• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    釀酒葡萄新品系‘黑珍珠’果實品質(zhì)分析

    2019-07-01 07:50:22彭文婷王雯染楊航宇陳為凱
    食品科學 2019年11期
    關鍵詞:游離態(tài)黑珍珠花色

    彭文婷,王雯染,楊航宇,陳為凱,楊 哲,何 非,王 軍,*

    (1.中國農(nóng)業(yè)大學食品科學與營養(yǎng)工程學院,葡萄與葡萄酒研究中心,北京 100083;2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部葡萄酒加工重點實驗室,北京 100083)

    ‘黑珍珠’(Pearl Noir,暫定名)是杜喜山在2008年于‘貝達’砧木園中發(fā)現(xiàn)的植物學性狀明顯區(qū)別于‘貝達’的葡萄新品系(代號為DXS-08),其親本信息未知。該品系早熟、抗病性強,其單品種葡萄酒顏色深。

    釀酒葡萄果實的品質(zhì)(包括漿果質(zhì)量、體積、糖和酸的質(zhì)量分數(shù)等)在很大程度上決定了葡萄酒的質(zhì)量。而酚類物質(zhì)與葡萄酒的色澤、澄清度、風味直接相關,花色苷作為葡萄果實中普遍存在的類黃酮化合物之一,能夠為葡萄及葡萄酒提供輕微的澀味,而且還能與一些香氣化合物相互作用。花色苷由具有C6-C3-C6骨架的類黃酮花色素和糖配體組成[1],其中B環(huán)上R1和R2的取代基不同,則所形成的花色素不同,各類花色苷會呈現(xiàn)不同色調(diào),這對葡萄和葡萄酒的顏色起到至關重要的作用[2]。比較常見的花色素有花葵素、花青素、花翠素、甲基花青素、甲基花翠素和二甲基花翠素。研究發(fā)現(xiàn),歐亞種葡萄(Vitis vinifera)一般都只含有單糖苷化的花青素、花翠素、甲基花青素、甲基花翠素和二甲基花翠素的3-葡萄糖苷、3-乙酰化葡萄糖苷、3-p-香豆酰葡萄糖苷和3-p-咖啡?;咸烟擒昭苌?,其中二甲基花翠素類花色苷含量較高,一般不含有花葵素類花色苷[3]。葡萄果實作為葡萄酒香氣的重要來源之一,對葡萄酒的品種典型性和產(chǎn)地風格起決定性作用。在葡萄果實中,香氣物質(zhì)以游離態(tài)和糖苷結(jié)合態(tài)兩種形式存在。游離態(tài)的香氣物質(zhì)能揮發(fā)從而被人感知,對構(gòu)成葡萄果實和葡萄酒香氣有重要的作用;而糖苷結(jié)合態(tài)香氣物質(zhì)是沒有氣味、不揮發(fā)的香氣前體物,但在葡萄酒的釀造過程中能經(jīng)過酶促或非酶促反應將其變成相應的游離態(tài)物質(zhì)進而影響葡萄酒的香氣[4]。簡單序列重復(simple sequence repeats,SSR)由于具有含量豐富、多態(tài)性高、共顯性遺傳、技術(shù)操作簡單等特點,被廣泛應用于葡萄品種的鑒定、親緣關系及起源分析和遺傳圖譜的構(gòu)建中。SSR廣泛分布于整個植物基因組內(nèi),表現(xiàn)出豐富的多態(tài)性,且親緣關系越近,SSR片段長度差異越小,因此SSR標記可應用于親緣關系分析。

    為了研究‘黑珍珠’葡萄果實的釀酒特性,探究其親本信息,本實驗利用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(high performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS)和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(gas chromatographymass spectrometer,GC-MS)技術(shù)分析‘黑珍珠’葡萄果實的果皮花色苷和香氣化合物的組成及含量,并利用SSR標記分析其遺傳信息,以期為‘黑珍珠’作為調(diào)色品種的進一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    ‘黑珍珠’葡萄果實于2015年采自北京市大興區(qū)采育鎮(zhèn)‘喜山葡萄合作社’(39°39′ N、116°42′ E),葡萄園栽植密度為2.5 m×1.0 m,葉幕形為改良的垂直葉幕形[5],南北行向,留梢量為12~15 支/延長米(行)。在葡萄采收期,隨機采集葡萄果穗的頂端、中間和底部的各2~3 粒漿果,每次重復采集300 粒漿果,重復3 次,裝入冰盒運回實驗室。運回實驗室的葡萄漿果液氮速凍后保存于-40 ℃冰箱中,用于理化指標、花色苷和香氣化合物分析。采集5~10 片生長良好的幼葉裝入冰盒中運回實驗室,液氮速凍后置于-80 ℃冰箱中保存,用于基因組DNA提取。同時,在中國農(nóng)業(yè)大學上莊實驗站葡萄資源圃(40°08′ N、116°10′ E)采集‘貝達’、‘Kolor’和‘煙73’的幼葉5~10 片,作為參考品種,用于SSR指紋分析。

