結(jié)合,借助酶的降解作用顯示的顏色變化作出診斷[8]。該法僅需幾個(gè)小時(shí),且與其他常見的呼吸道病原體無(wú)交叉反應(yīng),目前已有多個(gè)品牌的ELISA 試劑盒在售。其缺點(diǎn)是需用雙份不同時(shí)期的血清樣本對(duì)患者確診,且為多反應(yīng)、多試劑、多步驟的檢測(cè)方法,其中被板溫育時(shí)間和溫箱的溫度、洗板次數(shù)、酶標(biāo)儀的性能以及操作人員的熟練程度等多種因素均可影響檢測(cè)的結(jié)果,易產(chǎn)生假陽(yáng)性。

    2.4膠體金免疫層析法(CGIA)? 基于雙抗夾心法,待測(cè)樣本中的MP抗體先后與膠體金標(biāo)記的抗原和層析膜上固定的捕獲抗原結(jié)合,利用抗原抗體反應(yīng)的特異性及膠體金的示蹤放大效應(yīng),對(duì)MP抗體實(shí)現(xiàn)目視化檢測(cè)[9];若層析膜上檢測(cè)帶區(qū)出現(xiàn)紅色變色反應(yīng),結(jié)果為“陽(yáng)性”[10]。該方法的結(jié)果只報(bào)告陰性或陽(yáng)性,不能報(bào)告滴度。無(wú)需特殊設(shè)備,5~10 min得到結(jié)果,適宜在一般基層醫(yī)院應(yīng)用。由于其集合了免疫反應(yīng)和色譜層析的優(yōu)勢(shì),溶血、脂血、黃疽對(duì)結(jié)果均無(wú)影響,但特異性靈敏度不高,易造成漏診[11]。

    2.5顆粒凝集法(PA)? 該法采用表面吸附MP抗原的明膠顆粒代替動(dòng)物紅細(xì)胞做載體,致敏明膠顆粒與血清中的MP 抗體發(fā)生凝集反應(yīng)。目前應(yīng)用的PA試驗(yàn)主要是利用乳膠和凝膠作為攜帶顆粒與試驗(yàn)血清進(jìn)行孵育。如果血清中含有MP特異抗體,顆粒附著,產(chǎn)生可見反應(yīng)。該法可顯著消除血清冷凝集試驗(yàn)中動(dòng)物紅細(xì)胞的非特異性反應(yīng),凝集圖像清晰[12]。PA試驗(yàn)應(yīng)用混合MP抗原同時(shí)檢測(cè)IgG和IgM。國(guó)內(nèi)MP的檢測(cè)主要采用進(jìn)口試劑,如日本的PA(東京富士株式會(huì)社) 和美國(guó)EIA(GenBio公司)的MP抗體檢測(cè)試劑盒,便是基于此法設(shè)計(jì),3 h可出診斷結(jié)果,但這些試劑價(jià)格昂貴且存在抗原特異性問題。

    3基因?qū)W檢測(cè)

    雖然MP血清學(xué)檢測(cè)簡(jiǎn)便快捷,在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用。但這種方法僅對(duì)既往感染能提供較好的檢測(cè)指標(biāo),而對(duì)現(xiàn)癥感染考核的應(yīng)用價(jià)值較低。臨床上推薦將血清學(xué)檢測(cè)和基因?qū)W檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行以提高診斷準(zhǔn)確度[13,14]。目前MP基因?qū)W檢測(cè)的目標(biāo)基因主要有三種:MP編碼P1黏附蛋白基因、16S rRNA 和延伸因子Tu基因設(shè)計(jì)。

