不育癥男性精子DNA損傷與精液參數(shù)相關(guān)性分析

楊乙 劉秀菊 李琦等

【摘要】 目的 探討不育癥男性精子DNA損傷與精液參數(shù)的相關(guān)性。方法 選取359例男性不育癥患者作為研究對象， 檢測其精子DNA損傷指數(shù)及精液參數(shù)， 按照DNA碎片指數(shù)（DFI）分為Ⅰ組（DFI≤15%， 176例）、Ⅱ組（15%0.05）;Ⅰ組精子總活力、精子前向運動率分別為（55.1±13.6）%、（58.6±17.2）%， Ⅱ組精子總活力、精子前向運動率分別為（51.5±12.0）%、（53.1±15.7）%， Ⅲ組精子總活力、精子前向運動率分別為（47.7±11.3）%、（48.7±11.3）%;Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組組間精子總活力和精子前向運動率比較， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。精子總活力和精子前向運動率與DFI呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 檢測精子DNA損傷指數(shù)有助于臨床醫(yī)生對男性生育能力的評估。

【關(guān)鍵詞】 不育癥;精子DNA損傷指數(shù);精子濃度;精子活動率;精子前向運動率

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.02.034

男性不育癥是夫妻不孕不育的重要因素之一。精液常規(guī)分析是評估男性生育能力的基本檢測方法， 包括精子濃度、精液體積、pH、精子存活率、精子總活力、精子前向運動率等參數(shù)， 但精液常規(guī)分析有一定的局限性， 同一個體不同時間的各參數(shù)差異較大， 而且約有15%男性精液常規(guī)分析結(jié)果正常仍不育[1， 2]。精子DNA損傷檢測從細(xì)胞和分子遺傳層面分析精子DNA及其在受精過程、胚胎發(fā)育等方面的作用， 是目前生殖醫(yī)學(xué)的研究熱點[3]。本文分析了精子DNA損傷與精液常規(guī)參數(shù)的相關(guān)性， 旨在研究精子DNA損傷在評估男性生育能力的應(yīng)用價值。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 回顧性分析2016年1月～2017年5月在本院生殖健康科就診的359例男性不育癥患者的臨床資料， 患者年齡25～48歲， 均無遺傳性疾病家族史和性功能障礙史， 其他檢查均未見異常。對359例患者檢測其精子DNA損傷指數(shù)及精子參數(shù)， 按照DFI進(jìn)行分組， 分為Ⅰ組（DFI≤15%， 176例）、Ⅱ組（15%

1. 2 方法

1. 2. 1 精液標(biāo)本采集及常規(guī)分析 按照WHO《人類精液及精子宮頸粘液相互作用實驗室檢驗手冊》（第5版）規(guī)定， 研究對象應(yīng)禁欲2～7 d， 手淫取全部精液于干凈容器中， 立即保溫送檢， 于37℃溫育至液化后檢測。使用清華同方精子動靜態(tài)圖像檢測系統(tǒng)進(jìn)行精液常規(guī)分析。

1. 2. 2 精子DNA損傷檢測 精子DNA損傷使用深圳華康生物有限公司生產(chǎn)的試劑盒， 采用精子染色質(zhì)擴(kuò)散法進(jìn)行檢測。具體方法參照試劑盒說明書。精子DNA判斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)暈環(huán)（b）與精子頭部橫徑（a）比例， 分為大、中、小、無暈環(huán)和退化5個等級。其中， b/a≥2/3為大暈環(huán);b/a >1/4且b/a≤2/3為中暈環(huán);b/a≤1/4小暈環(huán);觀察不到暈環(huán)的精子為無暈環(huán);觀察不到暈環(huán)且精子核區(qū)染色較淺的精子為退化。大暈環(huán)和中暈環(huán)表示精子核DNA完整， 小暈環(huán)、無暈環(huán)和退化表示精子核DNA損傷。高倍鏡觀察400個精子， 計算存在DNA損傷的精子數(shù)量。DFI=（存在DNA損傷的精子數(shù)量/計數(shù)的精子總數(shù)） ×100%。