    氫氧化鈉(分析純)、鄰苯二甲酸氫鉀(分析純)北京化工廠;酚酞 天津市科密歐化學試劑有限公司;花色苷標準品、二甲花翠素-3-O-葡萄糖苷 美國Sigma公司;乙腈、甲酸和甲醇(均為色譜純) 美國Thermo Fisher公司。

    1.2 儀器與設備

    PAL-1手持糖度計 日本Atago公司;PB-10 pH計德國Sartorius公司;FD-1C-50冷凍干燥機 北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司;RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠;SHK-99-II臺式空氣恒溫搖床 北京北方同正生物技術(shù)發(fā)展有限公司;GL-20G-Ⅱ離心機 上海安亭科學儀器廠;1100系列配有二極管陣列檢測器的LC/MSD Trap-VL HPLC-離子阱MS儀、1200系列LC/MSD Trap-VL HPLC-三重四極桿MS儀、6890 GC儀、5975 MS儀 美國Agilent公司;Prime G02聚合酶鏈式反應(polymeras chain reaction,PCR)儀 英國Bibby Scientific公司。

    1.3 方法

    1.3.1 ‘黑珍珠’植物學性狀和果實性狀觀測

    根據(jù)國際葡萄與葡萄酒組織(International Organisation of Vine and Wine,OIV)標準,對新梢、幼葉、成齡葉和果實的部分性狀進行描述[6-7]。取10 片成齡葉分別測量主脈長(即葉長)、葉寬、葉緣鋸齒長、葉緣鋸齒寬和葉柄長,并計算成齡葉的長寬比和鋸齒的長寬比。隨機取10 個果穗,分別稱量其質(zhì)量并計算果穗平均質(zhì)量。取100 粒漿果稱質(zhì)量,解凍24 h后破碎取汁,取上清液用于pH值、可溶性固形物含量以及可滴定酸質(zhì)量濃度的測定。pH值用pH計測定,果汁可溶性固形物含量用手持糖度儀測定[8],果汁可滴定酸質(zhì)量濃度用NaOH滴定法測定[9],并以每升葡萄酒中酒石酸質(zhì)量計。

    1.3.2 ‘黑珍珠’葡萄果皮花色苷提取和測定

    花色苷提取參照He Jianjun等[10]的方法,準確稱取0.499 5~0.500 5 g冷凍干燥后的葡萄果皮粉,加入含體積分數(shù)2%甲酸的甲醇溶液10 mL,溶液在室溫下避光超聲10 min,在搖床萃取30 min(25 ℃下140 r/min避光)后,4 ℃下8 000 r/min離心10 min,將上清液轉(zhuǎn)移至100 mL圓底燒瓶中,以上步驟重復提取5 次后,合并上清液至燒瓶中。上清液于25 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,用花色苷定容劑(體積分數(shù)2%(后同)甲酸、10.8%乙腈水溶液)定容至10 mL后,0.22 μm水系膜過濾,用于HPLC-MS檢測,每個樣品重復提取2 次?;ㄉ蘸扛鶕?jù)二甲花翠素標準曲線進行半定量,表示為mg/kg mf。

    HPLC-MS條件:使用帶有二極管陣列檢測器的1100 LC/MSD Trap-VL HPLC-離子阱MS,色譜柱為Kromasil 100-5-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),柱溫為50 ℃,進樣量為30 μL,檢測波長為525 nm,流速為1 mL/min。流動相A:V(水)∶V(甲酸)∶V(乙腈)=92∶2∶6;流動相B:V(水)∶V(甲酸)∶V(乙腈)=44∶2∶54。洗脫程序:0~1 min,0~10% B;1~18 min,10%~25% B;18~20 min,25% B;20~30 min,25%~40% B;30~35 min,40%~70% B;35~40 min,70%~100% B。離子阱MS檢測器的采集參數(shù)為電噴霧離子源,正離子模式,離子掃描范圍為m/z 100~1 500,霧化器壓力為207 kPa,干燥氣流速為10 L/min,干燥氣溫度為325 ℃。

    1.3.3 ‘黑珍珠’葡萄香氣化合物的提取和測定

    取保存于低溫(-40 ℃)冰箱的葡萄果實50 g,去除果柄和種子,依次加入抑制內(nèi)源糖苷酶活性的0.5 g D-葡萄糖酸內(nèi)酯和1 g交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮(防止氧化),并且破碎至粉末狀;在4 ℃條件下靜置浸漬 4 h;在4 ℃、12 000 r/min條件下離心10 min,并且收集上層澄清葡萄汁,參照Lan Yibin等[11]的頂空固相微萃?。╤ead space-solid phase microextraction,HS-SPME)條件萃取游離態(tài)香氣物質(zhì)。

    結(jié)合態(tài)香氣物質(zhì)的提取參照Lan Yibin等[11]的方法:在活化后的SPME柱中加入2 mL葡萄汁,然后依次加入2 mL能夠去除低分子質(zhì)量糖、酸等極性化合物的水和5 mL去除游離態(tài)非極性香味化合物的二氯甲烷,最后糖苷態(tài)香氣物質(zhì)用20 mL甲醇溶液洗脫。收集洗脫后的甲醇溶液,在30 ℃真空條件下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干,使用含0.1 g糖苷酶AR2000 的檸檬酸/磷酸氫二鉀緩沖液(0.2 mol/L、pH 5)10 mL重新溶解,隨后轉(zhuǎn)移至密閉離心管,37 ℃恒溫酶解16 h,每個樣品重復提取2 次。釋放的結(jié)合態(tài)香氣物質(zhì)經(jīng)HS-SPME后進樣至GC-MS檢測。

