常州市某血站集中化血液檢測(cè)前后情況回顧性分析

施克飛

“血液安全”是血站永恒的主題，而血液檢測(cè)則是保障“血液安全”的重要手段，近幾年隨著檢測(cè)技術(shù)的提高，NAT檢測(cè)廣泛用于血液檢測(cè)，常州中心血站作為衛(wèi)生部指定15所核酸檢測(cè)技術(shù)（nucleic aciddetection technology，NAT）檢測(cè)試點(diǎn)采供血機(jī)構(gòu)之一，從2010年4月開始對(duì)采集的無償獻(xiàn)血者血液進(jìn)行HBV、HCV和HIV的NAT檢測(cè)［1］。由于NAT檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求較高，對(duì)于大多數(shù)基層血站而言，無論是從人員、設(shè)備、技術(shù)和資金等方面尚不能達(dá)到開展NAT檢測(cè)的要求，所以只有通過集中化檢測(cè)，充分利用中心血站檢測(cè)平臺(tái)的優(yōu)勢(shì)。溧陽分站于2015-05-13起將所采集的無償獻(xiàn)血血液標(biāo)本由分站自行完成2遍ELISA檢測(cè)后將檢測(cè)合格的標(biāo)本送常州市中心血站做NAT檢測(cè)，最終檢測(cè)報(bào)告由分站匯總中心血站的NAT檢測(cè)結(jié)果再進(jìn)行發(fā)布。該文收集了溧陽分站實(shí)行NAT集中化檢測(cè)后NAT的血液篩查結(jié)果和實(shí)行全面集中化檢測(cè)前后分站與中心血站ELISA檢測(cè)結(jié)果以及不規(guī)則抗體的檢出情況，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源NAT集中化檢測(cè)后NAT的血液篩查結(jié)果所收集數(shù)據(jù)為2015-05-13—2018-05-12溧陽分站經(jīng)2遍ELISA檢測(cè)合格無償獻(xiàn)血血液標(biāo)本共22578例；全面集中化檢測(cè)前后分站與中心血站血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果比較所收集數(shù)據(jù)為2014-04-26—2018-04-25溧陽分站無償獻(xiàn)血血液標(biāo)本共30983例。

1.2 主要儀器分站為：E-STAR酶免一體機(jī)；中心血站為：瑞士Tecan全自動(dòng)加樣儀，F(xiàn)AME全自動(dòng)酶免分析儀，漢泰、奧斯邦STAR-BG全自動(dòng)血型分析儀。NAT檢測(cè)系統(tǒng)為科化和羅氏核酸檢測(cè)系統(tǒng)。

1.3 試劑分站ELISA檢測(cè)試劑為北京萬泰和廈門新創(chuàng)；中心血站ELISA檢測(cè)試劑為北京萬泰、廈門新創(chuàng)、上?？迫A、珠海麗珠。NAT檢測(cè)試劑為上?？迫A和羅氏。所有檢測(cè)試劑均在有效期內(nèi)且批檢合格。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)所有操作均嚴(yán)格按《血站技術(shù)操作規(guī)程》（2015版）和試劑說明書操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 溧陽分站NAT檢測(cè)結(jié)果溧陽分站于2015-05-13起將所采集的無償獻(xiàn)血血液經(jīng)2遍ELISA檢測(cè)合格的標(biāo)本送常州市中心血站進(jìn)行NAT檢測(cè)。2015-05-13—2018-05-12共22578例標(biāo)本中仍有35例NAT陽性，陽性率為0.16%，35例中29例（82.86%）為 HBV-DNA；只有 1例（2.86%）為 HIVRNA且經(jīng)CDC確證試驗(yàn)HIV-1抗體陽性，還有5例（14.28%）因羅氏一代試劑未能檢出具體項(xiàng)目。見表1。