    3.1核酸雜交技術(shù)? 該技術(shù)根據(jù)兩條互補(bǔ)的核酸單鏈可雜交結(jié)合成雙鏈的原理,針對(duì)MP目標(biāo)基因設(shè)計(jì)用放射性核素或化學(xué)發(fā)光試劑標(biāo)記的核苷酸片段,通過雜交,可探知受檢標(biāo)本中有無(wú)與之互補(bǔ)的MP目的基因。美國(guó)GenProb公司的Gen-Prob rapid diagostic system診斷試劑,利用125I標(biāo)記的cDNA探針,與MP特異的rRNA雜交,2 h內(nèi)可完成檢測(cè)。該方法與其他支原體DNA無(wú)交叉反應(yīng),但敏感性差,但采用放射性核素標(biāo)記,不便于臨床推廣。

    3.2聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)? PCR技術(shù)是一種模擬體內(nèi)DNA復(fù)制的體外擴(kuò)增技術(shù),上世紀(jì)80年代開始被用于檢測(cè)各種臨床標(biāo)本中的MP。該法具有靈敏度高和快捷等優(yōu)點(diǎn),檢測(cè)標(biāo)本中的MP不需要是活體,不受患者免疫功能、病程、感染程度和用藥情況的影響[15],可早期診斷MP感染。依靠核酸擴(kuò)增技術(shù)對(duì)肺炎支原體進(jìn)行篩查已經(jīng)在各國(guó)廣泛開展。PCR技術(shù)檢測(cè)病原體的核酸, 不存在交叉反應(yīng)和放射性污染,大大提高了檢測(cè)的效率和靈敏性, 在臨床上的應(yīng)用已十分廣泛。常用的PCR 法主要有常規(guī)PCR 法、巢式PCR[16]和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)[17]法等。而目前已報(bào)道的眾多PCR方法中,絕大多數(shù)需要對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化、濃縮,這是一個(gè)即費(fèi)時(shí)又費(fèi)力的工作,很難滿足未來對(duì)自動(dòng)化的要求。此外核酸擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)過程中產(chǎn)生的假陽(yáng)性污染也一直困擾著眾多研發(fā)人員。qPCR作為其中的代表,巧妙利用了PCR技術(shù)擴(kuò)增的高效性,探針技術(shù)高特異性和光譜技術(shù)的敏感性及定量分析的優(yōu)點(diǎn),在完全閉管狀態(tài)下進(jìn)行擴(kuò)增和產(chǎn)物分析,克服了普通PCR易污染不能定量靈敏度不高等不足,目前已有多種基于此技術(shù)的MP試劑盒應(yīng)用于臨床[1],其檢測(cè)時(shí)間更短,敏感性更高,不再需凝膠電泳分析檢測(cè)結(jié)果[18]。但是也因其敏感性高,易使得MP定植時(shí)被誤診為感染。且存在熒光探針、儀器價(jià)格昂貴等問題[19]。

    3.3環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法(LAMP)? LAMP技術(shù)是一種新的核酸擴(kuò)增方法,針對(duì)MP靶基因上的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)4條引物,利用鏈置換型DNA聚合酶在恒溫條件下進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng),在65℃左右恒溫條件下對(duì)靶序列進(jìn)行高效、高特異性的擴(kuò)增,可在15~60 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)109~1010倍的擴(kuò)增,反應(yīng)能產(chǎn)生大量的擴(kuò)增產(chǎn)物(焦磷酸鎂白色沉淀),可以通過肉眼觀察白色沉淀的有無(wú)來判斷MP靶基因是否存在[20]。不需進(jìn)行模板熱變性、長(zhǎng)時(shí)間溫度循環(huán)、繁瑣的電泳和紫外觀察等過程。LAMP方法最大優(yōu)勢(shì)就是高靈敏度外,操作簡(jiǎn)單,恒溫裝置就能實(shí)現(xiàn)反應(yīng),適合現(xiàn)場(chǎng)、基層快速檢測(cè)的方法[15]。但由于LAMP 擴(kuò)增是鏈置換合成,靶序列長(zhǎng)度最好在300 bp內(nèi),大于500 bp則較難擴(kuò)增,故不能進(jìn)行長(zhǎng)鏈DNA 擴(kuò)增,檢測(cè)對(duì)引物設(shè)計(jì)要求高。