    HS-SPME條件:CTC CombiPAL自動進樣器自動萃取樣品中香氣化合物,自動進樣器配備2 cm聚二甲基硅氧烷/碳篩/二乙烯苯萃取頭,萃取頭使用前先在250 ℃條件下活化60 min。稱取1.0 g NaCl放入15 mL進樣小瓶,加入5 mL葡萄汁或糖苷水解液和10 μL作為內(nèi)標的4-甲基-2-戊醇(1.038 8 g/L),迅速將進樣小瓶用帶有聚四氟乙烯隔墊的蓋子密封。樣品瓶在加熱攪拌設備中在40 ℃條件下加熱攪拌30 min,然后將萃取頭插入樣品瓶頂空部分,40 ℃繼續(xù)加熱攪拌30 min,加熱攪拌設備的轉(zhuǎn)速為500 r/min。萃取頭在GC進樣口(250 ℃)解吸8 min完成進樣。

    GC-MS條件參考Wu Yuwen等[12]的方法。香氣化合物定性采用自動解卷積技術(shù)對GC-MS全掃描數(shù)據(jù)文件進行解卷積分析,根據(jù)各物質(zhì)的保留時間以及C7~C24正構(gòu)烷烴在相同GC條件下的保留時間計算其相應的保留指數(shù),與標準品保留指數(shù)、MS譜圖以及NIST Chemical WebBook中收錄的極性柱條件下所測保留指數(shù)比較,差值絕對值小于50的組分可定性為該化合物。定量方法參考Wu Yuwen等[12]的方法,利用標準品香氣物質(zhì)在模擬葡萄汁溶液中的標準曲線對已有標準品的物質(zhì)定量;利用化學結(jié)構(gòu)和官能團相似、碳原子數(shù)相近的標準品的標準曲線對沒有標準品的物質(zhì)進行半定量。樣品及標準曲線均通過相同濃度的4-甲基-2-戊醇作為內(nèi)標對儀器的響應狀態(tài)進行校正。香氣物質(zhì)的含量表示為μg/kg mf。

    1.3.4 ‘黑珍珠’SSR指紋分析

    葡萄葉片樣品基因組DNA提取采用王軍等[13]改良的十六烷基三甲基溴化銨法。選用6 對(VVS2、VVMD5、VVMD7、VVMD27、Vrzag62、Vrzag79)葡萄種植資源數(shù)據(jù)庫(http://www.vitis-vea.de/)提供的引物用于SSR擴增,引物序列見表1。PCR體系為20 μL,包括2 μL 10×PCR buffer、1 U Taq酶、0.2 mmol/L dNTP、1.5 mmol/L Mg2+、0.4 μmol/L引物、DNA模板50 ng,其余為dd H2O。PCR擴增程序為:94 ℃預變性5 min;94 ℃變性30 s,50~60 ℃退火30 s,72 ℃延伸40 s,35 個循環(huán);72 ℃延伸10 min。相同模板重復擴增兩次,以保證結(jié)果的準確性。擴增后產(chǎn)物送至蘇州金唯智生物科技有限公司進行毛細管電泳,利用Genemapper V3.2軟件進行條帶分析,確定每個位點的片段長度。

    表1 6 對SSR引物序列、退火溫度和目標片段長度Table 1 Six pairs of SSR primer sequence, annealing temperature and target size

    1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

    實驗結(jié)果測定3 次,使用Excel 2010、SPSS 19.0和Origin 8.0軟件進行數(shù)據(jù)處理和作圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 ‘黑珍珠’的植物形態(tài)學與果實性狀

    ‘黑珍珠’嫩梢為淺綠色,稍尖絨毛著色極淺,幼葉為綠色,上表皮顏色為淺紅棕色(圖1)。成齡葉為綠色,近五角形,全緣。葉表面有光澤,微具泡狀突起,葉背光滑無絨毛。主脈無花青素著色。葉緣鋸齒雙側(cè)直,葉柄洼半開張,呈V形。葉長11.23 cm、寬13.58 cm、長寬比0.83。鋸齒長1.25 cm、寬1.73 cm、長寬比為0.72、葉柄長5.67 cm。‘黑珍珠’果穗上所有漿果成熟度相對一致,果穗緊、呈圓錐形、有歧肩,每新稍果穗數(shù)為1.73。漿果呈圓形,果皮為紫黑色(圖1)。植株形態(tài)學和果實性狀描述如表2所示。

    圖1 ‘黑珍珠’葡萄嫩稍、典型果穗和成熟葉片F(xiàn)ig. 1 Shoot, typical cluster and ripening leaves of ‘Pearl Noir’ grapes

    表2 ‘黑珍珠’植株形態(tài)學和果實性狀描述Table 2 Descriptive morphological and biological traits of‘Pearl Noir’ grapes