1. 3 觀察指標(biāo) 比較三組患者的精子濃度、精子活動率和精子前向運動率， 分析DFI與各精液參數(shù)的相關(guān)性。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗;相關(guān)性采用Pearson回歸分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 三組精液常規(guī)參數(shù)比較 Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組組間精子濃度比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;Ⅰ組精子總活力、精子前向運動率分別為（55.1±13.6）%、（58.6±17.2）%， Ⅱ組精子總活力、精子前向運動率分別為（51.5±12.0）%、（53.1±15.7）%， Ⅲ組精子總活力、精子前向運動率分別為（47.7±11.3）%、（48.7±11.3）%;Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組組間精子總活力和精子前向運動率比較， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。2. 2 DFI與各精液參數(shù)相關(guān)性分析 精子總活力和精子前向運動率與DFI呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。見表2。

3 討論

精子DNA是父方遺傳信息的載體， 其完整性決定遺傳物質(zhì)能否正確傳遞給子代， 精子DNA損傷會影響人類的自然受孕能力和胚胎發(fā)育能力。過量的生物活性氧類物質(zhì)、精子發(fā)育過程中的染色質(zhì)組裝異常、細(xì)胞的異常凋亡均可造成精子DNA損傷。也有研究表明， 空氣污染、吸煙都會導(dǎo)致精子細(xì)胞異常凋亡和DNA損傷[4， 5]。針對不同的損傷機(jī)制， 其檢測方法也多種多樣， 常見的檢測方法有“彗星”實驗（comet assay）、精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析試驗（SCSA）、精子染色質(zhì)擴(kuò)散試驗（SCD）、末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP末端標(biāo)記法（TUNEL）等[6]。本研究采用精子染色質(zhì)擴(kuò)散法。近年來， 精子DNA損傷的研究是生殖醫(yī)學(xué)的熱點之一。眾研究表明， 精子DNA損傷與精液量、精子總數(shù)、精子濃度、精子形態(tài)、精子活動率、精子前向運動率、男性年齡、禁欲天數(shù)等因素均有一定的相關(guān)性。本次研究結(jié)果顯示， Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組組間精子濃度比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;Ⅰ組精子總活力、精子前向運動率分別為（55.1±13.6）%、（58.6±17.2）%， Ⅱ組精子總活力、精子前向運動率分別為（51.5±12.0）%、（53.1±15.7）%， Ⅲ組精子總活力、精子前向運動率分別為（47.7±11.3）%、（48.7±11.3）%;Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組組間精子總活力和精子前向運動率比較， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這與季興哲等[7]、范烺[8]和麥選誠等[9]研究結(jié)果一致。此外， 本研究中， 精子總活力和精子前向運動率與DFI呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。精子的運動主要由精子頭部控制， 受鞭毛擺動方式的影響， 形成直線或曲線運動。精子線粒體為精子運動提供能量， 調(diào)節(jié)精子運動。精子DNA損傷可導(dǎo)致精子線粒體功能及結(jié)構(gòu)的異常， 導(dǎo)致精子活動能力的下降。李非凡等[10]也認(rèn)為精子濃度與DFI值無明顯關(guān)系， 而精液量、精子總活力、精子活動率和精子前向運動率、精子總數(shù)和DFI有明顯關(guān)系（r=0.078、-0.447、-0.444、0.069， P<0.05）。綜上所述， 精子DNA損傷與精子總活力、精子前向運動率有一定的相關(guān)性， 對受孕能力和胚胎發(fā)育均有影響。研究精子DNA損傷對于男性的生育能力的評估有重要作用。

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[8] 范烺. 237例意向生育二孩男性精液常規(guī)與精子DNA損傷的相關(guān)性分析. 生殖醫(yī)學(xué)雜志， 2007， 26（8）：831-834.

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[10] 李非凡， 楊昊， 肖佳云， 等. 精子DNA碎片指數(shù)與精液參數(shù)相關(guān)性的初步研究. 中國男科學(xué)雜志， 2018， 32（1）：33-36.

[收稿日期：2018-10-11]