    4總結(jié)及展望

    目前全球醫(yī)療決策中有2/3是基于診斷信息作出的,而診斷支出僅占醫(yī)療總支出的1%,診斷技術(shù)的進(jìn)一步提高對(duì)疾病的預(yù)防、診斷和治療具有積極意義?;贛P檢測(cè)的龐大臨床需求,特別是在“精準(zhǔn)化醫(yī)療”被提到國(guó)家戰(zhàn)略發(fā)展高度的社會(huì)大背景下,針對(duì)MP感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法也在不斷更新發(fā)展,目前的MP檢測(cè)方法很多,各有優(yōu)缺點(diǎn),尚且無(wú)統(tǒng)一的診斷標(biāo)準(zhǔn)。MP檢測(cè)的方法主要有分離培養(yǎng)、血清學(xué)抗體檢測(cè)和PCR診斷。MP分離培養(yǎng)耗時(shí)較長(zhǎng),且培養(yǎng)條件苛刻,靈敏度不高,用于臨床診斷意義不大;目前臨床有兩類常用方法,一類是血清肺炎支原體抗體IgM(MP-IgM)檢測(cè),一類是肺炎支原體核酸(MP-DNA)檢測(cè)。血清學(xué)檢測(cè)簡(jiǎn)便快捷,在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用。但這種方法僅對(duì)既往感染能提供較好的檢測(cè)指標(biāo),而對(duì)現(xiàn)癥感染考核的應(yīng)用價(jià)值較低。MP-DNA檢測(cè)則可以彌補(bǔ)血清MP-IgM檢測(cè)的不足,對(duì)于MP-DNA檢測(cè),檢測(cè)標(biāo)本中的MP不需要是活體,不受患者免疫功能、病程、感染程度和用藥情況的影響,可以更早期地檢測(cè)到MP的感染,有利于MP的早期診斷和抗生素的正確選擇。目前,臨床推薦在PCR法和血清學(xué)檢測(cè)中各選擇一種方法進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè),盡快準(zhǔn)確完成MP肺炎的診斷,以便及時(shí)、正確用藥,減少并預(yù)防耐藥性。

    參考文獻(xiàn):

    [1]Meyer SPM,Unger WWJ,David N,et al.Infection with and Carriage of Mycoplasma pneumonia in Children[J].Front Microbiol,2016(7):329.

    [2]Zhao F,Liu G,Wu J,et al.Surveillance of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae in Beijing, China, from 2008 to 2012[J].Antimicrobial Agents & Chemotherapy,2013,57(3):1521-1523.

    [3]李雙麗,朱文勇,馮磊,等.人肺炎支原體的分離培養(yǎng)及鑒定[J].中國(guó)生物制品學(xué)雜志,2018,31(4):400-404,408.

    [4]柴娟.快速檢測(cè)方法在呼吸道感染病原體檢測(cè)的臨床價(jià)值[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2017,38(2):179-181.

    [5]She RC,Thurber A,Hymas WC,et al.Limited utility of culture for Mycoplasma pneumoniae and Chlamydophila pneumoniae for diagnosis of respiratory tract infections[J].Journal of Clinical Microbiology,2010,48(9):3380-3382.

    [6]張文超,趙夢(mèng)川,馮志山,等.被動(dòng)顆粒凝集法檢測(cè)MP抗體效價(jià)和膠體金法聯(lián)合檢測(cè)MP-IgM、MP-IgG抗體在兒童支原體肺炎中的應(yīng)用價(jià)值[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2018,39(9):1058-1061,1066.

    [7]崔奕文,劉毅,林梅.肺炎支原體IgM抗體檢測(cè)的常用方法比較[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,32(10):1107-1108.

    [8]季艷艷,楊正貴.冷凝集試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)呼吸道肺炎支原體IgM抗體檢測(cè)的評(píng)價(jià)[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生,2015,53(4):107-109.