    2.2 ‘黑珍珠’的果實品質(zhì)分析

    釀酒葡萄理化指標是決定葡萄酒品質(zhì)的關鍵因素[14],其最適的可溶性固形物含量因酒類型的要求而異,一般為20~25 °Brix[15]。pH值是與酸密切相關的一個指標,成熟期適宜的葡萄其果汁pH值應在3.00~3.60之間[15]。可滴定酸質(zhì)量濃度能夠反映溶液中H+的總量,其在6.5~8.5 g/L被認為是生產(chǎn)協(xié)調(diào)性好的葡萄酒的最佳質(zhì)量濃度[16]?!谡渲椤咸阎奶撬岜葹?0.10±0.11,葡萄品質(zhì)較好?!谡渲椤咸阎目扇苄怨绦挝锖?、pH值均在適宜的釀酒葡萄理化指標要求范圍內(nèi),而可滴定酸質(zhì)量濃度偏高(表3)。其單品種酒顏色深,同時期顏色明顯優(yōu)于‘美樂’與‘赤霞珠’等釀造的葡萄酒,適合用于顏色較淺葡萄酒的調(diào)色[17-18]。

    表3 ‘黑珍珠’葡萄果實理化指標Table 3 Physiochemical parameters of ‘Pearl Noir’ grapes

    2.3 ‘黑珍珠’葡萄果皮中花色苷組成分析

    花色苷組成及其含量是評價葡萄品質(zhì)的一個重要指標[1],而且‘黑珍珠’葡萄果皮顏色較深,花色苷含量較高。在‘黑珍珠’葡萄果皮中共檢測到14 種花色苷(表4),其中花色素雙葡萄糖苷9 種,分別是二甲花翠素-3,5-雙葡萄糖苷、甲基花翠素-3,5-雙葡萄糖苷、花翠素-3,5-雙葡萄糖苷、花翠素-3-乙?;咸烟擒?5-葡萄糖苷、甲基花青素-3,5-雙葡萄糖苷、花翠素-3-香豆?;咸烟擒?5-葡萄糖苷、二甲花翠素-3-乙?;咸烟擒?5-葡萄糖苷、二甲花翠素-3-香豆酰化葡萄糖苷-5-葡萄糖苷、甲基花翠素-3-香豆?;咸烟擒?5-葡萄糖苷。這9 種花色素雙葡萄糖苷的含量依次降低?!谡渲椤咸压ぶ袡z測到5 種花色素單葡萄糖苷,分別是花翠素-3-香豆?;咸烟擒铡⒓谆ù渌?3-葡萄糖苷、二甲花翠素-3-葡萄糖苷、二甲花翠素-3-香豆?;咸烟擒?、甲基花翠素-3-香豆?;咸烟擒??!谡渲椤咸压ぶ械?4 種花色苷按化學結(jié)構(gòu)可以分為二甲花翠素衍生物(5 種)、花翠素衍生物(3 種)、甲基花翠素衍生物(5 種)、甲基花青素衍生物(1 種),其中不含有花青素衍生物?!谡渲椤咸训幕ㄉ找远谆ù渌匮苌锏暮孔罡?,占花色苷總量的52.7%,其中以二甲花翠素-3,5-雙葡萄糖苷的含量最高,其次是甲基花翠素-3-葡萄糖苷?;ù渌?、甲基花翠素和甲基花青素分別占花色苷總量的17.7%、25.9%、3.6%(圖2),而甲基花青素衍生物只以雙葡萄糖苷形式存在。

    表4 ‘黑珍珠’葡萄果皮花色苷組成和含量Table 4 Profile and content of anthocyanins in the skin of‘Pearl Noir’ grapes

    研究表明,單糖苷化的花青素、花翠素、甲基花翠素、甲基花青素和二甲花翠素的3-葡萄糖苷衍生物是歐亞種葡萄(Vitis vinifera)常見的花色苷種類[19-24],花色苷的主要成分是二甲花翠素-3-葡萄糖苷。而含有花色素雙糖苷是非歐亞種葡萄的重要特征,有報道稱非歐亞種葡萄花色苷的主要成分是二甲花翠素-3,5-雙葡萄糖苷[25]。典型的非歐亞種葡萄如中國野生葡萄種均含有花色素雙糖苷[26],圓葉葡萄(Vitis rotundifolia)既含有花色素單葡萄糖苷也含有雙葡萄糖苷,但其種類和含量均較花色素雙葡萄糖苷少,少數(shù)圓葉葡萄可能不含有單葡萄糖苷[27]。在本研究中,‘黑珍珠’葡萄果皮的花色苷組成均是非歐亞種葡萄中常見的花色苷,主要以雙糖苷為主。此外,‘黑珍珠’葡萄果皮花色苷含量明顯高于‘赤霞珠’(526.93 mg/kg mf)和‘美樂’(277.33 mg/kg mf)等歐亞種葡萄[28]。因此,推測‘黑珍珠’葡萄含有非歐亞種葡萄的血緣?!谡渲椤ㄉ蘸扛撸c‘煙73’和‘紫北塞’等染色葡萄不同[10,29-30],‘黑珍珠’主要以雙糖苷為主,而‘煙73’和‘紫北塞’的花色苷主要為單糖苷,僅存在一種雙糖苷,故而‘黑珍珠’可能不是染色葡萄。