2.2 溧陽分站集中化檢測(cè)前后的ELISA檢測(cè)、不規(guī)則抗體檢出情況比較于2016-04-26起將所采集的無償獻(xiàn)血血液標(biāo)本送常州市中心血站完成所有項(xiàng)目的檢測(cè)。該文就集中化檢測(cè)前后的ELISA檢測(cè)結(jié)果、不規(guī)則抗體檢出情況進(jìn)行了比較。集中化檢測(cè)前分站ELISA陽性檢出率為1.44%，集中化檢測(cè)后中心血站ELISA陽性率檢出率0.97%，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=14.19，P＜0.05）；且集中化檢測(cè)前后ELISA陽性率有差異主要因HBsAg和抗-HCV陽性檢出率存在差異（集中化檢測(cè)前后HBsAg陽性檢出率 χ2=4.58，P＜0.05， 抗-HCV 陽性檢出率 χ2=23.34，P＜0.05），而集中化檢測(cè)前后抗-HIV 和抗-TP陽性檢出率則無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （集中化檢測(cè)前后抗-HIV 陽性檢出率 χ2=0.45，P＞0.05， 抗-TP陽性檢出率χ2=0.71，P＞0.05）。集中化檢測(cè)前分站不規(guī)則抗體陽性檢出率為0.007%，集中化檢測(cè)后中心血站不規(guī)則抗體陽性檢出率0.045%，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.33，P＜0.05）。 見表 2。

表 1 集中化檢測(cè)后（2015-05-13—2018-05-12）溧陽分站NAT血液篩查結(jié)果［例（%）］

表 2 集中化檢測(cè)前后溧陽分站和常州中心血站ELISA和不規(guī)則抗體檢測(cè)結(jié)果情況［例（%）］

3 討論

3.1 NAT檢測(cè)結(jié)果分析由表1可見，雖然經(jīng)過2遍ELISA檢測(cè)傳染性指標(biāo)檢測(cè)合格，但是由于病毒變異、窗口期等原因仍有一些是用ELISA技術(shù)不能檢出的病毒，仍有一定程度輸血感染病毒的風(fēng)險(xiǎn)。近年來報(bào)道由于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法 （enzymelinked immuno sorbent assay，ELISA）檢測(cè)“窗口期”等原因所致的HBV、HCV、HIV 漏檢率分別為幾萬分之一、幾十萬分之一、幾 百萬分之一［2-6］。而NAT檢測(cè)能有效降低輸血后病毒感染發(fā)生率，可將輸血傳播HBV、HCV和HIV的窗口期由原來的56 d、70 d、22 d 縮短 41 d、21 d 和 11 d［7］。在 35 例 NAT 陽性中 29例 （82.86%） 為 HBV，1例 （2.86%）HIV，無HCV。分析可能有以下幾點(diǎn)原因：一是我國(guó)屬于肝炎高發(fā)區(qū)，人群中HBsAg攜帶率達(dá)到9.09%［8］；二是因?yàn)镈NA病毒較RNA病毒穩(wěn)定，RNA病毒易被降解，HCV病毒最好的保存條件為-20℃以下。室溫或4℃保存HCV RNA水平會(huì)有一定程度的下降，而DNA則相對(duì)較容易檢出［9］。三是因四代HIV抗體 ELISA較三代試劑增加了P24抗原的檢出，縮短了檢測(cè)“窗口期”，提高了HIV抗體 ELISA的陽性檢出率。盡管NAT從理論上并不能完全消除感染“窗口期”，但是病毒核酸轉(zhuǎn)陽之前的血液傳染性極低，可以有效地預(yù)防經(jīng)輸血傳播病毒性疾病［10］。