    [9]張杰,胡軍,劉楊,等.肺炎支原體快速檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2016,37(17):2379-2381.

    [10]Li W,Liu Y,Zhao Y,et al.Rapid diagnosis of Mycoplasma pneumoniae in children with pneumonia by an immuno-chromatographic antigen assay[J].Scientific Reports,2015(5):15539.

    [11]Miyashita N,Kawai Y,Yamaguchi T,et al.Clinical potential of diagnostic methods for the rapid diagnosis ofMycoplasma pneumoniaepneumonia in adults[J].European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases,2011,30(3):439-446.

    [12]蔣可乾.被動(dòng)凝集半定量檢測(cè)法在早期肺炎支原體感染診斷中的應(yīng)用[J].醫(yī)藥前沿,2013(22):310-311.

    [13]李少麗,趙漢青,孫紅妹,等.培養(yǎng)法、PCR法和血清學(xué)法在檢測(cè)兒童肺炎支原體感染中的應(yīng)用比較[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2017,37(1):73-77.

    [14]李海華,李靜,樓亞玲,等.多重?zé)晒舛烤酆厦告湻磻?yīng)對(duì)呼吸道感染患兒支原體和衣原體感染的診斷價(jià)值[J].國(guó)際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志,2017,44(1):27-31.

    [15]Ratliff AE,Duffy LB,Waites KB.Comparison of the illumigene Mycoplasma DNA amplification assay and culture for detection of Mycoplasma pneumoniae[J].Journal of Clinical Microbiology,2014,52(4):1060-1063.

    [16]付曉燕,秦選光,辛德莉.小兒肺炎支原體感染耐藥情況回顧分析[J].中國(guó)兒童保健雜志,2017,25(9):951-954.

    [17]唐禮新,龐大志,羅威.核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)技術(shù)(PCR)檢測(cè)肺炎支原體(MP)在社區(qū)幼兒獲得性肺炎輔助診斷中的意義[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué)與健康研究電子雜志,2017(5):24-25.

    [18]Wolff BJ,Benitez AJ,Desai HP,et al.Development of a multiplex taqMan real-time PCR assay for typing of Mycoplasma pneumoniae based on type-specific indels identified through whole genome sequencing[J].Diagnostic Microbiology and Infectious Disease,2017,87(3):203-206.

    [19]Chang HY,Chang LY,Shao PL,et al.Comparison of real-time polymerase chain reaction and serological tests for the confirmation of Mycoplasma pneumoniae infection in children with clinical diagnosis of atypical pneumonia[J].Journal of Microbiology Immunology & Infection,2014,47(2):137-144.

    [20]Yuan X,Bai C,Cui Q,et al.Rapid detection of Mycoplasma pneumoniae by loop-mediated isothermal amplification assay[J].Medicine,2018,97(25):e10806.