    圖2 各類花色苷組成比例Fig. 2 Percentages of different types of anthocyanins

    2.4 ‘黑珍珠’葡萄果實中香氣成分分析

    ‘黑珍珠’葡萄果實中共檢測到123 種香氣化合物,這些香氣化合物根據(jù)化學結(jié)構(gòu)可分為C6/C9類(13 種)、醇類(40 種)、羰基化合物(16 種)、酸類(3 種)、揮發(fā)酚類(5 種)、酯類(5 種)、降異戊二烯類(12 種)、苯類(14 種)、萜烯(13 種)(表5)。

    表5 ‘黑珍珠’葡萄果實中香氣物質(zhì)組成及含量Table 5 Volatile aroma composition of ‘Pearl Noir’ grapes

    續(xù)表5

    續(xù)表5

    揮發(fā)性香氣成分在葡萄風味物質(zhì)中有舉足輕重的地位,種類繁多。這些成分的種類、含量、感覺閾值及相互作用決定著葡萄的風味,同時也決定著所釀葡萄酒的風味和典型性?!谡渲椤咸压麑嵵泄矙z測到93 種游離態(tài)揮發(fā)性香氣化合物,其中C6/C9類是第一大類游離態(tài)香氣化合物,占游離態(tài)揮發(fā)性香氣物質(zhì)總量的66.85%,其中己醛、(E)-2-己烯醛的含量較高,這兩種化合物決定了‘黑珍珠’葡萄果實游離態(tài)C6/C9類香氣物質(zhì)的含量,也對‘黑珍珠’葡萄果實總游離態(tài)揮發(fā)性香氣化合物起決定的作用。C6/C9類化合物能夠提供青草香,對酒的香氣有重要的作用。醇類是第二大類游離態(tài)香氣化合物,占總游離態(tài)揮發(fā)性香氣化合物的15.95%,其中苯乙醇、苯甲醇的含量較高,而酯類、酸類、揮發(fā)酚類以及其他含量低,所占比例在0.049 7%~4.07%之間。

    ‘黑珍珠’葡萄果實中共檢測到81 種結(jié)合態(tài)揮發(fā)性香氣化合物,醇類是最主要的結(jié)合態(tài)香氣化合物,占總結(jié)合態(tài)揮發(fā)性香氣化合物的38.44%,其中苯乙醇、苯甲醇、1-苯乙醇的含量較高,占結(jié)合態(tài)醇類香氣化合物的68.09%,并且醇類的結(jié)合態(tài)香氣化合物多達34 種。羰基化合物是第二大類結(jié)合態(tài)揮發(fā)性化合物,其中3,4-二甲基-苯甲醛、癸醛的含量占羰基化合物的81.75%,而酯類、萜烯的含量低,所占比例在0.49%~0.70%之間。

    由此可以看出,己醛和(E)-2-己烯醛在游離態(tài)的香氣物質(zhì)中含量較高,決定了‘黑珍珠’葡萄青草味濃重,苯甲醇、苯乙醇含量也為葡萄果實提供了花香的氣味。結(jié)合態(tài)香氣物質(zhì)中,苯乙醇和己烯醛含量較高,也賦予葡萄花香和青草味。

    2.5 ‘黑珍珠’的SSR指紋分析

    表6 6 對SSR引物對‘貝達’、‘煙73’、‘Kolor’和‘黑珍珠’的擴增結(jié)果Table 6 Amplification results of ‘Beta’, ‘Yan 73’, ‘Kolor’ and‘Pearl Noir’ with 6 different pairs of SSR primers

    檢索發(fā)現(xiàn),未知親本信息的葡萄新品系‘黑珍珠’的SSR指紋不存在于葡萄標準數(shù)據(jù)庫中(http://www.vitisvea.de/)。比較SSR指紋發(fā)現(xiàn),‘黑珍珠’和‘貝達’在引物VVS2、VVMD7和Vrzag79各有一個等位基因相同,‘黑珍珠’與‘煙73’在引物VVS2和Vrzag79各有一個等位基因相同,‘黑珍珠’與‘Kolor’在引物VVMD7有一個等位基因相同(表6)。雜交后代在每個SSR位點的兩個等位基因一個來自父本,而另一個來自母本[31-34]。因為本實驗用于SSR標記的葡萄品種較少,根據(jù)6 對SSR引物的擴增的結(jié)果尚不能確定‘黑珍珠’的親本信息,其親本信息有待進一步研究。

    3 結(jié) 論

    有研究表明,葡萄花色苷的組成及比例受到許多因素的影響,而遺傳因素是影響葡萄品種花色苷組成的決定性因素,特定的品種花色苷組成穩(wěn)定,決定其品種的顏色[35],而有無花色素雙糖苷是區(qū)別歐亞種葡萄與其他種葡萄的重要特征[36]?!谡渲椤咸压ぷ虾谏ㄉ蘸控S富,且以雙葡萄糖苷為主,占花色苷總量的71.2%,推測其含有非歐亞種葡萄的血緣?!谡渲椤咸严銡饣衔锝M成復雜,這些香氣化合物以游離態(tài)與糖苷結(jié)合態(tài)形式存在,共檢測到123 種揮發(fā)性香氣化合物,主要以游離態(tài)為主。由于供試品種較少,本研究并未找到其親本。因為‘黑珍珠’葡萄果皮花色苷的種類與含量豐富,且單品種酒顏色深,未來可以作為釀造具有地區(qū)特色的紅葡萄酒的新品種或調(diào)色新品種。