3.2 ELISA和不規(guī)則抗體陽性檢出率存在差異原因分析集中化檢測(cè)前后分站與中心血站ELISA和不規(guī)則抗體陽性檢出率存在差異（集中化檢測(cè)前后 ELISA 陽性檢出率 χ2=14.19，P＜0.05；集中化檢測(cè)前后不規(guī)則抗體陽性檢出率χ2=4.33，P＜0.05）。分析原因可能是分站與中心血站檢測(cè)技術(shù)存在差異：（1）檢驗(yàn)人員：實(shí)驗(yàn)室人員的專業(yè)性、成熟度和技術(shù)水平很大程度取決于檢驗(yàn)人員結(jié)構(gòu)。學(xué)歷、技術(shù)職稱可以在一定程度上反應(yīng)檢驗(yàn)人員的專業(yè)水平，規(guī)模較大實(shí)驗(yàn)室工作人員本科以上學(xué)歷占比要比中小規(guī)模實(shí)驗(yàn)室高5.1%，這與這前對(duì)于血站和實(shí)驗(yàn)室人力資源調(diào)查的情況一致［11-13］。中心血站檢驗(yàn)人員有12～14人且初始學(xué)歷大多為本科；而分站檢驗(yàn)人員只有3～4人且初始學(xué)歷大多為中專，所以中心血檢驗(yàn)人員無論是從數(shù)量還是專業(yè)技術(shù)方面都優(yōu)于分站，他們對(duì)于問題的處理解決能力較強(qiáng)，對(duì)于檢測(cè)結(jié)果能更好地進(jìn)行分析判斷。（2）儀器設(shè)備：檢驗(yàn)設(shè)備是完成血液篩查工作必備的工具、其性能的優(yōu)劣、運(yùn)行狀態(tài)的好壞直接影響血液檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，左右著血液的質(zhì)量［14］。中心血站用于酶免檢測(cè)的設(shè)備為瑞士Tecan全自動(dòng)加樣儀和FAME全自動(dòng)酶免分析儀各2臺(tái)，這樣不僅能做到初復(fù)檢充分分開檢測(cè)，同時(shí)能保證在設(shè)備故障時(shí)能有應(yīng)急設(shè)備；分站只有1臺(tái)E-STAR一體機(jī)，不能做到初復(fù)檢分開檢測(cè)，且在檢測(cè)過程中故障頻率較高，故障會(huì)導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)中斷只能轉(zhuǎn)手工操作，易引起人為差錯(cuò)。即使能繼續(xù)實(shí)驗(yàn)也導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)孵育時(shí)間延長(zhǎng)，從而假陽性增加。分站血型檢測(cè)為手工操作，雖然反定型也進(jìn)行了O細(xì)胞檢測(cè)，但是因肉眼觀察結(jié)果，容易漏檢。中心血站則有漢泰和奧斯邦STARBG全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，在實(shí)驗(yàn)過程的監(jiān)控和結(jié)果判讀方面均優(yōu)于手工操作；同時(shí)中心血站的血型研究室是其堅(jiān)強(qiáng)的后盾，在血型檢測(cè)過程中出現(xiàn)正反定型不符、O細(xì)胞凝集等情況均送往血型研究室做進(jìn)一步檢查后再發(fā)出報(bào)告。血型不規(guī)則抗體大部分為IgG類抗體，試管抗人球蛋白法凝聚胺法并不能檢出所有IgG類血型抗體［15］。不規(guī)則抗體陽性患者再次輸入含有相應(yīng)抗原的血液成分時(shí)會(huì)刺激免疫系統(tǒng)出現(xiàn)抗原抗體反應(yīng)，出現(xiàn)輸血不良反應(yīng)，輕者出現(xiàn)寒戰(zhàn)、發(fā)熱，重者可破壞紅細(xì)胞，出現(xiàn)溶血性輸血反應(yīng)，引發(fā)無效輸血對(duì)患者的生命造成威脅［16］。所以只有輸血研究室這樣專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室才具有相應(yīng)的檢測(cè)能力，最大程度降低由此引起的輸血不良反應(yīng)。（3）檢測(cè)頻次：分站每周2～3次，對(duì)于灰區(qū)復(fù)查的標(biāo)本只能手工操作，手工操作在加樣、洗板等過程中受人為因素影響較大。中心血站則每天檢測(cè)，對(duì)于灰區(qū)復(fù)查的標(biāo)本只需隨次日的標(biāo)本一起檢測(cè)，使得復(fù)查標(biāo)本與第一次檢測(cè)條件相同，從而更好地確保檢測(cè)結(jié)果。