    收稿日期:2019-3-4;修回日期:2019-3-14

    編輯/肖婷婷

    猜你喜歡
    實(shí)驗(yàn)室診斷肺炎支原體
    變異后的黑熱病實(shí)驗(yàn)室診斷
    小兒支氣管哮喘與小兒肺炎支原體感染相關(guān)性分析
    經(jīng)支氣管鏡注射布地奈德治療兒童肺炎支原體大葉性肺炎
    鵝副黏病毒病實(shí)驗(yàn)室診斷方法淺析
    兒童肺炎支原體感染299例臨床分析
    小兒肺炎支原體感染的臨床檢驗(yàn)分析
    小兒肺炎支原體肺炎85例臨床分析
    豬流行性腹瀉預(yù)防及診斷研究進(jìn)展
    一例肉雞H9亞型禽流感與大腸桿菌混合感染的診斷報(bào)告
    豬肺疫的診斷與綜合防治
    国产精品一区二区三区四区久久| 老司机深夜福利视频在线观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| a级一级毛片免费在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产中年淑女户外野战色| 在现免费观看毛片| 色综合站精品国产| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 亚洲18禁久久av| 亚洲第一区二区三区不卡| 少妇人妻精品综合一区二区 | 午夜免费激情av| 夜夜爽天天搞| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 成人国产麻豆网| 又粗又爽又猛毛片免费看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲经典国产精华液单| 网址你懂的国产日韩在线| netflix在线观看网站| 午夜视频国产福利| 欧美3d第一页| 毛片女人毛片| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 成人三级黄色视频| 欧美黑人巨大hd| 亚洲精品成人久久久久久| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 别揉我奶头 嗯啊视频| 麻豆成人午夜福利视频| 成人午夜高清在线视频| 国产一区二区激情短视频| 日韩精品有码人妻一区| 久久久久久九九精品二区国产| 成人国产综合亚洲| 欧美高清成人免费视频www| 国产在视频线在精品| 成年女人毛片免费观看观看9| 精品欧美国产一区二区三| 91久久精品国产一区二区成人| 欧美性猛交黑人性爽| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲乱码一区二区免费版| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 联通29元200g的流量卡| 中文字幕久久专区| 免费黄网站久久成人精品| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲成a人片在线一区二区| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产亚洲精品久久久com| 一边摸一边抽搐一进一小说| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲熟妇熟女久久| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产三级在线视频| 久久精品人妻少妇| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 欧美+日韩+精品| 啦啦啦韩国在线观看视频| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲一区高清亚洲精品| 最后的刺客免费高清国语| 国产伦人伦偷精品视频| 国产精品一区二区三区四区久久| 黄色女人牲交| 91av网一区二区| 嫩草影视91久久| 12—13女人毛片做爰片一| 日本黄色视频三级网站网址| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 欧美+日韩+精品| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 18禁黄网站禁片免费观看直播| 大型黄色视频在线免费观看| 国产精品1区2区在线观看.| 麻豆成人av在线观看| 国产一区二区三区视频了| 日本黄大片高清| 悠悠久久av| av.在线天堂| 我的老师免费观看完整版| 国产精品98久久久久久宅男小说| 少妇的逼水好多| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 在线观看美女被高潮喷水网站| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产午夜福利久久久久久| h日本视频在线播放| 久久久久久久久久成人| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲人成网站在线播| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产精品不卡视频一区二区| 免费无遮挡裸体视频| 伦理电影大哥的女人| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲第一电影网av| 色av中文字幕| 一级av片app| 日本黄色片子视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 久9热在线精品视频| 国产亚洲精品久久久com| 最后的刺客免费高清国语| 狠狠狠狠99中文字幕| 免费看美女性在线毛片视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 嫩草影院入口| 一个人观看的视频www高清免费观看| 91久久精品国产一区二区三区| 99久久中文字幕三级久久日本| 精品久久久久久久久亚洲 | 99久久无色码亚洲精品果冻| 日本a在线网址| 最后的刺客免费高清国语| 日本一二三区视频观看| 国产视频内射| 熟女人妻精品中文字幕| 中出人妻视频一区二区| 精品久久久久久久久久免费视频| 中文字幕高清在线视频| 午夜视频国产福利| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 日本免费a在线| 一个人观看的视频www高清免费观看| 一本一本综合久久| 亚洲人成伊人成综合网2020| 岛国在线免费视频观看| 亚洲熟妇熟女久久| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲成人免费电影在线观看| av.