    猜你喜歡
    游離態(tài)黑珍珠花色
    金屬及其化合物知識答疑
    中學化學(2024年5期)2024-07-08 09:24:57
    游離植物甾醇研發(fā)創(chuàng)新管理應用
    環(huán)山抱湖
    寶藏(2021年5期)2021-06-14 13:50:36
    猜猜這是哪張牌?
    農(nóng)村初中數(shù)學建構(gòu)式生態(tài)課堂中“游離態(tài)”學生成因及對策
    穩(wěn)定傳輸4K/60p/12bit高規(guī)格畫面 Palic(柏力)黑珍珠1000
    黑珍珠
    黑珍珠
    哪種花色是王牌
    初夏花色
    精品一区二区三区视频在线观看免费 | 亚洲专区字幕在线| 久久亚洲真实| 精品乱码久久久久久99久播| 麻豆成人av在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产片内射在线| 天堂影院成人在线观看| 欧美中文综合在线视频| 久久久久国内视频| 国产成年人精品一区二区 | 天堂中文最新版在线下载| av欧美777| 国产视频一区二区在线看| 黄色丝袜av网址大全| 电影成人av| 在线免费观看的www视频| 久久婷婷成人综合色麻豆| 中文字幕高清在线视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲黑人精品在线| 日本 av在线| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| av在线播放免费不卡| 超碰成人久久| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产色视频综合| 国产一区二区三区综合在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 日韩国内少妇激情av| 大码成人一级视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 欧美日韩亚洲高清精品| 咕卡用的链子| 夫妻午夜视频| 两性夫妻黄色片| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美av亚洲av综合av国产av| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲情色 制服丝袜| 99香蕉大伊视频| 51午夜福利影视在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产成人av教育| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲视频免费观看视频| ponron亚洲| 亚洲一区中文字幕在线| 中文字幕最新亚洲高清| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产成人精品无人区| 宅男免费午夜| 婷婷精品国产亚洲av在线| www日本在线高清视频| 欧美久久黑人一区二区| 美女 人体艺术 gogo| 极品教师在线免费播放| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 在线天堂中文资源库| 丁香欧美五月| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产99久久九九免费精品| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲精华国产精华精| 美女高潮到喷水免费观看| 美女大奶头视频| 亚洲成人久久性| 欧美激情久久久久久爽电影 | 99热国产这里只有精品6| 国产av精品麻豆| 亚洲av成人av| 97碰自拍视频| 欧美日韩精品网址| 怎么达到女性高潮| 国产单亲对白刺激| 日韩有码中文字幕| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 欧美在线黄色| 色哟哟哟哟哟哟| 香蕉久久夜色| 两个人看的免费小视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 久久久国产精品麻豆| av视频免费观看在线观看| 好男人电影高清在线观看| 老司机在亚洲福利影院| 窝窝影院91人妻| 正在播放国产对白刺激| 三级毛片av免费| 后天国语完整版免费观看| 大型av网站在线播放| 久久香蕉国产精品| 亚洲成人国产一区在线观看| 午夜影院日韩av| 久久人人97超碰香蕉20202| 9热在线视频观看99| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 精品一区二区三区av网在线观看| 精品日产1卡2卡| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 男女之事视频高清在线观看| 免费高清视频大片| avwww免费| 嫩草影视91久久| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 一本大道久久a久久精品| 免费在线观看日本一区| 国产精品 欧美亚洲| 99久久精品国产亚洲精品| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产成人精品无人区| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 成年人免费黄色播放视频| 国产成年人精品一区二区 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 电影成人av| 日本a在线网址| 视频区欧美日本亚洲| 99精品欧美一区二区三区四区| 一a级毛片在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 自线自在国产av| 不卡一级毛片| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 超碰成人久久| 亚洲国产欧美网| 麻豆一二三区av精品| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| www.精华液| 久久久国产成人精品二区 | 久热爱精品视频在线9| 欧美人与性动交α欧美软件| 欧美日韩国产mv在线观看视频| √禁漫天堂资源中文www| 91麻豆av在线| 欧美丝袜亚洲另类 | 午夜福利免费观看在线| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲成人免费av在线播放| 免费在线观看影片大全网站| 色哟哟哟哟哟哟| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产视频一区二区在线看| 老司机亚洲免费影院| 丝袜美足系列| 91精品国产国语对白视频| 免费在线观看日本一区| 亚洲色图综合在线观看| 午夜免费鲁丝| 久久青草综合色| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 最新美女视频免费是黄的| 国产精品一区二区免费欧美| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 欧美中文日本在线观看视频| 国产麻豆69| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| bbb黄色大片| 操出白浆在线播放| 免费在线观看黄色视频的| 人人妻人人澡人人看| 中文字幕人妻熟女乱码| 在线观看日韩欧美| 日韩有码中文字幕| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产熟女午夜一区二区三区| 久99久视频精品免费| 女警被强在线播放| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 十八禁人妻一区二区| 十八禁人妻一区二区| 国产色视频综合| 男人操女人黄网站| 99热国产这里只有精品6| 日韩有码中文字幕| 三级毛片av免费| 99久久精品国产亚洲精品| 色婷婷av一区二区三区视频| 女人被狂操c到高潮| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲免费av在线视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产成人欧美在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 