3.3 集中化檢測(cè)前后ELISA陽性率存在差異原因分析集中化檢測(cè)前后ELISA陽性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義主要是因HBsAg和抗-HCV陽性檢出率存在差異引起的，這與許建榮等［17］的報(bào)道相符，分析可能有以下幾點(diǎn)原因：（1）在結(jié)果判定方面：HBsAg和抗-HCV的“灰區(qū)”設(shè)定為S/CO的0.5～1.0，而抗-HIV和抗-TP為S/CO的0.8～1.0。這樣設(shè)定的目的是為了減少弱陽標(biāo)本的漏檢，國(guó)內(nèi)許多血站將ELISA血液篩查試驗(yàn)盒的陽性判斷值（S/CO）下移，即設(shè)置“灰區(qū)”，下移的范圍50%～80%，但是ELISA“灰區(qū)”設(shè)置一直存在爭(zhēng)議其設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)或范圍也并無依據(jù)或做過驗(yàn)證。隨著ELISA檢測(cè)試劑質(zhì)量的不斷改進(jìn)，實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的不斷完善，“灰區(qū)”設(shè)置的必要性需要做進(jìn)一步評(píng)估和驗(yàn)證［18］。 （2）E-STAR一次要完成初復(fù)檢4個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的8塊酶標(biāo)板，就存在“堵車現(xiàn)象”導(dǎo)致HBsAg和抗-HCV在檢測(cè)過程中因孵育時(shí)間延長(zhǎng)引起OD值增高。（3）灰區(qū)待復(fù)查標(biāo)本因是手工檢測(cè)，且抗-HCV檢測(cè)加樣量又少更易受人工加樣誤差影響。

從以上幾點(diǎn)可以看出中心血站的檢測(cè)技術(shù)明顯優(yōu)于分站，更能確保檢測(cè)質(zhì)量，從而保證輸血安全。

3.4 集中化檢測(cè)流程從2015-05-13起NAT集中化檢測(cè)開始至今已歷時(shí)三年多時(shí)間，已形成了相對(duì)固定的集中化檢測(cè)流程：（1）分站負(fù)責(zé)血液標(biāo)本的采集、留取及標(biāo)本檢測(cè)前的處理（按規(guī)定離心保存）；（2）由分站負(fù)責(zé)在“穿越信息系統(tǒng)”內(nèi)進(jìn)行集中檢測(cè)批次標(biāo)本信息的錄入，并生成“內(nèi)部調(diào)撥單”，由交接雙方簽字，一式兩份雙方各保存一份；（3）按既定的送檢時(shí)間（每周一、周五下午16：30之前和每周三早上8：00之前送達(dá)中心血站）由分站專職駕駛員按送檢要求對(duì)標(biāo)本進(jìn)行包裝、運(yùn)輸；（4）中心血站根據(jù)“內(nèi)部調(diào)撥單”的信息對(duì)標(biāo)本進(jìn)行核對(duì)以確保實(shí)物和送檢單上的內(nèi)容一致；（5）中心血站按要求對(duì)送檢標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，并在“穿越系統(tǒng)”內(nèi)發(fā)布報(bào)告，分站可以在信息系統(tǒng)讀取電子報(bào)告，并在每次送標(biāo)本時(shí)帶回上次的紙質(zhì)報(bào)告；（6）有特殊情況雙方隨時(shí)聯(lián)系溝通解決。

綜上所述，分站依托較大的血站推進(jìn)集中化檢測(cè)進(jìn)程，可以較好地利用規(guī)模效應(yīng)減少人員的重復(fù)設(shè)置，提高中小血站的采供血效率［19］，同時(shí)中心血站檢測(cè)技術(shù)方面較分站有著極大的優(yōu)勢(shì)，分站充分利用中心血站檢測(cè)平臺(tái)的優(yōu)勢(shì)實(shí)現(xiàn) “成本/效率”體系最優(yōu)化，更能確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，最大程度降低輸血感染病毒的風(fēng)險(xiǎn)，確保區(qū)域內(nèi)輸血安全，且經(jīng)過實(shí)踐是可行的，所以實(shí)行集中化檢測(cè)是必要的、可行的。