在线天堂| 国产精品一区二区性色av| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久亚洲精品不卡| 国产av不卡久久| 成年女人永久免费观看视频| 久久这里只有精品中国| 国产精品av视频在线免费观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 九九热线精品视视频播放| 丝袜美腿在线中文| 日本一二三区视频观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 欧美最新免费一区二区三区| 身体一侧抽搐| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲精品一区av在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 免费搜索国产男女视频| 亚洲五月天丁香| 桃红色精品国产亚洲av| 日韩亚洲欧美综合| 午夜激情福利司机影院| 久久久国产成人精品二区| 久久久国产成人精品二区| 日韩欧美在线二视频| 九九爱精品视频在线观看| 老女人水多毛片| netflix在线观看网站| 亚洲最大成人中文| .国产精品久久| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 国产精品无大码| 国产高清激情床上av| 窝窝影院91人妻| 看片在线看免费视频| 国产午夜精品论理片| 在线观看舔阴道视频| 婷婷亚洲欧美| 亚洲专区国产一区二区| 在线观看av片永久免费下载| 此物有八面人人有两片| 精品国产三级普通话版| 亚洲熟妇熟女久久| 99国产精品一区二区蜜桃av| 乱系列少妇在线播放| 成人亚洲精品av一区二区| 联通29元200g的流量卡| 网址你懂的国产日韩在线| 国产午夜福利久久久久久| 成人三级黄色视频| 欧美一区二区国产精品久久精品| 日韩欧美免费精品| 午夜福利视频1000在线观看| 99热这里只有精品一区| 在线观看舔阴道视频| 在线天堂最新版资源| 亚洲精品成人久久久久久| 婷婷六月久久综合丁香| 长腿黑丝高跟| 露出奶头的视频| 日本a在线网址| a在线观看视频网站| 国产视频内射| 国产色爽女视频免费观看| 国产精品人妻久久久久久| 黄色日韩在线| 久久欧美精品欧美久久欧美| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 极品教师在线免费播放| 国产精品久久久久久av不卡| 久9热在线精品视频| 免费在线观看成人毛片| 日韩欧美在线二视频| 欧美潮喷喷水| 黄色一级大片看看| 1000部很黄的大片| 黄片wwwwww| 国产亚洲91精品色在线| 免费观看人在逋| 国产精品久久视频播放| 成人性生交大片免费视频hd| 人妻久久中文字幕网| 成人美女网站在线观看视频| 色5月婷婷丁香| 小说图片视频综合网站| 日韩欧美国产一区二区入口| 热99在线观看视频| 色哟哟·www| 国产精品久久久久久av不卡| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 日本三级黄在线观看| 亚洲无线观看免费| av.在线天堂| 国产 一区精品| 国产男人的电影天堂91| 午夜亚洲福利在线播放| 禁无遮挡网站| 欧美3d第一页| 日日夜夜操网爽| 国产精品98久久久久久宅男小说| 欧美日本亚洲视频在线播放| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲最大成人手机在线| 久久久久久久久久久丰满 | h日本视频在线播放| 国产真实伦视频高清在线观看 | 久久人妻av系列| 成人永久免费在线观看视频| 国产精品1区2区在线观看.| av国产免费在线观看| 日韩强制内射视频| 精品一区二区三区视频在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 99久久九九国产精品国产免费| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久人人爽人人爽人人片va| 成年人黄色毛片网站| 高清在线国产一区| 色综合色国产| 日韩欧美精品v在线| 舔av片在线| 久99久视频精品免费| 精品久久久久久久久久久久久| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 午夜福利高清视频| 最新中文字幕久久久久| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲av第一区精品v没综合| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 免费在线观看日本一区| 国产黄片美女视频| 国产 一区精品| 亚洲av第一区精品v没综合| 成年免费大片在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 99久久九九国产精品国产免费| 村上凉子中文字幕在线| 床上黄色一级片| 简卡轻食公司| 日日夜夜操网爽| 亚洲第一区二区三区不卡| 热99在线观看视频| 久久6这里有精品| 极品教师在线视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产一区二区激情短视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 欧美色视频一区免费| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 日本色播在线视频| 极品教师在线免费播放| 99热这里只有是精品在线观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 