精品久久久久久成人av| 麻豆av在线久日| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 一区在线观看完整版| 一区在线观看完整版| 国产成人av教育| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲精品国产一区二区精华液| 在线播放国产精品三级| 91老司机精品| 在线观看免费高清a一片| 久久精品国产综合久久久| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产精品国产高清国产av| 久热爱精品视频在线9| 亚洲精品国产区一区二| 波多野结衣高清无吗| 国产成人系列免费观看| 国产高清激情床上av| 午夜a级毛片| 少妇被粗大的猛进出69影院| 十八禁网站免费在线| 大陆偷拍与自拍| 久久久久久久精品吃奶| 久久久久九九精品影院| 久久久国产成人免费| av片东京热男人的天堂| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 久久国产亚洲av麻豆专区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 午夜福利影视在线免费观看| av免费在线观看网站| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 自线自在国产av| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 岛国视频午夜一区免费看| 午夜福利免费观看在线| 交换朋友夫妻互换小说| 真人一进一出gif抽搐免费| 99香蕉大伊视频| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲欧美精品综合久久99| 欧美久久黑人一区二区| 麻豆一二三区av精品| 日韩精品中文字幕看吧| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 动漫黄色视频在线观看| 手机成人av网站| av免费在线观看网站| 好男人电影高清在线观看| 一a级毛片在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 一夜夜www| 制服诱惑二区| 国产97色在线日韩免费| av天堂久久9| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 在线天堂中文资源库| 在线观看日韩欧美| netflix在线观看网站| 国产精品99久久99久久久不卡| 午夜视频精品福利| 免费看a级黄色片| 午夜福利一区二区在线看| 久久精品人人爽人人爽视色| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产极品粉嫩免费观看在线| 高清av免费在线| 黄色怎么调成土黄色| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 女警被强在线播放| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 欧美最黄视频在线播放免费 | 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产91精品成人一区二区三区| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 午夜免费成人在线视频| 亚洲成人国产一区在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲一区高清亚洲精品| 我的亚洲天堂| 激情在线观看视频在线高清| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 涩涩av久久男人的天堂| 欧美激情 高清一区二区三区| 日韩欧美免费精品| 桃红色精品国产亚洲av| 在线观看日韩欧美| 男女高潮啪啪啪动态图| 搡老熟女国产l中国老女人| 动漫黄色视频在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 国产野战对白在线观看| 国产精品 国内视频| 99精品在免费线老司机午夜| 美女福利国产在线| 久久久久亚洲av毛片大全| a在线观看视频网站| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久国产乱子伦精品免费另类| 1024视频免费在线观看| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲国产看品久久| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久影院123| 亚洲伊人色综图| 99riav亚洲国产免费| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲自拍偷在线| 成人黄色视频免费在线看| 国产成+人综合+亚洲专区| 日韩欧美国产一区二区入口| 五月开心婷婷网| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美大码av| a级毛片黄视频| 无遮挡黄片免费观看| 精品乱码久久久久久99久播| 极品教师在线免费播放| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 人人澡人人妻人| 欧美性长视频在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产黄a三级三级三级人| 大型av网站在线播放| 色婷婷av一区二区三区视频| 看免费av毛片| 丰满饥渴人妻一区二区三| av欧美777| av在线天堂中文字幕 | aaaaa片日本免费| 国产99久久九九免费精品| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美在线黄色| 国产av精品麻豆| 99精品久久久久人妻精品| 中文字幕色久视频| 又黄又粗又硬又大视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 天堂动漫精品| 亚洲黑人精品在线| 精品久久久久久电影网| 亚洲中文日韩欧美视频| 欧美日韩精品网址| 午夜免费成人在线视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 久久久久久久久中文| 亚洲 国产 在线| 在线观看一区二区三区| 午夜福利在线观看吧| 大码成人一级视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 999久久久国产精品视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲一区中文字幕在线| 美女午夜性视频免费| 国产精品日韩av在线免费观看 | 国产午夜精品久久久久久| 亚洲五月婷婷丁香| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产视频一区二区在线看| 在线观看一区二区三区激情| 露出奶头的视频| 超色免费av| 天堂影院成人在线观看| av免费在线观看网站| 在线视频色国产色| 免费人成视频x8x8入口观看| 99在线视频只有这里精品首页| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| av免费在线观看网站| 国产又爽黄色视频| 露出奶头的视频| 亚洲欧美激情综合另类| 国产亚洲精品一区二区www| 国产精品综合久久久久久久免费 | 高清在线国产一区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲片人在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 中出人妻视频一区二区| 又黄又爽又免费观看的视频| 韩国精品一区二区三区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲欧美激情综合另类| 欧美最黄视频在线播放免费 | 免费在线观看完整版高清| 日日干狠狠操夜夜爽| 99久久综合精品五月天人人| 欧美激情久久久久久爽电影 | 免费在线观看日本一区| 热re99久久精品国产66热6| 久久香蕉国产精品| 成人黄色视频免费在线看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲 国产 在线| 99国产精品免费福利视频| 日韩有码中文字幕| 丝袜美足系列| 亚洲 国产 在线| 精品国产乱码久久久久久男人| 少妇的丰满在线观看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 精品一区二区三卡| av超薄肉色丝袜交足视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲国产欧美网| 亚洲美女黄片视频| 69av精品久久久久久| 在线观看免费高清a一片| 国产高清激情床上av| 操出白浆在线播放| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 91成人精品电影| 免费人成视频x8x8入口观看| 免费在线观看亚洲国产| 免费日韩欧美在线观看| 久久狼人影院| 久久香蕉激情| 美女福利国产在线| 国产av一区二区精品久久| 免费看十八禁软件| 丁香六月欧美| av中文乱码字幕在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 级片在线观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产一区二区激情短视频| 精品国产一区二区久久| 看黄色毛片网站| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲国产欧美一区二区综合| www.精华液| 丁香六月欧美| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 精品无人区乱码1区二区| 美国免费a级毛片| av在线播放免费不卡| 男人操女人黄网站| 欧美最黄视频在线播放免费 | 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲五月天丁香| 国产高清videossex| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 99精国产麻豆久久婷婷| 精品欧美一区二区三区在线| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 日日爽夜夜爽网站| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 99国产精品一区二区蜜桃av| 怎么达到女性高潮| 欧美日本亚洲视频在线播放| 午夜福利在线观看吧| 一级毛片高清免费大全| 波多野结衣av一区二区av| 日韩人妻精品一区2区三区| av国产精品久久久久影院| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 日本wwww免费看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品九九99| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲精品国产精品久久久不卡| e午夜精品久久久久久久| 妹子高潮喷水视频| 国产精品一区二区三区四区久久 | 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产三级在线视频| 一级,二级,三级黄色视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产又色又爽无遮挡免费看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| av电影中文网址| 亚洲,欧美精品.| 成人手机av| 欧美日韩av久久| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 又黄又爽又免费观看的视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲欧美激情在线| av在线天堂中文字幕 | av电影中文网址| 免费av毛片视频| 少妇的丰满在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美激情高清一区二区三区| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产又色又爽无遮挡免费看| 亚洲avbb在线观看| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲七黄色美女视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 高清黄色对白视频在线免费看| 成年版毛片免费区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 激情在线观看视频在线高清| 成在线人永久免费视频| 免费观看精品视频网站| 国产又色又爽无遮挡免费看| 久9热在线精品视频| 亚洲色图av天堂| 五月开心婷婷网| 国产精品一区二区免费欧美| 最好的美女福利视频网| 91国产中文字幕| 9热在线视频观看99| 久久香蕉国产精品| 怎么达到女性高潮| 国产又色又爽无遮挡免费看| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产免费现黄频在线看| 制服人妻中文乱码| 国产野战对白在线观看| 国产成人av教育| 又紧又爽又黄一区二区| 日本a在线网址| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 一级作爱视频免费观看| av免费在线观看网站| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 91精品国产国语对白视频| 亚洲精品一二三| 成人国语在线视频| 嫩草影视91久久| 男人的好看免费观看在线视频 | 国产99久久九九免费精品| 国产免费av片在线观看野外av| 国产亚洲欧美98| 18禁观看日本| 黄片大片在线免费观看| 亚洲av五月六月丁香网| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 巨乳人妻的诱惑在线观看| 极品人妻少妇av视频| 身体一侧抽搐| 母亲3免费完整高清在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 韩国精品一区二区三区| 午夜免费激情av| 又紧又爽又黄一区二区| 日本免费a在线| 美国免费a级毛片| 国产一区二区三区综合在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产麻豆69| 自线自在国产av| 中文欧美无线码| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产伦人伦偷精品视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| av有码第一页| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 99久久综合精品五月天人人| 久久欧美精品欧美久久欧美| 日本一区二区免费在线视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 桃红色精品国产亚洲av| www日本在线高清视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 窝窝影院91人妻| 88av欧美| 黄色a级毛片大全视频| 免费av毛片视频| av天堂久久9| 亚洲片人在线观看| 久久伊人香网站| 精品一品国产午夜福利视频| av网站在线播放免费| 啦啦啦免费观看视频1| 91麻豆av在线| 国产成人系列免费观看| 精品欧美一区二区三区在线| 国产三级在线视频| www国产在线视频色| av中文乱码字幕在线| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 麻豆国产av国片精品| 老司机靠b影院| 久9热在线精品视频| 动漫黄色视频在线观看| 欧美色视频一区免费| 在线观看www视频免费| 久9热在线精品视频| 超碰97精品在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 激情视频va一区二区三区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 一二三四在线观看免费中文在| a在线观看视频网站| 久久香蕉精品热| 国产欧美日韩一区二区精品| 久久精品91蜜桃| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 动漫黄色视频在线观看|