熟女电影av网| 精品人妻视频免费看| 亚洲精品国产成人久久av| 好男人在线观看高清免费视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产精品国产高清国产av| 成人三级黄色视频| 69人妻影院| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲中文日韩欧美视频| 成人三级黄色视频| 国产精品久久久久久av不卡| 久久精品国产亚洲av天美| 白带黄色成豆腐渣| 五月伊人婷婷丁香| 欧美日韩乱码在线| 成人鲁丝片一二三区免费| 天堂网av新在线| 22中文网久久字幕| 长腿黑丝高跟| 俺也久久电影网| 九九爱精品视频在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲精品在线观看二区| 久久久久久国产a免费观看| 最近在线观看免费完整版| 精品久久久久久久久久免费视频| 日韩欧美 国产精品| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产高清三级在线| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 哪里可以看免费的av片| 熟女人妻精品中文字幕| 国产av麻豆久久久久久久| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲熟妇熟女久久| 国产美女午夜福利| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 此物有八面人人有两片| 久久久久久国产a免费观看| 精品无人区乱码1区二区| 联通29元200g的流量卡| 国产视频一区二区在线看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 三级毛片av免费| 91狼人影院| 3wmmmm亚洲av在线观看| 91久久精品国产一区二区成人| 能在线免费观看的黄片| 欧美潮喷喷水| 在线观看免费视频日本深夜| 久久精品国产自在天天线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 午夜激情欧美在线| 在线观看66精品国产| 男女下面进入的视频免费午夜| 久久6这里有精品| 亚洲在线自拍视频| 久久精品人妻少妇| 天美传媒精品一区二区| 99久久成人亚洲精品观看| av在线蜜桃| 国产黄色小视频在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 一进一出抽搐gif免费好疼| 搡老妇女老女人老熟妇| 老女人水多毛片| 久久欧美精品欧美久久欧美| 欧美激情在线99| 淫妇啪啪啪对白视频| 深夜a级毛片| 亚洲欧美日韩高清专用| 伊人久久精品亚洲午夜| 哪里可以看免费的av片| 色av中文字幕| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲四区av| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲国产欧美人成| 国产av一区在线观看免费| 村上凉子中文字幕在线| 国内精品久久久久久久电影| 国产精品福利在线免费观看| 色av中文字幕| 香蕉av资源在线| av在线老鸭窝| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 窝窝影院91人妻| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 丰满的人妻完整版| 亚洲最大成人手机在线| 18+在线观看网站| 国产真实伦视频高清在线观看 | 国产精品野战在线观看| 久久久午夜欧美精品| 欧美一区二区亚洲| 老司机午夜福利在线观看视频| 在线a可以看的网站| 国产男人的电影天堂91| 午夜精品在线福利| 少妇的逼水好多| 在线观看一区二区三区| 男插女下体视频免费在线播放| 看片在线看免费视频| 美女大奶头视频| 真人一进一出gif抽搐免费| 中文字幕高清在线视频| www日本黄色视频网| 男插女下体视频免费在线播放| 国产在线男女| avwww免费| 国产欧美日韩一区二区精品| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产精品免费一区二区三区在线| 两人在一起打扑克的视频| 白带黄色成豆腐渣| 国产av不卡久久| 欧美丝袜亚洲另类 | 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 如何舔出高潮| 免费观看在线日韩| 国产精品精品国产色婷婷| 久久精品国产亚洲av天美| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 制服丝袜大香蕉在线| 日本在线视频免费播放| 1000部很黄的大片| 午夜亚洲福利在线播放| 中文在线观看免费www的网站| 精品人妻偷拍中文字幕| 偷拍熟女少妇极品色| 日本在线视频免费播放| 日本免费一区二区三区高清不卡| 嫩草影院新地址| 国产精品一区二区免费欧美| 国产精品福利在线免费观看| 一本一本综合久久| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 久久热精品热| 亚洲自偷自拍三级| 国产69精品久久久久777片| 在线a可以看的网站| 九九热线精品视视频播放| 亚洲人成网站在线播| 色哟哟哟哟哟哟| 国产精品久久久久久av不卡| 国产伦精品一区二区三区四那| 日本色播在线视频| 99久久精品国产国产毛片| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 最新中文字幕久久久久| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产一区二区三区视频了| 成人午夜高清在线视频| 看黄色毛片网站| 99久久精品热视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 嫩草影院精品99| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲精品成人久久久久久| 乱系列少妇在线播放| 欧美日韩黄片免| 高清毛片免费观看视频网站| 色5月婷婷丁香| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| xxxwww97欧美| 日韩中文字幕欧美一区二区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 真实男女啪啪啪动态图| 国产精品无大码| 一本一本综合久久| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 少妇的逼好多水| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲精华国产精华精| 在线播放无遮挡| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 亚洲久久久久久中文字幕| 日韩一本色道免费dvd| 国产精品久久视频播放| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 国产精品,欧美在线| 免费看av在线观看网站| 国产免费一级a男人的天堂| 欧美zozozo另类| 看黄色毛片网站| 日韩欧美三级三区| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美一区二区精品小视频在线| 欧美黑人巨大hd| av在线亚洲专区| 国产亚洲91精品色在线| 内地一区二区视频在线| 男人舔奶头视频| 国产淫片久久久久久久久| 精品福利观看| 极品教师在线免费播放| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产主播在线观看一区二区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国内精品美女久久久久久| 99国产精品一区二区蜜桃av| 色综合婷婷激情| 亚洲自偷自拍三级| 亚洲图色成人| 午夜影院日韩av| 国产精品一区www在线观看 | 91在线精品国自产拍蜜月| 成人精品一区二区免费| 深夜精品福利| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产一区二区三区av在线 | 国产精品综合久久久久久久免费| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 色综合站精品国产| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| a在线观看视频网站| 99久久九九国产精品国产免费| 极品教师在线免费播放| av专区在线播放| 国产精品一及| 欧美国产日韩亚洲一区| www日本黄色视频网| 成年免费大片在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久久色成人| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 日本 欧美在线| 又黄又爽又免费观看的视频| 深爱激情五月婷婷| 看黄色毛片网站| 国产一区二区激情短视频| 亚洲av成人精品一区久久| 日韩欧美三级三区| 午夜久久久久精精品| 日韩精品有码人妻一区| 久久久国产成人精品二区| 久久精品人妻少妇| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲成人免费电影在线观看| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲,欧美,日韩| 听说在线观看完整版免费高清| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲av成人av| 黄色欧美视频在线观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲第一电影网av| 一区福利在线观看| 精品日产1卡2卡| 欧美日韩精品成人综合77777| 免费看av在线观看网站| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 无人区码免费观看不卡| 精品人妻偷拍中文字幕| 99在线视频只有这里精品首页| 国产极品精品免费视频能看的| 99riav亚洲国产免费| 麻豆成人av在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 国产视频一区二区在线看| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 能在线免费观看的黄片| 亚洲 国产 在线| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 日韩欧美精品v在线| 91麻豆av在线| 亚洲欧美日韩无卡精品| 校园春色视频在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产精品av视频在线免费观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 丰满的人妻完整版| 欧美高清性xxxxhd video| 国产主播在线观看一区二区| 久久精品国产亚洲av天美| 久久精品国产清高在天天线| 欧美一级a爱片免费观看看| 99热只有精品国产| 黄色欧美视频在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 窝窝影院91人妻| 淫秽高清视频在线观看| 国产精品不卡视频一区二区| av在线天堂中文字幕| 欧美日韩国产亚洲二区| 欧美日韩乱码在线| 亚洲欧美日韩东京热| 啪啪无遮挡十八禁网站| 小说图片视频综合网站| 国产精华一区二区三区| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 男人舔奶头视频| 最新在线观看一区二区三区| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 欧美另类亚洲清纯唯美| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲天堂国产精品一区在线|